小鼠α1,3-半乳糖糖基化修饰对人肝癌HuH7细胞生物学特性的影响

目的:探讨利用小鼠α1,3半乳糖基转移酶基因进行肝癌基因治疗的可行性。方法:将pcDNA3.1-α1,3GT真核表达载体以脂质体介导法转染人肝癌细胞HuH7,经G418压力筛选出稳定表达的阳性克隆,经生长曲线法,平板克隆形成试验,流式细胞仪等试验分析稳定表达株相关生物学特性变化。结果:转染有α1,3GT的HuH7经RT-PCR法检测到有α1,3GT的表达,免疫荧光镜检测其细胞表面有明显的Galα(1,3)Gal糖表位表达,转染细胞的增殖能力明显降低,同时促进细胞凋亡。结论:转染α1,3-半乳糖基转移酶基因可明显抑制人肝癌细胞HuH7的恶性生物学行为,具有潜在的临床应用价值。

融合IL2的慢病毒实现对T细胞的高效基因转导

目的制备融合IL2的慢病毒以提高对人原代T淋巴细胞的转导效率。方法将白细胞介素-2(IL2)基因定向克隆至水疱性口炎病毒G蛋白(VSV-G)编码基因5′端,构建新型慢病毒包装辅助质粒pMD2.IL2-G。使用不同剂量pMD2.IL2-G进行慢病毒包装,应用免疫印迹和ELISA比较病毒滴度,流式细胞术检测病毒对T细胞的转导效率。结果单独使用pMD2.IL2-G显著降低病毒得率。与传统慢病毒相比,pMD2.IL2-G与原始辅助质粒pMD2.G以1∶4混合制备的慢病毒,能够显著提高EGFP基因导入T细胞的效率(89.2%vs.40.2%),且病毒得率相当。结论融合IL2的慢病毒能够对T细胞进行高效的基因转导,为基因修饰T细胞的临床应用提供有力支持。

抑制NDRG2基因表达对宫颈癌Hela细胞紫杉醇化疗敏感性的影响

目的:NDRG2是N-Myc downstream regulated gene家族的成员之一,与细胞增殖和分化相关。前期研究发现,抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对于顺铂的化疗敏感性,本研究采用RNA干扰技术抑制人宫颈癌Hela细胞中NDRG2基因的表达研究其对Hela细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法:利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA瞬时转染Hela细胞株,采用RT-PCR和Western Blot检测NDRG2 mRNA和蛋白表达情况,通过MTT法检测其与对照细胞在顺铂作用下的体外存活率差异。SPSS11.0统计包处理,采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:在mRNA和蛋白水平,化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低。在0.1、1、10、100、500、1000μg/mL紫杉醇浓度组,Negative-control和NDRG2siRNA细胞的相应细胞存活率分别为97.21±2.38、90.09±2.42、83.35±3.86、62.93±3.75、18.22±5.46、1.14±0.67和99.62±3.15、94.91±3.83、85.71±2.93、58.59±3.36、17.99±3.40、0.73±0.34,组间比较P值均大于0.05,差异无统计学意义。结论:抑制NDRG2表达不影响宫颈癌Hela细胞在紫杉醇作用下的细胞存活率,不能提高其对紫杉醇的化疗敏感性。进一步拓展了对该基因的功能认知。