可调控的肝癌特异性基因治疗载体的构建

目的 构建新型AFP顺式作用元件调控的基因表达载体 ,检测该调控元件的特异性和可调控性。方法 PCR扩增截短的AFP基因启动子、增强子 ,将上述片段与含有报告基因强化绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP 1的多克隆位点连接 ,构建成为AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性EGFP表达载体 (pEGFP 1 EP)。用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系 ,荧光显微镜观测重组AFP顺式作用元件的启动活性 ,并用流式细胞术检测全反式视黄酸对它的抑制作用。结果 成功地将AFP基因启动子、增强子克隆到报告基因载体pEGFP 1的多克隆位点 ,酶切鉴定和DNA序列分析无误 ,荧光显微镜观测证实EGFP能在AFP阳性肝癌细胞特异性表达 ,1× 10 -7M全反式视黄酸对其活性有明显的抑制。结论 AFP顺式作用元件修饰的基因治疗载体 ,在基因转录水平特异性调控目的基因的表达 ,为下一步将其作为肝癌基因治疗载体奠定了基础。