人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的 体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞 ,观察其生物学特性 ,探讨丙型肝炎病毒 (HCV)经胎盘母婴传播的具体途径 .方法 采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织 ,以 35 % ,4 5 %两个 Percoll密度梯度进行分离纯化 .并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察 .HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞 ,通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测 ,以观察 HCV的感染及复制情况 .结果 胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性 ,血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性 ,经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者 (滋养层细胞 )占 90 %以上 ,电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态 .HCV感染细胞培养 16 d内培养上清中可间断检测出 HCV RNA.结论 改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞 ,HCV感染胎盘滋养层细胞可能是 HCV宫内母婴传播的途径之一 .

IL-12及HBV基因疫苗共同免疫小鼠的效果

目的 观察编码鼠IL-12的真核表达载体对HBV DNA疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的影响。 方法 肌肉注射DNA疫苗,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h ^(51)Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性。 结果 免疫8wk后,注射pCR3.1组、注射pCR3.1-S组及共注射IL-12真核表达载体的血清A(OD值)分别为0.04±0.01,0.87±0.1及1.67±0.15。CTL细胞杀伤活性分别为10.1％±6.4％,50.5％±6.4％及73.3％±8.8％,后两组与pCR3.1组比较均有显著差异(P<0.01),后两组比较均有显著差异(P<0.01).脾细胞悬液经抗CD4^+单克隆抗体处理后分别为48.3％±5.9％,75.6％±9.1％,抗CD8^+单克隆抗体处理后分别为10.6％±1.4％,16.9％±2.3％。 结论 IL-12的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答,CTL细胞杀伤活性主要由CD8^+执行。基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染。

输血传播病毒TTV致病性的探讨

目的 通过病例对比 ,进一步研究 TTV是否有致病性 ;对 1例西安地区非甲 -非戊型肝炎但血清 TTV阳性患者套式 PCR终产物纯化测序 ,在验证我们 TTV DNA检测正确性的同时初步研究西安地区 TTV流行株部分分子生物学特点 .方法 在 TTV ORF1区参照文献 [1]设计一套套式 PCR引物 ,并建立稳定的套式 PCR检测法 ,对西安地区 119例非甲 -非戊型肝炎患者及 16 2例健康有偿献血员进行 TTV对比检测和统计学处理 ;对 1例患者套式 PCR终产物纯化测序 ,用 DNAsis软件在计算机上与中国 1株做同源性比较阳性 .结果 119例非甲 -非戊型肝炎患者中 37例 TTV DNA阳性 ,阳性率 31.1% ;16 2例健康有偿献血员中 TTV DNA阳性 30例 ,阳性率 18.5 % ;两组有明显的统计学差异 (P<0 .0 5 ,χ2 =5 .2 5 1) .对 1例非甲 -非戊型肝炎患者血清 TTV套式 PCR终产物纯化直接测序 ,测得 143bp序列 ,经计算机比较 ,其与中国 1株同源性为 6 5 .0 % ,差异率为 35 .0 % (>30 .0 % ) .其中6 2 bp序列同源性高达 75 .8% .结论 TTV可能有致病性 ;西安地区可能存在新的

基因疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤免疫研究

目的 观察 ＨＢＶ ＤＮＡ 疫苗（ｐＣＲ３－１Ｓ） 诱导Ｂａｌｂ／ ｃ 小鼠（ Ｈ２ｄ） 的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ 的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５ 细胞（Ｐ８１５ＨＢＶＳ） （ Ｈ２ｄ） 成瘤性的影响．方法 肌肉注射ＤＮＡ 疫苗，背部皮下接种Ｐ８１５ＨＢＶＳ 细胞，观察成瘤情况，４ ｈ ５１Ｃｒ 释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ 活性．结果 接种 ＤＮＡ 疫苗后小鼠成瘤率为１２－５ ％ ， 对照组为１００ ％ ． 小鼠平均存活期大于３８－２ ｄ ，对照组为２８－４ ｄ ，４０ ｄ 后小鼠存活率为８７－５ ％ ，对照组为０ ％ ． ＣＴＬ 细胞杀伤活性明显增加，ｐＣＲ３－１Ｓ 组５１ ％ ，对照组为２１ ％ （ Ｐ＜ ０－００１） ．结论 ＤＮＡ 疫苗可以诱导细胞免疫应答，对体内ＨＢＶ 感染具有预防及治疗作用．

PCR-ELISA用于HFRS病人早期诊断的研究

目的 建立检测HFRS患者血清标本中HV基因的PCR -ELISA方法。方法 设计并合成互补于HVS基因片段的标记引物 ,对 98例HFRS患者血清进行RT -nestedPCR扩增 ,并用酶免方法分析扩增产物。结果 98例患者不同病日采集的血清标本的RT -nestedPCR平均检出率仅为 6 0 .2 % ,而PCR -ELISA平均检出率为 80 .6 %。结论 PCR

白细胞介素12提高HBV基因疫苗的免疫应答

目的 :观察编码IL 12的真核表达载体对HBV基因疫苗诱导Babl c小鼠免疫应答的影响。方法 :肌肉注射基因疫苗pCR3.1 S及IL 12的真核表达载体pWRG316 9,ELISA法检测小鼠血清抗HBs ,4h5 1 Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性。结果 :免疫 8w后 ,pCR3 1 S及共注射IL 12真核表达载体组血清 45 0nmA值分别为 0 87± 0 1及 1 6 7± 0 15。CTL细胞杀伤活性分别为 5 0 5 %± 6 4%及 73 3%± 8 8% ,两组差异显著 ,CTL细胞杀伤活性在抗CD4单克隆抗体处理脾细胞悬液后无明显改变 ,抗CD8单克隆抗体处理后明显降低。结论 :IL 12的真核表达载体能提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由CD8+ 执行。基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染。

IL-12的真核表达载体对乙肝基因疫苗的免疫佐剂效应

观察编码鼠IL - 12的真核表达载体对HBVDNA疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的影响。方法 :肌肉注射DNA疫苗 ,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性。结果 :免疫8周后 ,注射 pCR3.1组、注射 pCR3.1-S组及共注射IL - 12真核表达载体的血清OD值分别为 0 .0 4± 0 .0 1、0 .87± 0 .1及 1.6 7± 0 .15。CTL细胞杀伤活性分别为 (10 .1± 6 .4) %、(5 0 .5± 6 .4) %及 (73.3± 8.8) % ,后两组与pCR3.1组比较均有显著差异 (P <0 .0 0 1) ,后两组比较亦有显著差异 (P <0 .0 5 )。脾细胞悬液经抗CD4+ 单克隆抗体处理后分别为 (48.3± 5 .9) %、(75 .6± 9.1) % ,抗CD8+ 单克隆抗体处理后分别为 (10 .6±1.4) %、(16 .9± 2 .3) %。结论 :IL - 12的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由CD8+ 执行。

陕西延安地区肾综合征出血热自然疫源地调查研究初报

目的 :查明陕西延安地区是否为肾综合征出血热 ( HFRS)自然疫源地及新疫区。方法 :选择有疫情报告地区 ,进行人间疫情调查、健康人群特异性抗体检测 ;鼠间疫情调查在调查点野外和居民区 ,用夹夜法捕鼠 ,调查鼠种及鼠密度 ,采集鼠肺及血清标本。鼠肺冰冻切片用免疫荧光法检测汉坦病毒抗原 ;鼠血用间接免疫荧光法和酶联免疫法检测 Ig G抗体。结果 :对延安市防疫站 2 0 0 1年统计的 7例 HFRS患者进行流行病学调查 ,均属在当地感染 ;检测延安市洛川县交口河镇 2 4 5例人血标本汉坦病毒特异性 Ig G抗体 ,阳性 5 0例 ,人群隐性感染率为 2 0 .41 %。检测 2 2份鼠肺及鼠血标本 ,HV抗原均为阴性 ;HV抗体 IFA法阳性 1例 ,ELISA法阳性 5例。结论 :延安地区有 HFRS散发病例 ,洛川交口河镇健康人群、褐家鼠、小家鼠中有汉坦病毒感染 ,证实了延安市洛川县交口河镇为 HFRS自然疫源地及新疫区。

应用巢式-实时定量PCR方法检测慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）是HBV复制的原始模板，是HBV持续感染的关键因素。外周血单核细胞（PBMc）中HBV cccDNA的存在状态及动态变化成为研究HBV肝外分布及复制问题的热点。诸多研究证实，PBMC中存在HBVDNA，但是否存在HBV复制模板HBV cccDNA及复制过程，却有不同意见。

西安地区献血员及血透患者TTV DNA检测

为了调查西安地区职业献血员及血液透析患者TTV感染状况,通过在TTV基因组ORF1区设计两套引物,用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测我院有偿献血员208例、血液透析病人30例及我院住院的非肝炎患者128例TTV感染率。结果显示,西安地区职业献血员TTV阳性率16.83％(35/208),血透患者TTV阳性率46.67％(14/30),非肝炎患者TTV阳性率2.23％(3/128),前两组与后一组统计处理(X^2=14.26)(X^2=47.28)(x^2=49.49)P<0.001,整体比较(x^2=41.886)P<0.001。提示西安地区与血液紧密接触人群中存在严重的TTV感染,其分布以输血传播为主。

血管内皮生长因子_(165)核酶的合成及其体外活性

目的 探讨抗血管内皮生长因子1 65(VEGF1 65)核酶的设计合成及其生物学活性 .方法 利用计算机辅助设计针对 VEGF1 65的锤头状核酶 ,构建核酶的自剪切转录载体p GEMRz2 12 ,体外转录合成核酶 Rz2 12及其相应的底物VEGF1 65m RNA,在无细胞体系中观察核酶对靶 RNA的切割作用 .结果 构建的自剪切转录载体在转录的过程中发生了自身剪切 ,并释放出目的核酶 Rz2 12 ,该核酶具有切割VEGF1 65m RNA的作用 .结论 计算机辅助设计的 VEGF1 65锤头状核酶体外可有效切割靶 RNA。

HBsAg DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞和体液免疫

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)S区DNA疫苗pCR3.1-S诱导BALB/C小鼠(H-2~d)的特异性免疫应答,及其对稳定表达HBsAg的小鼠肥大细胞瘤细胞P815(P815-HBV-S)成瘤性的影响。方法:肌肉注射DNA疫苗;背部皮下接种P815-HBV-S细胞,观察成瘤情况;ELISA法检测小鼠血清抗HBs;4h^(51)Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。结果:pCR3.1-S体外可表达HBsAg;小鼠接种该疫苗后血清450nm A值为0.38,强化免疫后达0.87;pCR3.1-S组CTL细胞杀伤活性为51.1％,对照组为20.5％(P<0.01)。接种P815-HBV-S细胞后对照组成瘤率100％,pCR3.1-S小鼠成瘤率为16.7％,对照组小鼠6周后全部死亡;pER3.1-S组6周后存活率为87.5％。结论:HBV S区DNA疫苗具有良好的免疫原性,能够诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答,对体内HBV感染具有预防及治疗作用。

新形势下传染病学教学存在的问题及改革对策

新形势下我国传染病的格局发生了巨大变化，总发病率明显降低，经典传染病显著减少，部分传染病又发生“回潮”，新发传染病不断出现。而当前的传染病教学未能与之相适应，严重脱离了实际需要。在这种形势下，对传统的教学理念、教学内容和教学方法进行了必要的改良，取得了较好的教学效果。

人整合素β3亚基真核表达载体的构建及αIIbβ3在细胞表面的表达

目的 :构建人整合素 β3亚基真核表达载体 ,并探讨如何使人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面有效表达 ,为进一步研究整合素β3亚基作为汉坦病毒 (hantavirus,HV)受体的特异性奠定基础。方法 :构建编码人整合素 β3真核表达载体 pcDNA3.1 β3。将其与编码人整合素αIIb亚基真核表达载体 ,分别及共转染至中国仓鼠卵巢 (Chinahamsterovary ,CHO)细胞中进行表达。采用间接免疫荧光法 (IFA)检测外源基因的表达。结果 :共转染组目的蛋白呈高效的细胞膜表达。pcDNA3.1 β3单独转染组 β3亚基在细胞膜的表达较共转染组弱 ;而pBJ1 αIIb单独转染组则未见有效的细胞膜表达。结论 :人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面的有效表达需要两个亚基共同参与。

IL-12提高DNA疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤的免疫研究

目的观察ＩＬ－２真核表达载体（ｐＷＲＧ３１６９）对ＨＢＶ－Ｓ ＤＮＡ疫苗（ｐＣＲ ３．１－Ｓ）诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２~ｄ）的 特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞（Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ）成瘤性的影响。方法肌肉注射ＤＮＡ疫苗，背部皮下接种Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ细胞，观察成瘤情况，４ ｈ^（５１）Ｃｒ释放法检测小鼠脾细胞 ＣＦＬ活性。结果对照组、ｐＣＲ ３．１－ Ｓ及共同免疫 ＩＬ－ １２组成瘤率为 １００％，１２％和 ０，４５ ｄ后小鼠存活率为 ０，８８％及 １００％，平均存活期分别为２８．４ｄ，≥２３８．２ｄ及≥４５ｄ。ｐＣＲ３．１－Ｓ组ＣＴＬ细胞杀伤活性５１．１％，联合ＩＬ－１２真核表达载体组７２．６％，对照组为２０．５％（Ｐ＜０．０１）。结论ＤＮＡ疫苗可以诱导小鼠细胞免疫应答，对体内ＨＢＶ感染具有预防反治疗作用。ＵＬ－１２真核表达载体可加强ＤＮＡ疫苗的上述作用。

汉滩病毒核蛋白羧基端多肽真核表达载体的构建及其表达产物的鉴定

目的 探讨汉滩病毒 (HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性 ,为建立分型检测方法奠定基础 .方法 设计并合成 S基因编码区及其 3 端 82 5 bp片段引物 ,用 PCR方法从PBV2 2 0 - S2 2原核质粒中扩增出目的片段 ,应用 TA克隆将其插入 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO载体中 ,并通过脂质体转染至 Vero细胞中进行瞬时表达 ,表达产物用间接免疫荧光法进行鉴定 .结果 成功构建了 pc DNA3.1- S及 pc DNA3.1- S- C真核表达载体 ,间接免疫荧光法可检测到真核表达质粒转染的 Vero细胞表达的核蛋白羧基端多肽 .结论 pc DNA3.1- S及 pc DNA3.1- S- C真核表达载体有较高的转染效率 ,能在宿主细胞中表达 。

西安地区TTV毒株分子结构特点的初步研究

目的 :研究西安地区TTV(Transfusiontransmittedvirus)基因组结构是否为环状 ;对西安地区TTVDNA部分序列直接测序分析 ,比较其与中国 1株同源性。方法 :自行在TTV基因组首尾端设计一套环形检测引物 ,检测西安地区肝炎患者TTVDNA阳性血清 ,有无特异性片段。参照文献设计一套套式检测引物 ,内引物扩增片段长为 197bp ,将 197bp处特异性条带从低熔点凝胶中切下 ,纯化后以自带引物直接测序法测序 ,测得的 143bp序列与Genebank注册的BDH1同源性比较。结果 :环形引物套式PCR扩增在 30 0bp处出现特异性条带 ,提示西安地区TTV毒株可能首尾相连。西安地区TTV毒株与BDH1同源性为 6 5 .0 % ,差异率 35 .0 % (>30 % ) ;143bp中的 6 2bp序列与BDH1同源性达 75 .8%。结论 :西安地区TTVDNA结构可能有环形株存在 。

白细胞介素12真核表达载体对DNA疫苗诱导免疫应答的影响

目的 :观察白细胞介素 12真核表达载体 (pWRG316 9)对HBV -SDNA疫苗 (pCR3.1-S)诱导Balb/c小鼠 (H - 2d)的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达HBsAg的小鼠肥大细胞瘤P815细胞 (P815 -HBV -S)成瘤性的影响。方法 :肌肉注射DNA疫苗及白细胞介素 12真核表达载体 ,背部皮下接种P815 -HBV -S细胞 ,观察成瘤情况 ,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。结果 :对照组成瘤率 10 0 % ,pCR3·1-S组小鼠成瘤率为 12 .5 % ,pCR3·1-S +IL - 12真核表达载体组成瘤率为 0 ,对照组平均存活期和 6周后存活率分别为 2 8.4d和 0。后两组分别大于 38.2d及 45d ,存活率为 87.5 %及 10 0 % ,pCR3·1-S组CTL细胞杀伤活性 5 1.1% ,联合白细胞介素 12真核表达载体组 72 .6 % ,对照组为 2 0 .5 % (P <0 .0 1)。结论 :DNA疫苗可以诱导小鼠细胞免疫应答 ,对体内HBV感染具有预防及治疗作用。白细胞介素