负压封闭引流在创伤骨科中的应用

目的评价负压封闭引流（vacuumsealingdrainage，VSD）技术在创伤骨科中的临床应用效果。方法该科2009年8月～2012年8月收治的四肢严重软组织损伤患者85例，均行急诊清创、创面VSD负压吸引术：从术后感染控制、局部肉芽组织生长及皮瓣（片）成活情况等方面全面综合评价该方法的临床应用效果。结果全组85例创面一次负压吸引术后感染率7．1％，二次手术后感染率2．3％，三次手术后感染全部得到控制；原位反植皮结合VSD术16例术后全部成活，皮肤软组织缺损的69例中经一次VSD术后肉芽组织生长良好者56例，二次手术者5例，三次手术者4例，4例小腿骨筋膜室综合征患者直接缝合，65例患者待感染控制及肉芽组织生长丰富后分别给予游离植皮或皮瓣修复术，术后游离皮片及皮瓣均全部成活。结论VSD能安全有效地封闭创面，避免感染的发生，同时能促进创面肉芽组织生长，为后期植皮或皮瓣转移创造良好条件。

成骨肉瘤细胞SOSP-9607中miRNA的克隆与验证

背景与目的:microRNA(miRNA)是一类非编码蛋白,并参与转录后调节的单链小分子RNA(约20～25个碱基),对基因表达具有重要调控作用,与肿瘤的发生存在着密切的关系。本研究拟克隆成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中miRNA,并对部分功能性基因进行验证。方法:以SOSP-9607细胞作为实验对象,分离提取细胞内小片段RNA(≤200nt),多聚腺苷酸化和5′连接子连接后,通过RT-PCR进行反转录和扩增,克隆到pCR4-TOPO载体上得到大约109bpDNA片段,测序后经过生物信息学分析确定miRNA的表达情况。根据当前miRNA的研究现状,在克隆到的miRNA中选取部分功能性miRNA和新发现miRNA,合成相应探针后与从SOSP-9607细胞、HeLa细胞和成骨肉瘤组织中分离出的小片段RNA进行Northern印迹验证。结果:克隆测序后得到182个克隆体,经生物信息学分析发现有47个miRNA(25种),其中含有23种已知的miRNA和2种Nature杂志上预测的miRNA(miR-165和miR-166)。选取的三条实体瘤相关的miRNA(miR-21、miR-20a、miR-17-5p)以及两条预测的miRNA进行Northern印迹验证,miR-21、miR-20a、miR-17-5p在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中均表达,预测的miR-165和miR-166在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中亦均表达,但miR-166在HeLa细胞中没有表达。结论:克隆了SOSP-9607细胞中的miRNA,并验证了部分功能性miRNA的表达,提示miRNA与肿瘤发生可能有密切的关系。

骨形态发生蛋白复合材料修复兔皮质骨缺损

目的通过磷酸钙骨水泥(CPC)复合同种异体脱钙骨基质颗粒(DBM)及骨形态发生蛋白(bBMP)修复皮质骨缺损,探讨其对骨缺损的修复情况。方法在兔前肢桡骨制作长1cm的骨缺损,填充CPC与复合bBMP异体同种的DBM的复合物,应用大体标本观察、X线摄片、组织学观测、印度墨汁灌注等方法观察其对骨缺损的修复情况,对侧以单纯的CPC做对照。结果第2周开始复合材料组有血管长入,第4周X线片上显示可见、骨痂形成,12周后,复合材料与两端的骨质愈合良好,局部板层骨致密,哈夫氏系统排列整齐。结论磷酸钙骨水泥复合bBMP及同种异体脱钙骨颗粒修复、皮质骨缺损有较好的效果。

牛煅烧骨颗粒复合骨水泥的生物力学性能评定

目的 分析不同质量比的牛煅烧骨颗粒复合骨水泥结构特征及生物力学性能。方法 把提取过 bBMP的牛骨颗粒制成煅烧骨，以不同的质量比与骨水泥混合制成复合材料，测定其生物力学性能与电镜下结构。结果 复合材料呈均匀混合分布并多点状结合，其中存在较多的裂隙；含牛煅烧骨颗粒质量比为 500mg/g的复合材料的生物力学性能最为适宜。结论 牛煅烧骨颗粒复合骨水泥后具有新骨长入的通道，含煅烧骨质量比为 500mg/g的复合材料生物力学性能良好，能作为支架材料修复骨缺损。

靶向survivin的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的抑制作用

目的:探讨针对人survivin基因的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的体内外抑制作用。方法:合成survivin基因的RNA干涉(RNA interferance,RNAi)特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检测细胞生长情况;Western blotting检测细胞中survivin蛋白表达的变化;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡;观察裸鼠皮下MG63移植瘤的形成。结果:成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体pSiS,获得了稳定转染的细胞MG63/pSiS。与MG63、MG63/pSi(空质粒对照细胞)相比,MG63/pSiS细胞生长曲线十分平缓,差异有统计学意义(P<0.01);Western blotting显示,MG63/pSiS细胞中survivin蛋白表达减少,细胞凋亡率增加(P<0.01)。MG63/pSiS移植瘤形成明显受到抑制。结论:Survivin特异性siRNA可明显促进骨肉瘤细胞MG63的凋亡,抑制该肿瘤细胞体外生长和体内移植成瘤。

负压封闭引流在四肢软组织缺损及后期植皮中的疗效及护理体会

目的观察并总结封闭式负压引流(vacuum sealing drainage,VSD)技术在四肢软组织缺损及游离植皮中的疗效及护理体会。方法 2010年6月至2013年6月,应用VSD技术对60例四肢软组织缺损并后期进行游离植皮的患者进行治疗,并给予针对性的护理。结果 60例患者均至少随访至缺损愈合后3个月,所有患者创面均完全愈合,无复发,无局部及全身并发症。结论 VSD技术对于皮肤及软组织缺损的愈合能起到明显的促进作用,有效促进了肉芽的生长及游离皮片的成活,降低感染率和住院治疗时间,减轻患者痛苦和医护人员工作量,是治疗四肢软组织缺损及后期游离植皮安全有效的方法。

牛煅烧骨颗粒复合抗生素骨形态发生蛋白和骨水泥修复兔感染性骨缺损

目的探讨牛煅烧骨颗粒复合抗生素、bBMP和骨水泥修复感染性骨缺损的效果。方法将制成桡骨感染性骨缺损的24只新西兰兔随机分成3组，A组用煅烧骨和骨水泥修复；B组用煅烧骨复合bBMP和骨水泥修复；C组用煅烧骨复合抗生素、bBMP和骨水泥修复，术后不同时间进行X线、组织形态学、ECT观察，比较3组相同时间的成骨能力和修复方式。C组耳缘静脉取血测抗生素浓度。结果C组较A、B组成骨能力强,伤口愈合快,修复情况良好。B组的成骨能力略强于A组。结论牛煅烧骨是抗生素和bBMP的良好载体。复合后能缓慢释放抗生素和bBMP,此种复合材料既有成骨活性，又有抗炎作用，是修复感染性骨缺损的理想材料。

miRNAs在人骨髓间充质干细胞中的表达

目的观察miRNAs在人骨髓间充质干细胞(MSC)中的表达情况。方法以从骨髓中分离培养的人骨髓MSC为实验对象,分离提取细胞内小片段RNA(≤200nt),经多聚腺苷酸化和5'连接子连接后进行反转录,扩增克隆到得到大约109bp的DNA片段,测序后经生物信息学分析确定miRNAs的表达情况。选取部分miRNAs和新发现miRNAs,合成相应探针,与从人骨髓MSC、人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607和大鼠成骨肉瘤细胞系UMR-106中分离出的小片段RNA进行杂交验证(Northernblot)。结果成功从骨髓中分离培养出骨髓MSC,流式细胞仪检测93%以上的MSC表达CD44,但不表达CD34、CD45。从MSC中克隆测序得到194个克隆体,经生物信息学分析发现52个miRNAs(27种),其中包括26种已知的miRNAs和1种Nature杂志预测的miRNAs(PRE-DICTED-miR-202)。选取4条miRNAs(miR-495、miR-34a、miR-17-5p和PREDICTED-miR-202)进行Northernblot验证,发现它们均在MSC中表达。其中miR-34a和PREDICTED-miR-202只表达于MSC,miR-495在MSC和SOSP-9607中表达,miR-17-5p在3种细胞中均有表达。结论筛选出了在人骨髓MSC中表达的miRNAs,为miRNAs参与调控MSC的自我更新提供了依据,同时为miRNAs在干细胞中的潜在应用奠定了基础。

关节镜下关节清理术治疗膝骨关节炎

目的 :探讨关节镜下清理术治疗膝骨关节炎的疗效。方法 :自 1 999年 3月～ 2 0 0 2年 6月采关节镜下清理术治疗膝关节骨关节炎患者 1 2 5例 (1 70膝 )。结果 :平均随访 2 5个月 (6～ 48个月 ) ,优良率为 78.2 %。结论 :关节镜对于膝骨关节炎可做出明确诊断并确定病变程度 ,应根据术前临床表现有针对性的进行操作 。

颈椎后路一次性手术治疗颈椎管狭窄合并颈椎间盘突出

目的探讨颈椎管狭窄合并颈椎间突出一次性后路减压和髓核摘除的手术方法以及手术时应注意的问题。方法 :经颈椎后路摘除椎间盘 38例。局麻、俯卧位 ,颈椎后路单开门椎管扩大成形后 ,以病变间隙为中心 ,纵行切开硬脊膜 ,根据需要切断病变侧 2～ 3条齿状韧带 ,将脊髓轻轻向中线牵拉 ,摘除突出的髓核。结果 :38例中 35例获得平均 3年 2个月 (6个月～ 7年 10个月 )的随访 ,优 2 1例 ,良 11例 ,有效 3例 ,避免前、后路 2次手术 ,效果满意 ,但应选择好手术适应证 ,手术操作时应注意对脊髓和神经根的牵拉以及对齿状韧带与神经根的辨认等问题。

阿霉素异体脱钙骨基质骨粒骨水泥缓释体的制备及相关研究

目的 :研制阿霉素异体脱钙骨基质骨粒骨水泥缓释体 ,分析其缓释性能及对骨肉瘤细胞OS - 990 1的抑制能力。方法 :按Urist法制备异体脱钙骨基质骨粒 ,经冻干、真空吸附等处理 ,载入阿霉素与骨水泥按 1∶1复合 ,制得阿霉素异体脱钙骨基质骨粒骨水泥缓释体。对该缓释体行体内外药物释放及其浸出液的体外抑瘤试验。结果 :缓释体体外第 1d释放量为总的 19.2 3% ,其后在较低水平维持相对稳定的缓慢释放 ,持续释放 70d以上 ;其第 1、2 0、4 0、70d的浸出液对骨肉瘤细胞OS - 990 1的抑制率分别为 6 4 .2 7% ,4 1.6 8% ,2 8.71%及 2 4 .32 %。体内释药时 ,局部骨组织浓度高于血浆中浓度 ;局部骨组织早期浓度高 ,以后为稳定的低浓度释放。结论 :该缓释体具有良好的缓释功能 ,在 70d内对骨肉瘤细胞OS - 990 1维持良好有效的抑制率。

插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗肢体恶性或侵袭性骨肿瘤

评价插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗肢体恶性或侵袭性骨肿瘤保肢手术的临床应用．方法：应用插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗肢体恶性或侵袭性骨肿瘤19o例．从手术技术、肿瘤学、关节功能、并发症等方面全面综合评价此方法的临床应用效果．结果：恶性骨肿瘤134例，术后平均随访47mo，因远隔脏器转移死亡者32例，另有3例虽有肺部转移，但经转移病灶切除后现仍无瘤存活；存活率为74．2％；IO2例存活者中肢体关节功能优者72例，良者14例．骨巨细胞瘤56例，术后平均随访49mo，l例死于肺转移；3例局部复发，经行瘤段截除大段异体骨移植后治愈；35例关节功能属优，21例为良．结论：插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗骨肿瘤技术是一种创新的、有效安全的、临床效果显著的、治疗肢体恶性或侵袭性骨肿瘤的新手段，值得继续应用、改进和评价这一治疗体系．

骨盆环区域骨肿瘤的外科治疗

评价半骨盆截除术、内半骨盆切除体外灭活再植或单纯旷置术、插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活水治疗骨盆部骨肿瘤；部分切除术及前后联合入路局部刮除并辅助以局部单纯放疗或（和）置管持续灌注化疗术治疗舱骨肿瘤的效果．探讨骨盆环区域骨肿瘤的各种外科治疗方法的优缺点，以便更有效地治疗该部位肿瘤．方法：7a中外科治疗骨盆环区域各类良、恶性骨肿瘤146例，其中应用半骨盆截除术治疗晚期骨盆骨肿瘤44例；内半骨盆切除体外灭活再植或单纯旷置术治疗骨盆部骨肿瘤Ic例；插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活术治疗骨盆部骨肿瘤42例；部分切除术及前后联合入路局部刮除术后局部单纯放疗或（和）置管持续灌注化疗术治疗各类船骨肿瘤SO例．平均随访3a以上，从肿瘤学、肢体关节功能学、并发症等方面综合评价上述各种外科治疗方法的代、缺点．结果：44例半骨盆截除患者仅存活16例．仅有少数年轻患者术后可佩带假肢行走，但步态极差；内半骨盆截除后体外灭活再植或旷置水1o例患者中，复发1例；死亡2侧；感染3例；肢体关节功能优良率为4o％．应用插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗骨盆骨肿瘤42例；8例局部复发，其中5例死亡．其余34例中肢体关节功能25例为优。9例尚可．2例感染，1例坐骨神经热损伤．

针对Survivin基因的短发卡RNA诱导U251细胞凋亡

目的:观察针对Survivin基因的短发卡RNA(shRNA)对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在体外凋亡的影响。方法:对U251细胞,稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞,以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞,分别采用相差显微镜、HE染色、Hoechst染色、TUNEL染色以及透射电镜观察各组细胞的形态学特征;采用流式细胞术(FCM)定量测定各组细胞的凋亡细胞数量。结果:相差显微镜、HE染色、Hoechst染色、TUNEL染色以及透射电镜观察显示,U251-SR凋亡细胞明显增多,并呈现典型的细胞凋亡形态学改变;FCM定量分析凋亡细胞数量显示,与U251(2.1%)和U251-P(2.7%)相比,U251-SR凋亡细胞增加约6倍,达14.4%。结论:针对Survivin基因的shRNA能够在体外诱导U251细胞发生大量凋亡。

脊柱胸腰段不稳定骨折的手术治疗

探讨脊柱胸腰段不稳定骨折的手术治疗效果，并比较不同种类后路内固定方法的优缺点．方法：临床收治脊柱胸腰椎骨折患者256例，均采用后路内固定手术，包括Harrington棒、Edwards装置、改良Edwards系统、Dick钉和RF5种内固定装置，比较手术前后骨折复位（包括畸形角、矢状面位移、伤椎高度）以及神经功能恢复情况．结果：后凸畸形角由术前268”矫正到术后5．2”，矢状面位移由术前的29．9％纠正到术后的3．l％，压缩椎体高度由术前的53．2％恢复到术后的941％．不完全截瘫组术后神经功能有Frankell级以上改善的为gO．7％．在矫正后凸畸形角和恢复椎体高度方面以RF为最优；在纠正矢状面位移上以改良Edwards系统为最优．结论：开放复位后路内固定是治疗胸腰椎不稳定骨折的有效方法；内固定选择以RF为代表的经推弓根内固定较为理想．

microRNA-192抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-192抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-192抑制物(hsa-miR-192inhibitors)抑制SOSP_9607细胞内miR-192的活性。结果:与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性(P<0.01)。随着浓度从50nmol/L逐渐增加至200nmol/L,抑制率逐渐增高(P<0.01)。与对照组相比,实验组细胞周期G_0/G_1细胞比例显著增加,G_2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。实验组凋亡率(13.6±2.1)%与阴性对照组凋亡率(7.1±0.5)%相比明显增高(P<0.01)。结论:miR-192抑制物通过抑制SOSP_9607细胞中miR-192的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用,可能成为骨肉瘤生物治疗的新靶点。

青少年腰椎间盘突出症的诊断与治疗

目的 探讨青少年腰椎间盘突出症的诊断依据与治疗方法。方法 对 2 6例青少年腰椎间盘突出症患者的临床资料进行回顾性分析 ,根据其临床特征总结出诊断要点和有效的治疗方法。结果 青少年腰椎间盘突出症的诊断要点是 :1.一般都有明显的外伤史或先天畸形。 2 .临床症状轻、体征重。 3.临床检查和 X线片检查不易确诊和定位。 4.CT、MRI检查能明确诊断。非手术治疗效果差 ,胶原酶溶核和经皮穿刺抽吸疗效不理想 ,手术治疗优良率高。结论 青少年腰椎间盘突出症临床特征突出 ,CT、MRI有助于明确诊断 。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制骨肉瘤细胞增殖及其机制

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3 gallate,EGCG)对人骨肉瘤细胞增殖的影响及机制。方法:培养骨肉瘤细胞SOSP9607,加入EGCG制作细胞生长曲线;EGCG作用于人骨肉瘤SOSP9607细胞株,Hoechst染色检测细胞凋亡。RT-PCR及Western印迹法研究survivin的mRNA及蛋白表达的变化。结果:EGCG可明显抑制SOSP9607细胞的增殖,60μg/mL EGCG作用48h后,细胞出现明显的凋亡,凋亡率达到16.3%。同时骨肉瘤细胞中survivin mRNA和蛋白表达减少。结论:EGCG可抑制乳腺癌细胞的增殖,这可能与EGCG抑制了survivin表达有关。

胞壁酰二肽激活大鼠巨噬细胞抗肿瘤免疫效应的研究

目的:探讨胞壁酰二肽(MDP)激活大鼠巨噬细胞抗肿瘤效应的途径和机制。方法:以SD大鼠为骨肉瘤动物模型进行肿瘤抑制试验;采用中性红吞饮实验、间接MTT法及硝酸还原酶法,测定大鼠腹腔巨噬细胞的功能。结果:MDP(50μg～100μg/鼠)皮下注射可明显抑制UMR106骨肉瘤细胞在SD大鼠体内的生长,并可显著提高巨噬细胞的吞噬功能、杀伤活性及TNF和NO的分泌水平,且呈现一定的量效关系。结论:MDP激活的巨噬细胞可能是机体非特异性免疫抗瘤效应的主要基础。

miR-21真核表达载体的构建及其活性鉴定

目的:构建miR-21的真核表达载体,并使其在骨肉瘤MG63细胞中表达,为研究miR-21对骨肉瘤细胞MG63的作用打下基础。方法:根据miRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共433个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4连接到线性化的pcDNA3.1(+)质粒中,并对重组质粒进行双酶切、菌落PCR及测序分析,鉴定完全正确的重组质粒转染骨肉瘤细胞MG63,G418(400 mg/L)筛选4周获得miR-21稳定表达细胞系,用Northern blot及real time RT-RCR法鉴定pcDNA3.1(+)-miR-21可在真核细胞中过表达。结果:成功构建了miR-21的真核表达载体,并获得稳定转染重组质粒的细胞系。结论:miR-21的真核表达载体在骨肉瘤细胞MG63中稳定高表达,为进一步研究miR-21在骨肉瘤MG63中的功能及基因调控机制奠定了实验基础。