《医学免疫学》课程中“主要组织相容性复合体”教学方法探讨

主要组织相容性复合体(MHC)是医学免疫学课程学习过程中的重要内容之一,也是教学中的难点。多年来免疫学教师一直在探索更合适的教学方法帮助学生更好的学习掌握MHC内容。针对MHC教学中遇到的问题,结合MHC的知识特点,本文从做好整体教学设计、构建扎实的知识体系和应用灵活多样的教学手段等方面对MHC一章的教学方法进行总结和探讨,以期达到既有创新性教育理念又具有理论知识科学性和系统性的教学效果。

揭示免疫识别的奥秘——2011年诺贝尔生理学或医学奖简介

斯德哥尔摩时间2011—10—03—11：30（北京时间2011—10—03—17：30），瑞典卡罗琳医学院诺贝尔生理学或医学奖评审委员会宣布，2011年度诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家布鲁斯·博伊特勒（BruceA．Beutler）、生于卢森堡的法国籍科学家朱尔斯·霍夫曼（JulesA．Hoffmann）和加拿大籍科学家拉尔夫·斯坦曼（RalphM．Steinman）。其中，奖项的一半授予布鲁斯·博伊特勒和朱尔斯·霍夫曼，以表彰他们发现了可识别致病微生物并激活固有免疫系统的受体蛋白；另一半则授予拉尔夫·斯坦曼，以表彰他发现树突状细胞并证实其在激活和控制适应性免疫应答中发挥重要作用。

2011年诺贝尔生理学或医学奖的启示——源头创新与执着追求

10月3日，2011年诺贝尔生理学或医学奖尘埃落定——瑞典卡罗林斯卡医学院诺贝尔生理学或医学奖评审委员会宣布，美国科学家布鲁斯·博伊特勒（BruceA．Beutler）、生于卢森堡的法国籍科学家朱尔斯·霍夫曼（JulesA．Hoffmann）和加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼（RalphM．Steinman）因在免疫学领域的杰出贡献共同分享这一殊荣。

肿瘤免疫治疗的研究进展

肿瘤一直是人类亟待攻克的难题之一,目前治疗肿瘤的方法有手术切除、放疗、化疗、肿瘤靶向药物、过继免疫治疗、肿瘤疫苗等。而传统肿瘤疗法已显示出"天花板效应",随着肿瘤免疫学、细胞生物学和分子技术等研究不断深入,肿瘤免疫治疗在实验室研究和临床应用中蓬勃发展。虽然近几年存在关于肿瘤免疫疗法负面报道,且其距临床大规模推广仍存在差距,但是肿瘤免疫疗法不断显示出的特有优势、巨大潜力及良好的临床前景使其成为肿瘤领域的研究热点。本文将对肿瘤免疫治疗的发展现状作一综述。

叉头盒O1(FoxO1)调节RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性

目的研究叉头盒O1(FoxO1)对RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性的调控作用。方法采用100 ng/m L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞6、12、24 h,流式细胞术观察RAW264.7细胞活化过程中LAIR-1、CD11b以及细胞吞噬功能的变化。软件预测FoxO1与LAIR-1启动子之间存在结合位点。构建FoxO1fl/fl/Lys M-Cre小鼠,观察FoxO1敲除后,RAW264.7巨噬细胞LAIR-1的水平变化。构建LAIR-1基因启动子荧光素酶报告基因载体,转染FoxO1观察对其转录活性的影响。结果 LPS刺激后RAW264.7细胞活化,CD11b表达升高,吞噬能力增强,LAIR-1水平下调。成功构建了髓系细胞FoxO1基因敲除小鼠FoxO1fl/fl/Lys M-Cre,该小鼠LAIR-1 mRNA水平显著降低。软件预测发现在LAIR-1基因启动子区域存在潜在的FoxO1转录因子结合位点,荧光素酶报告基因证实FoxO1可激活LAIR-1启动子转录活性。结论 FoxO1可激活巨噬细胞LAIR-1启动子转录活性。

实验性自身免疫性脑脊髓炎中B7-H1分子在脾脏和中枢神经系统淋巴细胞上的表达变化

目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病高峰期淋巴细胞表面B7-H1分子的表达变化,探讨B7-H1在EAE发病和病情进展中的作用。方法:以MOG35-55诱导雌性C58BL/6小鼠制备EAE动物模型,并对其行为学变化进行记录与评分。分别于发病前和发病高峰期处死小鼠,分离脾脏与中枢神经系统中的淋巴细胞,用流式细胞术分析淋巴细胞表面B7-H1分子的表达差异。结果:与发病前相比,EAE发病高峰期脾脏分离的淋巴细胞中B7-H1阳性细胞率由(35.1±2.46)%下降至(18.9±2.06)%(P<0.01),其中CD4+T细胞中B7-H1阳性细胞由发病前的(6.4±1.25)%下降至发病后的(2.3±1.04)%(P<0.05)。中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有8.7%为B7-H1阳性细胞。结论:在EAE发病过程中,B7-H1分子在外周淋巴细胞的阳性细胞数下降,而中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有一定比例的B7-H1阳性细胞,提示B7-H1可能在EAE发病过程中发挥重要作用。

Sema 4D/CD100的基础和临床研究进展

Sema4D/CD100是一种免疫信号素,参与了免疫和非免疫系统的多种重要的生理功能。本文对Sema4D/CD100分子及其受体的结构、生物学功能及其参与的多种病理生理过程进行综述。

脂多糖体外诱导牙周膜成纤维细胞发生内质网应激

目的观测脂多糖(LPS)是否诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)发生内质网应激。方法体外培养HPDLF,分别用LPS(0.1、1、10μg/mL)刺激0、3、6、9 h后收集细胞,提取RNA。采用实时荧光定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOPmRNA表达水平,通过RT-PCR检测XBP1mRNA表达水平及剪切活化情况。结果 LPS作用HPDLF 3 h后GRP78、CHOP、XBP1mRNA表达水平显著上调,其中XBP1mRNA表达水平在6 h达到高峰,并且出现活化的剪切形式XBP1s,而GRP78、CHOPmRNA表达水平持续上调。结论 LPS作用HPDLF后细胞发生内质网应激,且存在浓度和一定的时间依赖性。

非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14在胆管癌组织的表达及临床意义

目的检测非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14(PTPN14)蛋白在胆管癌组织中的表达,探讨PTPN14与胆管癌临床病理特征间的关系,并分析PTPN14的表达与胆管癌患者预后的关系。方法用免疫组织化学染色检测胆管癌组织及癌旁组织中PTPN14蛋白的表达;利用统计学分析软件分析PTPN14蛋白与胆管癌患者临床病理特征之间的关系;利用生存分析曲线分析PTPN14蛋白与胆管癌患者术后5年生存率的关系。结果 PTPN14蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为49.1%,在癌旁组织中的阳性表达率为75.4%;PTPN14蛋白的表达与胆管癌临床分期及分化程度密切相关,与胆管癌患者性别、年龄无显著相关性;PTPN14蛋白阳性表达的胆管癌患者术后5年生存率显著高于阴性表达的患者。结论 PTPN14在胆管癌组织低表达,且PTPN14低表达与胆管癌的良性临床病理特征及总体生存率呈负相关。

microRNA-93过表达促进A172脑胶质瘤细胞增殖并抑制其凋亡

目的探讨微小RNA-93(miR-93)对胶质瘤细胞A172增殖和凋亡的影响,观察miR-93对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测2例正常人脑组织、10例胶质瘤样本和5种胶质瘤细胞系中miR-93的表达;利用人工合成miR-93 mimic瞬时转染脑胶质瘤A172细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-93的表达水平;采用MTT比色法检测A172细胞增殖情况;流式细胞术检测A172细胞周期与凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-93的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系高,miR-93 mimic上调了A172细胞中miR-93的表达水平,促进了A172细胞的增殖能力。miR-93转染细胞后,进入S期细胞显著增加,而G1期细胞则明显减少,同时A172细胞的凋亡数量减少。结论 miR-93在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中高表达,过表达miR-93有效促进了A172细胞的增殖,S期细胞增加G1期减少、细胞凋亡降低,提示miR-93可能成为胶质瘤诊断和治疗的新靶点。

组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1缺陷小鼠造血干细胞增殖加快且凋亡增加

目的研究组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1缺陷(MYSM1-/-)小鼠骨髓造血干细胞(HSC)的静息状态、增殖与凋亡情况。方法分离MYSM1-/-小鼠和野生对照(MYSM1+/+)小鼠的骨髓细胞,利用免疫磁珠和流式细胞仪分选获得表面标志为lin-Sca-1+c-kit+的HSC。采用腹腔注射溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)的方法检测HSC增殖与细胞周期、采用Hoechst 33342-派若宁(pyronin)Y双染色法检测静息态HSC的比例、采用异硫氰酸荧光素标记膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-FITC/7-AAD)双染色法检测HSC凋亡。比较MYSM1-/-小鼠和MYSM1+/+对照小鼠HSC数目、细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡的变化情况。结果 MYSM1-/-小鼠的骨髓细胞、HSC总数与野生型小鼠相比明显降低;HSC的S期比例增加、增殖加快、静息期细胞减少但功能有缺陷的MYSM1-/-HSC凋亡率显著上升。结论 MYSM1对维持HSC的静息状态有非常重要的作用,其缺陷可引起静息态的HSC大量进入S期,异常增殖的HSC凋亡增加并最终引起HSC和骨髓细胞总数减少。

“靶”关肿瘤——对抗肿瘤小RNA药物的前景思考

肿瘤治疗的靶向性直接关系到治疗的成败。小RNA可以特异性地识别和结合mRNA,通过抑制肿瘤相关基因的表达发挥高效的抗肿瘤作用,但是在细胞层次缺乏靶向性和特异性。由于无法靶向输送,小RNA在系统应用时难以选择性地进入特定的组织细胞,还会引起非特异性炎症反应。针对这些应用障碍,我们的研究解决了抗肿瘤小RNA的找靶、防脱靶和靶向输送等问题。但是,未来只有在深入揭示肿瘤演进的核心分子机制的基础上,使小RNA能从分子、细胞等多个层次靶向肿瘤细胞,才能为研发小RNA等生物大分子药物奠定理论基础,真正造福于肿瘤患者。

抗体产生的细胞协奏曲

滤泡辅助性T细胞是2008年被确认的新的CD4阳性T细胞亚群,在辅助B细胞产生抗体过程中发挥重要作用。以往认为,Th2细胞在辅助B细胞产生抗体中起主导作用。那么,这两个细胞亚群在辅助抗体产生过程中到底扮演什么角色呢?本文旨在通过对Tfh细胞亚群发现和分化等方面文献的回顾,与大家共同讨论这两个细胞亚群的功能定位,体味免疫调控的精妙之处。

抗BAFF单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应,PCR产物连接入载体,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因,测序结果证实序列正确。结论:获得了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因序列,为下一步构建相关基因工程抗体打下良好基础。

脂联素在肺动脉高压发病中的作用机制研究进展

人脂联素(APN)是一种含有244个氨基酸的糖蛋白,主要由脂肪细胞分泌。现已发现APN至少有4种受体:脂联素受体1、脂联素受体2、T-钙黏蛋白和钙网蛋白/CD91共受体。APN与受体结合可发挥多种生理功能,影响糖类和脂肪代谢,具有抗炎和抗平滑肌增殖等作用。肺动脉高压(PAH)是一种慢性进行性心血管疾病,以大量的肺组织中小动脉压力增高为特征,发病率和死亡率均较高。炎症在PAH病程中发挥着重要的作用,可能参与疾病的病理损伤。近年来的研究发现,APN和PAH的发病关系密切,APN可能通过多方面机制减缓PAH的病程进展。本文重点围绕APN通过抗炎和抗血管平滑肌增殖的作用来减缓PAH发展的机制新进展做一综述。

反复自发性流产患者外周血CD14~＋细胞表面CD49b和淋巴细胞活化基因3表达水平降低

目的观测黏附分子CD49b和负性调节分子淋巴细胞活化基因3(LAG-3)在反复自发性流产(RSA)患者CD14+细胞上的表达。方法收集7例正常对照者和12例RSA患者外周血5 m L,分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,流式细胞术检测PBMC中CD14+细胞表面CD49b和LAG-3的表达;ELISA检测血浆中细胞因子白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的水平。结果 RSA患者外周血中,单核细胞的比例与正常对照组相比无显著性差异;CD14+CD49b+、CD14+LAG-3+、CD14+CD49b+LAG-3+细胞的百分比均低于正常对照组。血浆中,TGF-β的水平低于正常对照组;IL-10的水平无显著差异。结论 RSA患者外周血CD14+细胞表面CD49b和LAG-3的表达和血浆中TGF-β的水平均显著降低。

抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在成功制备小鼠抗人IL-13Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人IL-13Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应。将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因。结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础。

下调含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的水平可抑制肾癌769-P细胞增殖并促进其凋亡

目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时转染入769-P细胞。利用实时定量PCR检测UHRF1 mRNA的水平,Western blot法检测UHRF1的蛋白水平;利用MTT法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 UHRF1 siRNA可显著抑制UHRF1的mRNA和蛋白水平,下调769-P细胞UHRF1水平后,细胞增殖显著减弱,细胞凋亡显著增加。结论下调UHRF1的表达可抑制肾癌细胞的增殖并促进其凋亡。

下调婆罗双树样基因4(SALL4)表达水平可抑制肾癌ACHN细胞周期并促进其凋亡

目的探讨下调婆罗双树样基因4(SALL4)对肾癌ACHN细胞周期和细胞凋亡的影响。方法根据人SALL4的mRNA序列设计合成靶向SALL4的小干扰RNA(siRNA),用于沉默ACHN细胞SALL4的表达。运用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测SALL4的mRNA与蛋白表达水平;使用流式细胞术检测ACHN细胞的细胞周期和细胞凋亡情况。结果 SALL4 siRNA可显著下调ACHN细胞中SALL4的mRNA和蛋白表达水平,下调SALL4后ACHN细胞的细胞周期受到抑制,G1期细胞增多,S/G2期减少,细胞凋亡显著增加。结论下调SALL4基因表达可抑制肾癌ACHN细胞增殖并促进其凋亡,SALL4可能是肾癌治疗的新靶点。

鸡卵清蛋白上游启动子转录因子2与肿瘤关系的研究进展

鸡卵清蛋白上游启动子转录因子2(COUP-TF2)是核受体家族的重要成员,其编码基因位于第15号染色体。COUP-TF2参与调节血管和淋巴管生成、能量代谢和脂肪生成、神经发育和器官形成等。COUP-TF2可抑制肿瘤细胞表面MHCⅠ类分子的表达,导致肿瘤细胞逃避免疫系统的监视从而诱发肿瘤。COUP-TF2也在多种肿瘤组织中高表达,且其表达水平与肿瘤的恶性程度呈正相关。COUP-TF2还可通过调节血管和淋巴管生成、肿瘤细胞的侵袭和转移、肿瘤细胞对激素的敏感性等机制参与肿瘤的发生发展。本文就COUP-TF2的生理作用及其参与肿瘤发生发展的分子机制进行综述。