CD147介导CD4^+肿瘤浸润淋巴细胞促进乳腺癌进展

目的分析各T淋巴细胞亚群中CD147的表达水平以及CD147表达量在健康对照者外周血,乳腺癌患者外周血、淋巴结和肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+T细胞的变化,分析CD147对乳腺癌患者预后的影响。方法采用Robust Multi-array Averaging的标准化方法提取GEO芯片GSE14308、GSE36765和GSE6532中的CD147表达数据。不同的基因表达水平的比较采用方差分析,生存曲线采用Log-Rank检验以及Cox比例风险回归模型进行多因素分析。结果 CD147在C57BL/6J小鼠淋巴结中的Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞表达水平是Th0细胞的8~12倍。在乳腺癌患者的CD4+肿瘤浸润淋巴细胞中,CD147的表达水平显著高于健康对照者外周血、乳腺癌患者外周血和淋巴结中的CD4+T细胞。Log-Rank分析中,CD147表达量高低与无复发生存时间显著相关。Cox多元回归模型显示CD147高表达是乳腺癌复发的危险因素(风险度=1.764;95%可信区间:1.088~2.859)。结论 CD147可能通过上调CD4+T细胞的功能参与炎症反应,促进乳腺癌的进展。

新城疫病毒Italien株辅助质粒的构建及功能鉴定

目的构建基于T7启动子的含新城疫病毒(NDV)Italien株核衣壳蛋白(NP)、磷酸化蛋白(P)和蛋白(L)基因的表达质粒,作为构建重组NDV所需的辅助质粒。方法将NDV的NP、P和L基因酶切后置于T7启动子和核糖体进入位点序列的下游,分别构建NP、P和L基因的表达质粒,转染BSR-T7/5细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)检测病毒蛋白的表达,利用微型基因组(MG-L)质粒检测辅助质粒组装核糖核酸蛋白质复合物(RNP)的功能。结果测序证实辅助质粒构建正确。IFA检测可观察到NP和P基因的表达。与MG-L单转染对照组和空白对照组相比,辅助质粒和MG-L共转染后,报告基因萤火虫荧光素酶得到高效表达(P<0.001)。结论成功构建了基于T7启动子的NDV辅助质粒,为进一步构建重组溶瘤NDV Italien株奠定了基础。

人Notch1受体shRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建人特异性受体Notch1短发夹RNA重组腺病毒载体,探讨其对人脐带间充质干细胞中Notch1表达的影响,以便进一步研究Notch1的生物学功能。方法:设计合成Notch1序列干扰序列,插入到pGenesil-1.1上构建重组质粒,取阳性克隆进行酶切及DNA测序鉴定。通过同源重组,构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体pGsadeno-Notch1-shRNA。经Pac I线性化后脂质体介导转染到HEK 293细胞,包装后得到腺病毒颗粒。产生的重组腺病毒体外转染人脐带间充质干细胞,RT-PCR和Western blot检测特异性shRNA对人脐带间充质干细胞中Notch1蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果:经酶切及DNA测序重组腺病毒质粒构建正确。重组腺病毒转染人脐带间充质干细胞3 d后,RT-PCR及Western blot检测,可显著下调细胞内Notch1的转录及蛋白表达水平。对Notch1 mRNA和蛋白表达的抑制率分别为70.31%和86.97%,具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了表达人Notch1受体shRNA的重组腺病毒载体,为研究Notch1在肿瘤学中的生物学作用及机制奠定基础。