生物技术专业实验课教学方法初探

通过分析生物技术实验课的现状,针对目前教学中存在的问题,探讨生物技术实验教学改革的方向,并分析了开设设计性实验教学的意义。

应用酵母双杂交系统筛选Foxp3△2相互作用蛋白

目的：应用酵母双杂交系统从人外周血白细胞cDNA文库中筛选与转录因子Foxp3相互作用的蛋白，为进一步研究Foxp3的转录调控机制奠定基础。方法：首先构建pG—BKT7／-Foxp3△2酵母双杂交诱饵载体，转化AH109酵母细胞，检测其毒性及自激活作用；然后将诱饵质粒与人外周血白细胞eDNA文库共转AH109酵母细胞，筛选了与Foxp3△2存在相互作用的蛋白。结果：成功构建了pGBKT7-Foxp3△2酵母表达载体，经转染AHl09酵母细胞，无有毒性，无自激活作用。获得了40个阳性克隆，经生物信息学分析，其中9个具有开放读框。结论：应用酵母双杂交技术筛选出一组可与Foxp3△2相互作用的候选蛋白，为进一步研究Foxp3△2功能奠定了基础。

天花粉蛋白对IL-1β介导下的人牙周膜细胞MMP-1表达的影响

目的观察天花粉蛋白(TCS)对白细胞介素-1β(IL-1β)介导下人牙周膜细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响,为进一步研究对抗牙根吸收的可能途径提供实验依据。方法用IL-1β10 ng/ml作用于体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs),通过噻唑蓝比色测定法(MTT)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),观察IL-1β对hPDLCs生长状态及MMP-1表达影响;将TCS 0.05 ng/ml作用于IL-1β介导状态下的hPDLCs,观察hPDLCs生长状态及MMP-1表达的变化。结果在IL-1β及IL-1β复合TCS作用下,hPDLCs的增殖状况无明显改变(P>0.05);IL-1β介导下,hPDLCs中MMP-1的mRNA表达呈上升趋势。相对于IL-1β单独作用,IL-1β复合TCS作用下,hPDLCs中MMP-1的mRNA表达下调。结论IL-1β介导下的hPDLCs的MMP-1表达增高;TCS有抑制IL-1β介导下的hPDLCs MMP-1表达增高作用。

精准医疗时代背景下医学分子生物学实验设计的探讨

目的：通过设计综合实验，将精准医疗理念融入医学分子生物学实验教学，并探讨其效果。方法选择第四军医大学2012级和2013级八年制临床医学专业66名学生为教学对象；2013级36名学生为实验组，采用精准医疗相关的综合实验设计，将传统实验教学内容融会贯通；2012级30名学生为对照组，采用传统实验教学。教学结束后对两组学生实施实验理论和技能考核；通过问卷调查，让学生评估自身所受教学方法的效果；并统计两组学生课后提问次数≥1次的人数，以评估其学习积极性。采用SPSS 15.0，对两组学生各项数据行t检验或卡方检验。结果考核结果表明，实验组学生的理论与技能平均成绩均优于对照组；尤其在综合实验设计的考核部分，两组学生成绩分别为（16.7±2.04）分和（13.9±2.87）分，差异有统计学意义（P=0.000）。问卷结果显示，实验组学生对自身所受教学在提高学习兴趣、对精准医疗的认识、对临床科研的认识、创新能力、知识掌握程度等方面的满意度高于对照组，差异具有统计学意义（P〈0.05）。而学习积极性方面，实验组学生提问人数与比例高于对照组（P=0.000）。结论以精准医疗为切入点开展医学分子生物学综合性实验教学，可使各知识点不再孤立、碎片化；从而激发学生的学习兴趣，有利于学生形成与精准医疗时代特征相适应的临床思维，提高科研素养，培养创新意识。

重组人B7-H1IgV工程菌生物学特性的稳定性

目的检测重组人B7-H1IgV(rhB7-H1)工程菌生物学特性的稳定性。方法将重组质粒pQE30-B7-H1IgV转化的大肠杆菌rhB7-H1/DH5α工程菌连续传代50代,每隔10代进行工程菌B7-H1IgV蛋白表达量检测、扫描电镜观察、革兰染色、各项生化反应及质粒的酶切鉴定。结果各代工程菌中B7-H1IgV蛋白的表达量均为菌体总蛋白的10%左右;各代工程菌提取的质粒双酶切后均可见381 bp的目的基因片段;各代工程菌均呈典型的大肠杆菌形态,革兰染色显示为阴性杆菌,各项检测结果与原始菌种无显著差异。结论该工程菌生物学特性稳定,可作为生产用菌种用于大规模生产。