n-3 PUFA依赖的跨膜型肿瘤坏死因子-α真核表达载体的构建

目的 构建n 3多不饱和脂肪酸依赖的跨膜型肿瘤坏死因子 α(tmTNF α)真核表达载体。方法 设计并合成包含PPRE增强子的tk启动子序列 ,与人突变型tmTNF α真核表达载体pcDNA3 TNF(Δ1 12 )WB重组 ,构建pPPRE tk tmTNF α表达载体 ,转染人乳腺癌MCF 7细胞 ,经EPA处理后 ,应用免疫荧光技术检测tmTNF α蛋白的表达。结果 经琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定证明pPPRE tk tmTNF α真核表达载体构建成功 ,转染此重组表达载体的MCF 7tmTNF α细胞tmTNF α表达受EPA正调控 ,两者之间呈时间、剂量 -效应关系。结论 成功构建受n 3PUFA正调控的tmTNF α真核表达载体。