RAM7,一种新的核蛋白分子在小鼠中枢神经系统的表达

Notch信号途径参与动物多种组织和器官尤其是神经系统的发育调节。 RBP-Jκ是 Notch信号途径中的关键分子 ,RAM7是近年通过酵母双杂交技术发现的与 RBP-Jκ相互作用的蛋白。本实验表达 RAM7C-末端 60 k D的多肽片段 ,并制备特异性的多克隆抗体 ,检测 RAM7在小鼠中枢神经系统的分布。结果显示 :RAM7主要呈细胞核染色 ,在中枢神经系统中广泛分布 ;尾壳核、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、室周核等核团内没有 RAM7阳性神经元 ,但存在着一定数量的 RAM7阳性神经纤维 ;另有相当多 RAM7胞浆染色的细胞和神经元以及一些胶质细胞 ,局限在脑室和脑室周围的神经组织中。

信号肽捕获系统的建立

细胞分泌性蛋白的分泌有赖于蛋白质Ｎ端的信号肽的存在。利用酵母建立了从ｃＤＮＡ文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统。为此，用一步基因破坏法对酿酒酵母ＥＧＹ４８基因组中的ｓｕｃ ２基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位突变，获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ。将无信号肽的ｓｕｃ ２成熟肽基因克隆于酵母乙醇脱氢酶（ＡＤＨ１）基因启动子下游，得到用于文库筛选的酵母真核表达载体。启动子与成熟肽基因之间为多克隆位点，用于插入待筛选的ｃＤＮＡ文库。用此载体转化酵母ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ，所得克隆可在以葡萄糖为碳源的培养基上生长，但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长；在ｓｕｃ ２成熟肽基因前分别插入ｓｕｃ ２信号肽基因片段或人ＩＬ－２受体α 链信号肽基因片段，然后转染ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ，所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长，也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长。表明构建的系统可用于筛选插入多克隆位点的ｃＤＮＡ片段是否具有编码信号肽的功能。

兔抗人ERA多克隆抗体的纯化

目的纯化兔抗人ERA的多克隆抗体。方法在大肠杆菌中,表达重组MBPhEra融合蛋白。表达产物先继以直链淀粉树脂亲和柱和Superose12凝胶柱过滤纯化。将纯化的MBPhEra偶联于NHSactivatedSepharoseTM上,制备亲和层析柱,纯化兔抗人ERA多克隆抗体。结果①表达、纯化的MBPhEra,相对分子质量Mr为78×103,其纯度为95%。②从抗血清中纯化获得可与MBPhEra特异性结合的兔抗hEra多克隆抗体。结论获得了特异性较好的纯化兔抗hEra多克隆抗体。

蓖麻毒素对肝癌细胞核转录因子NF-κB的激活作用

目的：探讨蓖麻毒素细胞毒性作用的分子机理。方法：采用免疫细胞化学和 Western blot等方法观察蓖麻毒素作用于人肝癌细胞后，引起核转录因子 NFκ B的变化。结果： 100 pmol/L的蓖麻毒素处理细胞后，随着时间的延长（ 30 min、 1 h和 2 h）， NFκ B由胞浆逐渐向核内转移， 2 h后胞浆和胞核的着色均变浅，表明 NFκ B的活性略有减弱；随着蓖麻毒素浓度的增大，核内棕色颗粒也有加深的趋势。结论：本结果表明蓖麻毒素通过其糖配基与肝癌细胞相互作用后，能启动核转录因子 NFκ B的表达。 NFκ B激活在其抗癌作用中起着重要作用。

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中PKC活性测定

目的 测定增生性瘢痕和瘢痕疙瘩等瘢痕组织中PKC活性变化 ,探讨PKC在瘢痕形成中的作用。方法 利用PKC活化后催化底物多肽磷酸化 ,然后计数底物中掺入32 P的放射活性的原理 ,测定增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、成熟瘢痕和正常皮肤组织中PKC活性。结果 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中PKC的活性显著高于成熟瘢痕和正常皮肤 (P <0 .0 0 1,分别高出正常皮肤 318.30 %和 5 19.0 7% ) ,瘢痕疙瘩高于增生性瘢痕 (P <0 .0 0 1,高出 48.6 0 % )而成熟瘢痕和正常皮肤间没有差异 (P >0 .0 5 )。结论 瘢痕组织中PKC活性升高且与增生程度相关 。

蓖麻毒素诱导U937细胞分泌IL-6和IL-8的作用

目的 :进一步研究蓖麻毒素是否具有诱生U937细胞分泌细胞因子的作用。方法 :采用MTT法检测了蓖麻毒素对U937细胞的毒性 ,并采用ELISA法测定细胞培养上清中的IL 6和IL 8。结果 :蓖麻毒素对U937细胞的毒性具有时间效应和剂量效应。随着作用时间的延长 ,诱生 2种细胞因子的量逐渐增加 ;随蓖麻毒素剂量的增加 ,诱生 2种细胞因子的量均减少。结论 :蓖麻毒素诱导 2种细胞因子的产生为其抗癌应用或其它作用提供理论依据。

非受体蛋白酪氨酸激酶Tec家族的研究进展

Ｔｅｃ家族是近几年国外研究较活跃的胞浆内酪氨酸蛋白激酶分子，它们主要在淋巴细胞和髓样细胞中表达。该家族成员有Ｂｔｋ、Ｉｔｋ／Ｔｓｋ／Ｅｍｔ、Ｔｅｃ、Ｔｘｋ和Ｂｍｘ，其结构具有高度同源性，均由ＰＨ结构域、ＳＨ３、ＳＨ２及激酶结构域组成，其Ｎ端缺乏疏水性...