慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗前后自然杀伤细胞CD100表达水平变化

目的观察慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗前后外周血中NK细胞、NK细胞亚群百分率及活化因子CD100表达水平变化。方法流式细胞术检测慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者外周血中NK细胞、NK细胞亚群频率及膜型CD100表达水平;ELISA检测血清中可溶性CD100水平;采用Spearman相关检验分析CD100与谷丙转氨酶(ALT)、HCV-RNA之间的相关性。结果与健康对照组相比,慢性HCV感染患者CD56dimNK亚群百分率降低,而CD56neg亚群比率升高(P<0.05);抗病毒治疗后获得早期病毒学应答(EVR)者,CD56bright亚群百分率升高,CD56neg亚群比率显著降低(P<0.05);停药后获得持续性病毒学应答(SVR)者,总NK细胞及亚群频率恢复正常。与健康对照组相比,慢性HCV感染患者血清中sCD100水平显著降低(P<0.05);膜型CD100表达轻度降低,但无统计学差异;经抗病毒治疗获得EVR者,sCD100及膜型CD100水平均显著升高(P<0.05),获得SVR者又降至正常水平。Spearman相关性分析发现,NK细胞CD100表达与ALT水平呈正相关,与HCV-RNA滴度呈负相关(P<0.05)。结论 CD100表达降低与HCV持续感染有一定关系,并参与NK细胞对HCV清除。

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

汉滩病毒西安分离株84FLiM片段的克隆

目的:克隆汉滩病毒84FLi株M片段的cDNA.方法:提取病毒总RNA,反转录为cDNA模板,用高保真的Taq酶扩增出G1和G2两个糖蛋白编码的基因片段:84M2.0(1～2058)和84M1.6(1964～3616).将这两个片段分别与T载体pMD18T连接,转化感受态大肠杆菌后获得两个分别为G1和G2编码的克隆pMD84M2.0和pMD84M1.6.再利用酶切连接的方法获得M片段全序列的cDNA克隆.结果:获得两个分别为G1和G2糖蛋白序列编码的克隆,进而酶切组装为含有M片段全序列的cDNA克隆.结论:获得了84FLi株M片段全序列的cDNA克隆.

第十一讲 糖皮质激素在治疗重型肝炎中的应用及评价

本专题讲座 ,由我刊副总编辑聂青和博士组稿并承担多讲的撰稿 ,共 1 4讲 ,约 6万 8千字。第一讲重型肝炎的临床分型及诊断标准 (周永兴 ) ;第二讲重型病毒性肝炎的病理学特点及研究现状(郎振为 ) ;第三讲内毒素血症在重型肝炎发病中的地位 (聂青和 ) ;第四讲重型肝炎实验室检测的临床意义 (罗新栋 ,聂青和 ) ;第五讲重型肝炎并发肝性脑病的诊治进展 (聂青和 ,毛青 ) ;第六讲重型肝炎并发上消化道出血的诊治进展 (申德林 ,王全楚 ,焦栓林 ) ;第七讲重型肝炎并发肝肾综合征的诊治进展(焦成松 ,聂青和 ) ;第八讲重型肝炎并发自发性细菌性腹膜炎的诊治进展 (张成道 ,王全楚 ,聂青和 ) ;第九讲重型肝炎的综合支持治疗 (宋喜秀 ) ;第十讲重型乙型肝炎的抗病毒治疗新进展 (江河清 ) ;第十一讲糖皮质激素在治疗重型肝炎中的应用及评价 (张绪清 ,聂青和 ) ;第十二讲重型肝炎水、电解质紊乱和酸碱失衡的诊断与治疗 (张绪清 ,聂青和 ) ;第十三讲重型肝炎的人工肝支持治疗 (王英杰 ) ;第十四讲重型肝炎的外科治疗———肝移植 (管文贤 )。参加本讲座撰稿者 ,均为在第一线工作的专家教授 ,他们根据自身的工作实践 ,参考最新的国内外文献撰写 ,内容丰富 ,涵盖重型肝炎的方方面面 ,文字精练 ,语言流畅 ,实用性强 ,是医?