Gremlin-1在原发性肝癌及肝硬化患者中的表达及意义

目的检测Gremlin-1在原发性肝癌及肝硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝脏组织中的表达。方法收集2012年6-12月在第四军医大学唐都医院就诊的21例原发性肝癌及17例肝硬化患者血样,15名健康志愿者作为对照。采用RT-PCR技术检测PBMC中Gremlin-1的表达;免疫组织化学方法检测10例原发性肝癌肝组织中Gremlin-1的表达。组间比较采用ANOVA方差分析。结果 Gremlin-1在原发性肝癌及肝硬化患者PBMC中表达显著升高,分别为正常对照的3.5及4.4倍,与正常对照相比差异有统计学意义(P=0.003 4,0.002 6);Gremlin-1在肝癌患者肝组织中高表达,阳性率为72.5%,在正常肝组织中低表达或无表达,阳性率为12.1%,差异有统计学意义(P<0.001),Gremlin-1在高分化及低分化肿瘤表达差异无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学显示Gremlin-1主要表达在肝肿瘤细胞膜及细胞质,部分表达在血管内皮细胞、成纤维细胞等间质细胞。结论Gremlin-1的表达与肝硬化及原发性肝癌密切相关。

A20与EGFP共表达腺病毒载体的构建及转染THP-1细胞

目的:构建A20和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)共表达的腺病毒载体,观察其对人单核-巨噬细胞系THP-1的影响.方法:PCR扩增目的基因片段A20,将目的基因与载体GV314连接获得重组穿梭质粒pGV314-A20,在DH5a感受态细胞中扩增,同源重组得到含有目的基因的腺病毒载体,转染293T细胞,包装成具有感染能力的共表达A20和EGFP的腺病毒颗粒,转染目的细胞THP-1,通过Western blot检测A20蛋白在THP-1细胞的表达,EILSA检测脂多糖(lipopolysaccharide,L P S)刺激T H P-1后其上清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达.结果:限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实重组载体构建成功,包装的腺病毒滴度达到1×1011 pfu/mL,感染了腺病毒后的293细胞出现了明显的气球样变,Western blot证实转染THP-1后A20蛋白表达显著增加,与空白组比较,THP-1上清中TNF-α和IL-6的表达下降,两者相比,有统计学差异(P<0.05).结论:成功构建A20与EGFP共表达腺病毒载体,能够在THP-1细胞表达,降低其炎性因子表达,为进一步研究其抗炎功能奠定基础.