宫颈癌中HPV感染分型与EGFR靶向治疗药物敏感突变、EGFR启动子甲基化的研究

目的检测并分析宫颈癌组织标本中感染HPV病毒型别与EGFR基因启动子甲基化状态、EGFR靶向治疗药物敏感相关基因突变状态的分布与关联性，为指导宫颈癌的个体化治疗提供新思路和分子诊断技术方法。方法分别提取180例宫颈癌组织DNA，GP5＋／GP6＋非对称扩增荧光偏振检测方法检测每例宫颈癌标本组织DNA的HPV16、18、58、52型。非对称扩增荧光偏振检测方法检测每例宫颈癌标本组织的亚硫酸氢盐转变DNA的EGFR启动子甲基化状态：测序法检测每例宫颈癌标本组织DNA的EGFR基因18、19、21外显子突变状态；统计分析检On,0结果。结果本研究成功检测了宫颈癌标本组织DNA中HPV16、18、58、52型和EGFR基因18、19、21外显子突变状态，成功检测了宫颈癌标本组织亚硫酸氢盐转变DNA的EGFR启动子甲基化状态。EGFR启动子甲基化阳性65例，阳性率为36．1％。单纯HPV16阳性54例，其中EGFR启动子甲基化34例，占63．0％。HPV16阳性样本中EGFR启动子甲基化阳性比率最高。结论本研究中，宫颈癌标本中HPV感染率为100％，宫颈癌标本中未发现EGFR药物敏感相关基因EGFR18、19、21外显子突变，宫颈癌标本中EGFR启动子甲基化阳性率较高，其中，HPV16感染的宫颈癌标本中EGFR启动子甲基化阳性率较其他病毒型显著增高，提示HPV16感染与EGFR启动子甲基化有一定关联．

宫颈癌中EGFR启动子甲基化荧光偏振技术检测方法研究

目的:建立一种基于荧光偏振技术的宫颈癌组织标本中EGFR启动子甲基化检测的新方法。方法:设计通用引物,在封闭管中同时扩增EGFR启动子甲基化与非甲基化等位基因片段,再同时用序列特异的FAM或TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交反应的荧光偏振值,确定EGFR启动子甲基化状态。应用荧光偏振法检测63例宫颈癌组织样本,并与直接测序法进行对比验证。结果:本方法检测EGFR启动子甲基化结果与直接测序法结果无统计学差异,且最低检测浓度为50拷贝/μl,最低检测含量可达10%,敏感度高。结论:本方法检测EGFR启动子甲基化灵敏度与准确度较高,为临床宫颈癌个体化治疗相关检测提供了新技术。

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对巨噬细胞源性泡沫细胞吞噬功能和炎症相关因子分泌功能的影响。方法:利用佛波酯(phorbol ester,PMA)诱导THP-1细胞分化形成巨噬细胞,之后采用ox-LDL处理48小时后,诱导其形成泡沫细胞。利用中性红吞噬实验,分析泡沫细胞形成前后吞噬功能的变化;通过ELISA法,检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,观察ox-LDL对THP-1巨噬细胞功能的影响。结果:细胞形态学结果表明,我们成功利用ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞;进一步发现ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞表面的清道夫受体CD36表达升高,并促进细胞吞噬功能增加,进一步促进细胞内胆固醇含量显著升高(P<0.05);同时,ox-LDL能够刺激巨噬细胞大量分泌TNF-α(P<0.05)。结论:ox-LDL通过增强清道夫受体CD36表达,提高巨噬细胞的吞噬功能,引起大量胆固醇聚集,产生细胞毒性损伤,并促进TNF-α炎性因子的大量分泌。