中国人HCV5’非编码区部分基因片断的克隆及序列分析

目的:扩增并测定陕西地区丙型肝炎病毒(HCV) 的基因组5’非编码区(NCR)的序列.方法:应用RT-PCR法和基因重组技术将从陕西省NANB病毒性肝炎患者血清中扩增出的5’NCR长262bp的片段,用全自动序列分析仪测序.结果:所得序列与HCV-J6,HCV-J8,HCV-Hebei, HCV-1及HCV-J比较,其同源性分别为99.2%,96.5%,94.6%,94.6%及94.3%,与HCV-J6的同源性最高.结论: 所分离HCV与HCV-J6同属Ⅲ型,

人白细胞介素1受体拮抗基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的 获得一株重组人白细胞介素 1受体拮抗蛋白的高效表达菌株 ,为研究各种急慢性炎症疾病的发病机制以及拮抗 IL - 1的生物学效应奠定基础 .方法 分离人外周血淋巴细胞 ,提取 m RNA,反转录 PCR获得人白细胞介素 1受体拮抗基因 (h IL - 1ra) ,克隆入大肠杆菌表达载体 ,从而构建高效表达人 IL - 1ra的重组菌株 .结果 成功构建了 IL - 1ra的高效表达菌株 (p L DH- h IL 1ra) ,序列测定与文献报道一致 .12 % SDS- PAGE分析显示此菌株所表达的目的蛋白产物相对分子质量为 2 3ku,与预期结果相符 .光密度扫描重组 h IL-1ra蛋白质占细菌总蛋白的 30 % .结论 在大肠杆菌中成功地表达了 h IL- 1ra基因 .

抗人胃癌全套单链抗体基因噬菌体表面呈现文库的构建、初步筛选及鉴定

目的：构建抗人胃癌全套单链抗体基因噬菌体表面呈现文库．方法：利用噬菌体表面呈现技术，构建基因文库，经过ｐａｎｎｉｎｇ筛选富集后，用ＥＬＩＳＡ方法检测抗原结合活性．结果：从９４个单个噬菌体克隆中一次筛选到１８个具有抗原结合活性的阳性克隆．结论：我们所应用的方法为抗肿瘤基因工程抗体的制备提供了一条更为有效的新途径。

抗人TGF_α发夹状核酶基因逆转录病毒表达载体的构建及鉴定

目的：构建抗人ＴＧＦα核酶基因逆转录病毒表达载体．方法：用二异丙基亚磷酰胺法合成抗人ＴＧＦα核酶基因的两条互补单链，将其退火后克隆人ｐＵＣ１８，用ＥｃｏＲＩ及ＢａｍＨＩ切下该基因，定向克隆人逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ．结果：酶切后经琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，所构建重组克隆载体ｐＵＣ１８ＴＲＺ及重组表达载体ｐＤＯＲＴＲＺ正确．结论：成功构建了抗人ＴＧＦα发夹状核酶基因逆转录病毒表达载体，为下一步运用核酶对肿瘤进行基因治疗打下了基础．