结核分枝杆菌差异蛋白MPT64与ESAT6的融合表达与纯化

目的:融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64ESAT6,为结核病的预防提供可供选择的有效亚单位疫苗.方法:设计含不同酶切位点的mpt64和esat6引物,采用PCR的方法从结核分枝杆菌毒株H37RvDNA中分别扩增出相应大小的DNA片段,将片段分别与Teasy载体连接测序.将测序正确的mpt64和esat6按照不同的酶切位点克隆入pProEXHT表达载体,挑选出阳性克隆,将诱导的表达产物进行SDSPAGE蛋白电泳分析,同时与6×His的mAb进行Westernblot分析,并用NiNTA亲合柱纯化表达产物.结果:PCR获得的mpt64和esat6序列与GenBank报道的完全一致.两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物Mr为38×103,与预计大小相吻合.Westernblot结果显示,在Mr约38×103处有表达产物与6×HismAb特异性结合带.表达产物为包涵体,通过NiNTA纯化系统,可得到纯化的目的蛋白.结论:结核分枝杆菌的分泌蛋白MPT64和ESAT6被成功的融合表达,有望为结核的临床判定提供有效的诊断试剂.