关于医学实验动物学教学改革趋势的几点思考

鉴于医学实验动物学教学的重要性，笔者依据教学组以往的教学经验并结合国际实验动物学发展趋势．从教学内容、教学方式、教学方法等方面对实验动物学教学改革趋势进行了思考，以期为我们以后的教学实践提供指导。

医学院校硕士研究生《实验动物学》教学改革探讨

《实验动物学》是医学院校硕士研究生必修课之一，因此有必要对该课程教学进行改革。本文就对教学方法，实验习惯，相关政策法规和课堂教学等内容的改革措施进行了探讨。

结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究

目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,抗酸染色观察胞内细菌形态,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总蛋白,Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3表达水平的变化。结果:雷帕霉素诱导巨噬细胞形成自噬后感染结核分枝杆菌可使胞内细菌局限化,加入Hsp16.3蛋白可明显抑制了自噬体的形成,影响了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的生存,显著增加了细菌的菌落形成单位,降低了自噬相关蛋白LC3的表达(P<0.05)。结论:Hsp16.3蛋白可能通过调节Atg8的表达水平抑制自噬体的形成。

肝细胞移植对大鼠实验性肝衰竭的疗效研究

目的 探讨同种异体肝细胞经腹腔、门静脉移植对D-氨基半乳糖 (D- gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用 .方法 采用 D- gal诱导大鼠急性肝衰竭 ,诱导后 6 0 h,分 4组进行治疗实验 , 组 :经门静脉移植 2× 10 7肝细胞 ,同时肌注环孢霉素 A(Cs A) 10 mg· kg- 1 ; 组 :经门静脉注射生理盐水 1m L ,同时肌注 Cs A 10 mg· kg- 1 ; 组 :经腹腔移植 4×10 7肝细胞 ; 组 :经腹腔注射生理盐水 2 m L ,观察大鼠的存活率、肝脏功能、病理变化 .结果 组大鼠存活率与 组无明显差异 (42 % vs 37% ,P>0 .0 5 ) ,肝脏功能、病理无明显改善 . 组大鼠存活率显著高于 组 (75 % vs 33% ,P<0 .0 5 ) ,肝脏功能、病理均有部分改善 .结论 经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善 D- gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率 ,部分改善肝功能、病理 ;经门静脉移植同种异体肝细胞不能改善D- gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率、肝脏功能及病理改变 .

新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究

目的 :研究骨髓基质细胞 (MSCs)在兔组织工程膀胱中的应用 .方法 :按文献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG) ,从兔胫骨中分离出MSCs,体外扩增后接种于BAMG外表面 ,在低糖DMEM (LG DMEM )培养 12h ,与BAMG复合成组织工程膀胱 ,对同一兔实施膀胱次全切术 ,用组织工程膀胱替代 .2 0只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术 .实验随机分为 3组 .A组 6只直接缝闭三角区 ;B组 7只用膀胱形状的BAMG进行重建 ;C组 7只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术 .术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料 .12wk时无痛处死动物 ,进行大体解剖和组织染色分析 .结果 :体外扩增时间平均为 2 1d .A ,B和C组膀胱容积分别为术前的 2 2 % ,85 %和 95 % ,顺应性分别为术前的 11% ,10 4 %和 10 7% .大体解剖显示A组仅有很小的储水能力 ,而B ,C组具有正常膀胱形态 ,组织染色分析A ,B组显示上皮层正常 ,粘膜下纤维组织增生而肌层较薄 ;C组则显示了与自体膀胱相似的正常的 3层组织结构 .结论 :膀胱次全切除后原位缝合膀胱容积和顺应性均不能恢复 ,单纯应用BAMG膀胱容积和顺应性能够恢复正常 ,但逼尿肌层较薄 ,应用BAMG复合自体ASCs或MSCs的组织工程膀胱替代 ,术后 12wk膀胱容积和顺应性能够恢复正常 。

动物病毒疫苗研制及其产品的电镜检测

应用电镜技术检查了某些原代和传代细胞 ,并且跟踪检查了疱疹病毒、痘病毒、腺病毒、细小病毒、冠病毒、RNA反录病毒、呼肠病毒、动脉炎病毒、小RNA病毒、弹状病毒、杯状病毒、黄病毒、双RNA病毒、正粘病毒、副粘病毒等某些成员的驯化、培育及筛选的目的毒。结果发现了部分培养细胞有支原体污染 ,有的还有细菌污染 ;同时在某些培养的原毒、基础种毒、生产种毒及其产品中也发现了一些病毒的污染和联苗中互相感染现象。如此证明了电镜技术能够及时发现问题 ,及时解决问题 ,使之科研少走弯路 。

动物转基因与核移植技术的新进展

本文就动物转基因与核移植技术进行文献回顾。原核注射是一种可靠、使用广泛的动物转基因方法。但该方法存在花费时间长、整合效率低及不能定点整合的问题。所以近年来出现了一些新的转基因方法 ,包括精子介导、反转录病毒介导、携带外源基因体细胞的核移植、ES细胞基因打靶技术等。这些方法中动物核移植技术贡献较大 ,很有前途。核移植技术解决了同源重组在大动物上的限制。可以应用于生物制药动物保种、预防遗传病、辅助生殖及治疗性克隆。

大鼠实验性牙髓炎痛敏模型的建立及检验

目的:验证牙髓暴露法建立大鼠实验性牙髓炎痛敏模型的可行性。方法:取健康雄性SD大鼠36只,随机分为2组;对照组(n=10)麻醉后不作任何处理,牙髓炎模型组(n=26)麻醉后于左侧上颌第一磨牙穿髓并使之暴露于口腔。然后,每组中各随机抽取6只分别检测其术前及术后1、3、7、14 d的擦面行为。对照组所余4只于术后2 h取延髓及牙髓,牙髓炎组所余20只分别于术后2 h取延髓,1、3、7、14 d取牙髓;用免疫荧光染色检测延髓中c-Fos蛋白及牙髓中TNF-α的表达,HE染色观察牙髓炎症情况。结果:1牙髓炎组在建模术后1 d时的擦面总时间最高,其次为术后3 d组,两者分别与组内其他各时间相比,以及与同一时间点的对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);2HE染色显示,牙髓暴露1 d时即可见明显炎症,术后1、3、7、14 d,其坏死组织的边缘分别位于髓角和根上、中、下1/3处;3牙髓炎组在术后1、3、7、14 d各时间点的TNF-α表达强度的平均光密度值均明显高于对照组(P<0.05);4术后2 h牙髓炎组和对照组延髓背角的c-Fos阳性细胞数为176.8±14.82和18.2±4.08(P<0.05)。结论:牙髓暴露法能有效模拟临床牙髓炎及其痛敏过程。

前列腺癌体内实验模型的研究进展

前列腺癌是男性最为常见的恶性肿瘤之一。近年来有关前列腺癌的相关研究取得了较大突破,但由于缺少有效的体内实验模型,导致研究成果向临床应用的转化受到严重阻碍。人源性前列腺癌移植(patient derived prostate tumor xenograft,PDPTX)模型是将患者新鲜的肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠而建立的体内模型,该模型能较好地复制原发肿瘤的异质性,保持肿瘤在分子学、基因学和病理学的复杂性。特别是采用肾包膜移植建立PDPTX模型的方法较好地解决了传统皮下移植建模成功率低、低级别肿瘤成瘤难、无法实现移植瘤转移等缺点,为前列腺癌研究提供了更为理想的体内模型。尤其是在靶向治疗、新型药物筛选、个体化治疗等方面具有不可取代的优势。

缺血后处理及川芎嗪对大鼠肾缺血再灌注氧自由基的影响

目的:探讨缺血后处理及川芎嗪对大鼠肾缺血再灌注氧自由基的影响.方法:成年雌性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只,分别为:假手术对照组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、川芎嗪治疗组(I/R+T组)和缺血后处理组(IPO组).各组动物于再灌注24h时取血,检测血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr),同时留取肾组织进行匀浆,测定匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(TAC).结果:与I/R组大鼠相比,I/R+T组和IPO组大鼠的BUN和Cr均下降(P<0.01),SOD升高(P<0.01),MDA下降(P<0.01),CAT升高(P<0.05),TAC升高(P<0.01);与I/R+T组大鼠相比,IPO组大鼠的BUN,Cr,SOD,MDA,CAT和TAC均无统计学差异(P>0.05).结论:缺血后处理能够抑制肾脏缺血再灌注损伤后氧自由基的过度生成,对缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其保护效应与川芎嗪治疗无明显差异.

小鼠肺栓塞模型的诱导及比较

目的 :建立 3种药物引起的小鼠肺栓塞模型 ,并比较不同肺栓塞模型之间的特点 .方法 :以C5 7BL/ 6小鼠为实验动物 ,采用随机分组法分为 5组 (n =5 ) .分别用胶原 +肾上腺素、二磷酸腺苷 (ADP)和凝血酶 3种药物的最低致死剂量经颈内静脉注射 ,诱导小鼠肺栓塞模型 ,以未处理组和生理盐水组为对照 ,研究小鼠肺部微血栓的数量和构成以及外周血小板计数的改变 .结果 :生理盐水组外周血小板计数减少了 (6 2± 8)× 1 0 9/L ,与生理盐水组相比 ,3种药物中外周血小板计数减少最多的是凝血酶组 (987± 1 35 )× 1 0 9/L ,P <0 .0 1 ,其次是胶原 +肾上腺素组 (4 5 9± 78)× 1 0 9/L ,P <0 .0 1 ,最少的是ADP组 (31 2± 4 6 )× 1 0 9/L ,P <0 .0 5 .光镜下观察 ,每高倍视野凝血酶组小鼠肺部微血栓形成的数量最多 (4 .9± 0 .3) ,其次是胶原 +肾上腺素组 (2 .3± 0 .5 ) ,最少的是ADP组 (1 .2± 0 .2 ) ,P <0 .0 5 .免疫组化结果提示 3种类型的肺栓塞都主要是由血小板和纤维蛋白构成的透明血栓 .结论 :3种药物可分别通过不同的途径激活凝血系统 ,在肺部形成性质相同但程度不等的肺栓塞 。

自噬在结核分枝杆菌感染中的作用及相关基因的表达

目的:探讨自噬在结核分枝杆菌(MTB)感染中的作用及相关基因的表达。方法:透射电镜观察在雷帕霉素诱导下自噬体的形成,通过克隆形成单位(CFU)检测自噬形成后对胞内感染的MTBH37Rv菌株的清除作用,以实时定量PCR方法检测自噬相关基因atg5、atg7、atg8、atg12mRNA表达水平。结果:在雷帕霉素诱导下,RAW264.7细胞可形成自噬体,自噬体产生后对胞内感染的H37Rv菌株具有一定的清除作用。在MTB感染过程中参与自噬形成的atg5、atg8、atg12mRNA表达量上调,而atg7表达量无变化。结论:自噬参与抗MTB免疫应答过程,而atg5、atg8、atg12是MTB感染形成自噬体的重要调控分子。

染料木素对去卵巢大鼠骨代谢的影响

目的 探讨染料木素对去卵巢所致骨质疏松模型大鼠的影响。方法 SD大鼠 36 0只 ,随机分为 7组 :正常对照组、模型组、骨疏康组、尼尔雌醇组和染料木素大、中、小剂量组。各组大鼠切除双侧卵巢 (正常对照组行假手术 ) ,术后第 8天开始ig给药 ,并分别于不同时间点从各组取 10只大鼠对体质量、血生化、BMD和生物力学等指标进行测定。结果 染料木素可抑制去卵巢模型大鼠的体质量增加 ,使模型大鼠的血清Ca、Mg、P、CT水平明显升高 ,BGP、ALP水平降低 ,与正常对照组有显著差异 ;在 4 .5、9mg·kg-1时可显著增强模型大鼠的股骨、胫骨和腰椎L2 - 4的BMD ;对模型大鼠的股骨生物力学指标有明显改善(P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 染料木素可明显改善去卵巢模型大鼠的血生化指标、骨密度和生物力学指标 ,对骨质疏松有较好的疗效。

磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合人工骨的生物相容性

目的 将自行合成的磷酸钙骨水泥 ( CPC)作为载体与 BMP复合成人工骨 ,检测其生物相容性 .方法 制备CPC/BMP及 CPC骨块 ,通过体外实验、细胞培养、动物实验等方法观察其毒性、免疫原性、对血液系统的影响等生物相容性指标 .结果 动物实验表明材料属无毒级 ,不含致热原 ,体外试验不引起溶血反应 ,对凝血功能无明显影响 .植入兔或小鼠肌袋内未检测出特异性抗体 .组织学检查未见免疫排斥反应 ,对肌肉无刺激作用 .对体外培养的细胞增殖没有明显抑制作用 .结论 材料有较好的生物相容性 。

狂犬病研究动态

狂犬病是一种急性传染性疾病,狂犬病病毒属于弹状病毒科,可感染所有温血动物,其主要临床特征表现为恐水怕惊、咽肌痉挛、持续性或阵发性抽搐等症状。世界各地均有狂犬病的发生,其主要传染源是犬科和猫科动物。中国近十年来狂犬病发病率有所上升,主要原因是养犬数量剧增、免疫接种比率下降。目前,狂犬病的发病机制还不是很清楚,期望在阐明发病机理的基础上研制出特效药物。目前惟一能够控制狂犬病的方法是进行狂犬病疫苗的有效预防接种,文章就有关狂犬病疫苗的研制进展进行了分析与述评。

结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的免疫学特性

目的 研究原核表达的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85 B的免疫学特性 .方法 用原核表达的 Ag85 B蛋白免疫 BAL B/c小鼠 ,EL ISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果 .分离免疫小鼠的脾淋巴细胞 ,体外用抗原再刺激 ,MTT方法检测 IFN- γ产生水平和 MTT法检测淋巴细胞增殖 .结果 Ag85 B免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答 ,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激 ,淋巴细胞的增殖较显著 . MTT方法检测 Ag85 B免疫小鼠的 IFN-γ量为 96 0pg· L- 1 ,而生理盐水对照组的量低于 80 pg· L- 1 .结论 Ag85

环磷酰胺抗血管生成化疗抑制鼠S180皮下肉瘤血管形成的作用

目的:研究环磷酰胺(CTX)抗血管生成化疗(ACT)对昆明鼠S180皮下肉瘤血管形成的抑制作用及机理.方法:将荷S180肉瘤(100mm3)鼠随机分成A组(CTX抗血管生成化疗组),B组(CTX标准化疗组)和C组(生理盐水对照组).按实验方案处理后,检测抑瘤率和肿瘤组织微血管密度,透射电镜观察内皮细胞形态;将接种S180细胞的小鼠随机分成A′组(CTX抗血管生成化疗组),B′组(CTX标准化疗组)和C′组(生理盐水对照组)按实验方案给药,计算成瘤率及肿瘤内的微血管密度.结果:A,B组抑瘤率分别为89.3%和89.9%,A,B,C组微血管密度计数分别为(7.6±5.2),(16.5±5.5)和(17.9±4.7)个/mm2,A′,B′,C′组成瘤率分别为43.8%,6.3%和87.5%.结论:CTX抗血管生成化疗抑制鼠皮下肉瘤微血管形成,并抑制肿瘤的形成和生长.