快速构建组织工程化骨修复骨缺损的研究

目的探讨不同条件下所构建组织工程化骨对兔颅骨骨缺损修复的影响。方法制备兔双侧颅骨标准性骨缺损,并将动物分为3组,A组:两侧分别植入旋转式细胞培养系统(RCCS)培养8h(用R8表示)和静态培养8h(用S8表示)所构建组织工程化骨;B组:两侧分别植入RCCS培养24h(R24)和静态培养24h(S24)所构建组织工程化骨;C组:两侧分别植入RCCS培养72h(R72)和静态培养72h(S72)所构建组织工程化骨。分别于4、8和12周取材行大体和组织学观察,并对12周标本进行新骨形成面积定量分析和生物力学测试。结果与静态培养组相比,RCCS培养组,胶原和骨痂形成更多,骨小梁更厚,板层骨排列更规则。新骨形成面积定量分析,RCCS组成骨面积显著大于静态培养组(P<0.01)。生物力学测试也显示,RCCS培养组抗压强度显著高于静态培养组(P<0.01)。但R24组与R72组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论RCCS是快速构建组织工程化骨的理想方案,培养24h是较可行的选择。

Spry1在miR-21调控人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

背景:前期研究发现,miR-21在骨髓间充质干细胞成骨分化中表达上升,但是miR-21在骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用及分子机制尚不明确。目的:验证miR-21的靶基因Spry1,探明Spry1在人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用。方法:荧光素酶报告验证miR-21靶基因Spry1,Western Blot检测Spry1在人骨髓间充质干细胞成骨过程的表达。构建Spry1慢病毒表达载体,感染人骨髓间充质干细胞。碱性磷酸酶、茜素红染色、RT-PCR和Western Blot分析Spry1高表达后人骨髓间充质干细胞成骨能力的改变。结果与结论:荧光素酶报告提示Spry1为miR-21的靶基因,在人骨髓间充质干细胞成骨过程中表达量下降。上调Spry1能够抑制人骨髓间充质干细胞的成骨分化。结果表明Spry1作为miR-21的靶基因负向调控人骨髓间充质干细胞的成骨分化,在骨形成过程发挥着重要作用。

骨髓间充质干细胞向牙髓组织迁移体内模型的构建

目的:构建一种骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)向牙髓等口腔组织迁移分化的体内模型,为进一步研究BMMSCs迁移、归巢机制从而诱导其修复、再生口腔组织奠定基础。方法:将第1代绿色荧光蛋白(Green flurensence protein,GFP)转基因小鼠的BMMSCs与野生型C57BL6小鼠的全骨髓细胞按一定比例混合后,尾静脉注射入亚致死量照射24h后的16只同品系小鼠体内(GFP-BMMSCs:2×105/只;BMCs:2×106/只),28d后随机选取6只嵌合小鼠,检测其股骨BMMSCs中GFP+BMMSCs细胞的比例。对同一处理组剩余小鼠右下颌磨牙牙髓施加刺激,7d后行多聚甲醛心脏灌注,并采集标本,常规脱钙处理后以自体左侧磨牙作为对照,组织学观察比较牙髓中荧光细胞数量改变。结果:嵌合模型股骨BMMSCs中GFP+的比例为(76.32±3.46)%,口腔刺激侧牙髓中荧光细胞数量明显多于同一个体对照侧(P<0.05)。结论:以荧光细胞作为示踪标记的骨髓移植动物可作为有效的研究模型探索骨髓间充质干细胞在体向牙髓等口腔组织迁移分化机制。

兔骨髓基质干细胞的分离、扩增和生物学特性检测

目的探讨密度梯度离心法分离培养兔骨髓基质干细胞(MSCs)的条件,为组织工程选择合适的种子细胞奠定基础。方法采用密度梯度离心法将兔MSCs自少量骨髓中分离并培养,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线,测定贴壁率。结果兔MSCs性状稳定,生长曲线相似,第5-6天细胞数目最多;传代后10 h贴壁率高达90%。结论密度梯度离心法是分离兔MSCs的理想方法,MSCs能为未来组织工程提供足量种子细胞。

脱细胞猪角膜的制备及其生物学性能观察

目的制备脱细胞猪角膜(DPC)并观察其生物学性能。方法用高渗盐溶液浸泡、低浓度酶消化、冻干的方法制备DPC。对比观察DPC、人羊膜(HAM)、兔角膜(RC)的光学特性和机械强度,阿贝折射仪测量折射率,PE分光光度计测量透射率,小型英斯特朗仪测量抗拉强度和弹性模量。结果折射率DPC为1.331 3、HAM为1.332 2、RC为1.334 0;透射率DPC为70%、HAM为72%、RC为92%;抗拉强度DPC为2.4 mPa、HAM为3.6mPa、RC为4.5 mPa;弹性模量DPC为3.8 mPa、HAM为0.78 mPa、RC为5.3 mPa。三种材料的折射率相比,P>0.05;DPC与HAM的透射率相比,P>0.05;三种材料的抗拉强度和弹性模量相比,P均<0.05。结论成功制备了DPC,DPC具备与HAM相似的光学特性,DPC有其自身独特的力学特性,能耐受手术缝合。

CT和MRI在卵巢癌定性、分期、侵袭和转移诊断中的价值以及临床应用

目的探讨卵巢癌的CT及MRI在诊断定性、分期及其对周围器官侵袭和转移的诊断价值及临床意义。方法对68例卵巢癌患者术前同时行CT和MRI检查,结合手术结果、病理诊断与临床分期对照分析。结果 (1)CT对卵巢癌的诊断符合率为80.9%(55/68),MRI为92.6%(63/68),MRI优于CT(χ2=3.0235,P<0.05)。(2)MRI对卵巢癌的定性诊断优于CT(χ2=4.2531,P<0.05),分期诊断优于CT(χ2=5.7129,P<0.05)。(3)MRI对转移至肠道、子宫及输卵管、肝脏等远处及淋巴结的诊断敏感度显著高于CT(P<0.05);对转移至腹膜、网膜的诊断敏感度略低于CT(P<0.05)。CT诊断卵巢癌转移的诊断总符合率为75.4%(46/61),MRI为88.5%(54/61),MRI显著高于CT(χ2=10.1723,P<0.05)。结论 MRI对于卵巢癌定性、分期及肿瘤侵犯周围器官和转移的诊断显著优于CT,二者联合应用,可以提高卵巢癌的诊断率。

喉黏膜间充质干细胞肌向分化的实验研究

目的 将喉黏膜间充质干细胞（laryngeal mucosal mesenchymal stem cells,LM-MSC）向成肌细胞诱导分化,为声带部分或全部缺失的组织工程修复寻求优势种子细胞.方法 从正常会厌舌面黏膜分离培养获得LM-MSC,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD44、CD105、CD90、CD29、CD34和CD45;向成脂、成骨细胞分化鉴定细胞多向分化潜能,油红O、茜素红染色鉴定成脂、成骨分化情况;加入成肌诱导液向成肌细胞方向分化,于成肌诱导分化后1周和3周时行免疫荧光化学染色,诱导后1周、3周和6周行实时定量RT-PCR分析,以分别定性和定量分析成肌分化相关蛋白及基因Myod1、Myogenin、肌球蛋白重链（myosin heavy chain,MyHc）的表达.结果 本实验分离培养获得的LM-MSC可贴壁生长,呈长梭形;高表达间充质干细胞表面分子标志物：CD44（100.0％）,CD105（90.4％）,CD90（99.9％）,CD29 （93.0％）,低表达造血系干细胞表面分子标志物：CD34（0.4％）和CD45（1.3％）;LM-MSC在体外定向向成脂、成骨分化14 d和21 d后有大量串珠样脂滴和矿化结节生成;成肌细胞初始标志蛋白Myod1和特异性标志蛋白Myogenin,MyHc分别于成肌诱导分化后1周和3周出现,RT-PCR结果与免疫荧光化学染色结果一致,并且相关基因持续表达于成肌诱导分化后6周.结论 LM-MSC符合间充质干细胞的特性,并可定向分化为成肌细胞,有潜能成为声带组织工程修复的优势种子细胞.