抗大豆Ⅱ号亚型钙调素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗大豆Ⅱ号亚型钙调素(SCaM-2)单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:从含有pSCaM-2的大肠杆菌BL21中,提取并纯化SCaM-2。以其作为抗原免疫BALB/c小鼠后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞经细胞融合筛选及克隆化,建立稳定分泌SCaM-2mAb的杂交瘤细胞株并对抗SCaM-2mAb进行鉴定。结果:经两次细胞融合,共获得10株可稳定分泌抗SCaM-2mAb的杂交瘤细胞株。对其中3株杂交瘤细胞制备的腹水mAb(6F11F3、7C5E9、7E10E2)用间接ELISA及免疫印迹实验表明,在高稀释度时,mA6F11F3可识别SCaM-1和SCaM-2,而mAb7C5E9和7E10E可分别识别SCaM-4和SCaM-5。Ig亚类鉴定结果表明,mA6F11F3和7C5E9均为IgG2a,mAb7E10E2为IgG1。相加实验的结果显示,mAb6F11F3和7C5E9可能识别SCaM-2相同的抗原表位;而mAb7E10E2可能识别不同的抗原表位mAb6F11F3对SCaM-2的亲和常数为(2.127±0.418)106M-1,mAb7C5E9对SCaM-4的亲和常数为(9.69±2.406×106M-1,mAb7E10E2对SCaM-5的亲和常数为(1.2030.429)×107M-1。结论:制备了可识别不同SCaM亚型的mAb6F11F3、7C5E9及7E10E2,为研究SCaM的特性及功能提供了重要的制剂。