体外分离培养Balb/c小鼠胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化

目的探讨体外分离培养、诱导胚胎干细胞(ESCs)分化为神经细胞的高效方法.方法自孕3.5d的Balb/c小鼠获得附植前的早期胚胎,机械剥离法去除胚胎的滋养层细胞获取内细胞团(ICM)分别在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上和明胶包被的培养板中培养获得类ESCs克隆.进行碱性磷酸酶染色,SSEA-1细胞免疫化学鉴定及体内分化实验鉴定.模拟体内神经系统发育过程采用序贯诱导方法定向诱导ESCs分化为神经细胞,进行分化后细胞的免疫细胞化学鉴定.结果所分离得到的细胞碱性磷酸酶染色阳性,SSEA-1表达阳性,体内分化实验证实具有多向分化潜能.符合ESCs的一般特性.经过序贯诱导方法可以高效诱导ESCs分化为神经细胞.结论体外分离得到的Balb/c小鼠的ESCs经过模拟体内神经系统发育过程经过序贯诱导方法可以高效的诱导为神经细胞,且所获得的神经元比例高.

HSP70诱饵载体的构建及其在酵母双杂交系统中自激活作用的检测

目的 :构建用于酵母双杂交系统的“诱饵”载体pG BKT7 Hsp70 ,并检测其是否具有自激活作用 .方法 :用PCR的方法从质粒pBBS2 12 Hsp70中扩增出Hsp70基因片段 ,引入酶切位点EcoRⅠ ,BamHⅠ .测序正确后 ,将Hsp70基因克隆至载体pGBKT7中 ,并检测pGBKT7 Hsp70在MATHMAKERGAL4Two HybridSystem 3中的自激活作用 .结果 :成功构建了“诱饵”载体pGBKT7 Hsp70 ,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活作用 .结论 :pGBKT7 Hsp70可以用于酵母双杂交系统中 。