实验性肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-2基因及蛋白表达阻断研究

目的:探讨以TIMP-2为靶基因,应用反义寡核苷酸 (asON)技术抑制其在肝组织中的表达对大鼠肝纤维化发展的影响．方法:22只大鼠分为治疗组(n=6)、模型组(n=6)和正常对照组(n=10)．以人血白蛋白免疫攻击方法制备免疫诱导型肝纤维化大鼠模型．模型制备过程中,治疗组大鼠以尾静脉注射方式给予针对TIMP-2的硫代反义寡核苷酸．RT-PCR、原位杂交、免疫组化、ELISA 等方法检测TIMP-2的转录以及表达水平．用病理学检查以及Ⅰ、Ⅳ型胶原的免疫组化结果分析肝纤维化发展程度．通过胶原纤维特殊染色及电镜等观察asON对大鼠肝纤维化的影响．结果:治疗组病理学分级状况优于模型组(u=2．071, P<0．05)．治疗组血清TIMP-2低于模型组(T=55, P<0．05),高于正常对照组(T=55,P<0．05)．治疗组肝组织TIMP-2 mRNA表达弱于模型组(t=3．332,P<0．05), 高于正常对照组(t=5．550,P<0．05)．Ⅳ型胶原免疫组化图像定量分析结果显示,治疗组与模型组有显著差异(t =2．310,P<0．05),其表达较低,但仍高于正常对照组(t= 3．623,P<0．05)．治疗组Ⅰ型胶原免疫组化图像扫描结果与模型组相比,其数值亦较低(t=2．845,P<0．05)．治疗组肝窦基底膜胶原沉积较轻,与模型组无明显差异．结论:抑制TIMP-2在肝组织中的表达可以减缓大鼠肝纤维化发展．