一氧化碳中毒与一氧化碳中毒迟发性脑病的研究进展

急性一氧化碳中毒是指在短时间内吸入过量一氧化碳（CO）所引起的中毒。它是以中枢神经系统（CNS）损伤为主的全身性疾病，是当今发生率和死亡率最高的中毒。急性CO中毒治疗不及时或者即使经过积极治疗，仍有3％-30％的患者于中毒症状缓解后，经过一段时间的“假愈期”（3～240d）发生迟发性脑病（DNS）。本文重点就急性CO中毒和DNS的发病机制、病理学特点、临床诊断和治疗等的研究进展进行综述，以期为其基础与临床研究提供理论基础。

急性CO中毒大鼠脑内VCAM-1表达CD4^+ T淋巴细胞浸润规律的研究及高压氧干预后的变化

目的观察急性CO中毒后大鼠脑内血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达、CD4+T淋巴细胞浸润情况,从系统细胞免疫反应角度探讨迟发性脑病(DNS)与免疫反应的关系。方法30只SD雄性大鼠随机分为对照组,染毒后1、3、7d组和高压氧(HBO)治疗7d组,每组6只。采用HE和免疫组织化学染色方法,观察染毒后各时间点大鼠脑内病理形态学变化,及VCAM-1表达、CD4+T淋巴细胞浸润情况。结果对照组无VCAM-1表达、无CD4+T淋巴细胞浸润;各染毒组大鼠脑内微血管内皮细胞和变性坏死的神经元均有VCAM-1不同程度的表达。染毒后1d组为表达高峰(P<0.01),3d组VCAM-1的表达数量有所减少。此时,局部大脑皮层开始有CD4+T淋巴细胞浸润;至染毒后7d,在部分变性坏死的神经元上仍有VCAM-1的持续表达,而CD4+T淋巴细胞浸润达高峰(P<0.01)。染毒后立即进行HBO治疗7d,其VCAM-1、CD4+T淋巴细胞均显著减少,与染毒后7d组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论系统细胞免疫反应可能参与了DNS的发生。

MMP-9在高压氧治疗急性CO中毒脑损伤中的作用

目的 通过高压氧治疗急性一氧化碳（CO）中毒大鼠,研究皮层神经细胞凋亡与MMP-9表达变化的关系,探索MMP-9在高压氧治疗急性CO中毒脑损伤中的作用.方法 体质量180~200 g的雄性SD大鼠,建立急性CO中毒模型.应用免疫组织化学以及免疫荧光的方法,测定染毒后以及高压氧治疗后第7天 Bcl-2、Caspase-3、Neuron、MMP-9、GFAP表达水平的变化.结果 在中毒组中,Bcl-2、Caspase-3表达量均有所升高（P〈0.05）,Neuron所标记的神经细胞数目比正常对照组少,MMP-9表达量明显增高（P〈0.05）,GFAP标记的星形胶质细胞数目明显增多.经过高压氧治疗后,Bcl-2、Caspase-3、MMP-9表达量均有所降低（P〈0.05）,Neuron所标记的神经细胞数目趋于正常组,GFAP所标记的星形胶质细胞数目也减少.结论 MMP-9可能降解神经细胞周围的基质,阻断细胞基质对神经细胞的营养作用,进而参与到了急性CO中毒后神经细胞的凋亡过程中.高压氧治疗可降低MMP-9以及调节相关凋亡因子的表达,抑制神经细胞的凋亡.

急性一氧化碳中毒大鼠脑单核细胞趋化蛋白-1的表达及高压氧干预后的变化

目的观察急性CO中毒后大鼠脑组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达和单核/巨噬细胞的聚集情况,为急性CO中毒迟发性脑病(DNS)的免疫学发病机制提供新的证据。方法50只SD雄性大鼠随机分为对照组,染毒后1、3、7d组和高压氧(HBO)治疗7d组,每组10只。采用HE、免疫组织化学染色及反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,观察染毒后各时间点大鼠脑组织病理形态学变化,及MCP-1表达、单核/巨噬细胞聚集情况。结果对照组MCP-1表达极低,染毒后1d,MCP-1表达迅速增加,染毒后3d达到高峰,染毒后7d表达有所减少,HBO治疗组MCP-1表达较染毒后7d组显著减少(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05)。对照组仅有极少量单核/巨噬细胞出现,染毒后1d,阳性细胞数量增多,染毒后7d达到高峰,HBO治疗组单核/巨噬细胞数量较染毒后7d组显著减少(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05)。结论MCP-1表达和单核/巨噬细胞聚集可能参与CO中毒DNS的发生,HBO可通过减少MCP-1表达和阻止单核/巨噬细胞聚集而减轻脑组织的损伤。

实验性糖尿病大鼠早期视网膜电图的变化

目的 :观察实验性糖尿病早期对大鼠视网膜电图的影响 .方法 :链脲佐菌素诱导的糖尿病组大鼠和日龄相匹配的对照组正常大鼠 ,采用国际临床视觉电生理学会推荐的标准化方案 ,在糖尿病早期阶段 (5wk内 )对其进行杆细胞反应、最大反应、振荡电位、明适应视网膜电图和 2 0Hz闪烁反应 5个项目的检查 .结果 :在诱导糖尿病前和建模后 1wk时 ,糖尿病组大鼠与对照组相比未发现视网膜电图的异常 ;在建模后 2wk和 5wk时 ,糖尿病组杆细胞反应b波、最大反应b波、振荡电位O2 波和明适应视网膜电图b波的潜伏期都比对照组相应各波的潜伏期显著延长 ;两组大鼠各波的幅值始终未发现显著改变 .结论 :糖尿病大鼠在早期阶段杆细胞反应b波、最大反应b波、振荡电位O2 波和明适应视网膜电图b波的潜伏期显著延长 ,这有可能成为监测糖尿病视网膜病变早期发展的指标 .

高压氧对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞的保护作用

目的探究脑缺血模型大鼠经30d高压氧治疗对大脑神经细胞的影响。方法成年SD大鼠随机分为三组：正常对照组、缺血再灌注（IR）组、高压氧治疗（HBO）组。IR组和HBO组动物经大脑中动脉栓塞（MCAO）1.5h后再灌注。所有大鼠均于术后2h腹腔注射BrdU（50mg/kg体重）,连续2次,间隔24h。HBO组高压氧治疗（2.8个绝对大气压,60min）30d,每日一次。所有大鼠于31d麻醉处死,取脑,切片,进行Nestin和BrdU的免疫组织化学染色,光镜观察并于损伤区取图。结果 HBO组和IR组Nestin＋和BrdU＋细胞表达于损伤区,两者密度在HBO组中均显著高于IR组（P〈0.05）,而正常对照组均未见阳性结果。结论 30dHBO治疗可促进大鼠缺血脑组织神经细胞增殖或对其有保护作用。

急性一氧化碳中毒大鼠脑内MIP-1α和ICAM-1的表达及高压氧干预后的变化

目的 观察急性CO中毒后大鼠脑内巨噬细胞炎性蛋白-1（MIP-1α）和细胞间黏附分子1（ICAM-1）的表达,进一步探讨迟发性脑病（DNS）的免疫学机制.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组和染毒后1、3、7、10 d组及染毒后HBO治疗7 d组,每组10只.通过HE和免疫组化染色,观察各组大鼠脑组织的病理学改变以及MIP-1α和ICAM-1的表达情况.结果 HE染色显示,正常对照组脑内细胞形态正常,染毒组脑皮质和海马有严重病理损伤,出现大量变性、坏死神经元,且随染毒时间的延长,损伤程度加重,经HBO治疗后,损伤减轻.免疫组化染色显示,正常对照组无MIP-1α和ICAM-1表达;染毒1 d组MIP-1α开始有表达,ICAM-1无表达;染毒3 d组MIP-1α表达增加,数量达高峰（P〈0.05）,ICAM-1开始有表达;染毒7 d组MIP-1α表达开始减少,ICAM-1表达数量达高峰（P〈0.05）,在血管内皮细胞和淋巴细胞上均有表达;染毒后HBO治疗7 d组MIP-1α和ICAM-1表达均显著减少,与染毒7 d组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;染毒10 d组几乎无MIP-1α表达,偶见少数淋巴细胞上有ICAM-1阳性表达.结论 MIP-1α和ICAM-1可能参与DNS的发病过程,HBO可通过减少两者的表达来减轻脑组织的损伤.

急性一氧化碳中毒迟发性脑病免疫机制研究进展

迟发性脑病是急性一氧化碳中毒最严重的后遗症,其发生机制并不清楚.近年来,基础和临床各个领域开展了大量研究工作,从各个角度对迟发性脑损伤的发病机制进行了探讨,提出了各种可能的机制.越来越多的研究表明,免疫机制在迟发性脑病的发生中起着巨大的作用,本文从免疫学角度对其发病机制做一综述.

糖尿病早期大鼠海马和皮质星形胶质细胞的变化

目的:观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠早期(6周)海马和皮质星形胶质细胞的变化,探讨星形胶质细胞在糖尿病脑病发病中的重要作用。方法:实验在解放军第四军医大学航空航天医学系病理学实验室完成。在建模前和建模后6周时检测糖尿病大鼠的血糖、尿糖和体质量,应用免疫组织化学方法观察糖尿病组和对照组大鼠海马和皮质星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)的表达情况。结果:对照组大鼠体质量随周龄增加而明显增加;糖尿病组大鼠体质量随周龄的增加不明显。对照组大鼠的血糖始终处于大鼠血糖值正常范围,尿糖检测始终都为阴性,而糖尿病组大鼠的血糖值处于模型要求的标准之上。尿糖自建模后都呈强阳性。GFAP免疫组化标记可见糖尿病大鼠海马和皮质星形胶质细胞明显增生,且增生细胞在CA1区和CA4区最为明显。结论:糖尿病大鼠早期星形胶质细胞增生反映了神经组织对机体糖代谢紊乱的适应性重塑过程,提示神经组织改变在糖尿病脑病的发病中可能起了重要作用。

高压氧预处理对脊髓神经元氧化损伤保护作用的机制探讨

目的研究高压氧预处理诱导脊髓神经元氧化耐受的机理。方法取胚胎小鼠脊髓行原代神经元培养，分正常对照组和HBO组（0．35MPa、2h）。利用Western Blot、RT-PCR等方法，观察高压氧预处理对脊髓神经元抗氧化酶水平的影响。结果对于单次HBO处理，SOD在处理前后表达无差异，而HO—1在处理后表达增多。

高压氧预处理诱导脊髓神经元氧化耐受作用研究

目的研究高压氧预处理对脊髓神经元氧化损伤的影响。方法取胚胎小鼠脊髓做神经元原代培养，分正常对照组、高压氧预处理组（0．35MPa、2h）和H2O2处理组（50μmol／L、37℃、1h）。通过形态学观察、MTT和单细胞凝胶电泳等试验方法观察H2O2处理所导致的神经元DNA损伤以及高压氧预处理对这种DNA损伤的影响。

复合疲劳对大鼠学习记忆能力的影响

目的 通过观察复合疲劳大鼠的空间学习、记忆能力及其海马区磷酸化环磷腺苷相应元件结合蛋白(phosphorylated cyclic adenosine monophosphate responsive element binding protein,p-CREB)的表达水平,探讨复合疲劳对大鼠学习记忆能力影响的机制. 方法 按随机数字表法,将24只成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠分为对照组、食物限制组和复合疲劳组3组,每组8只.运用Morris水迷宫实验方法测定各组大鼠的平均逃避潜伏期及平台所在象限的游泳时间百分比.运用蛋白质印迹(western blot)方法检测大鼠海马区p-CREB的表达.采用SPSS 17.0统计软件对3组大鼠的负重游泳时长、平均逃避潜伏期及平台所在象限的游泳时间百分比进行单因素方差分析. 结果 5d负重游泳实验结果显示,3组大鼠间游泳时长差异有统计学意义(F=40.28～66.04,P＜0.01)；与对照组和食物限制组相比,复合疲劳组大鼠的负重游泳时长明显缩短(P＜0.01).在Morris水迷宫定位航行实验中,3组大鼠之间第2、3、4天的逃避潜伏期差异有统计学意义(F=4.17～7.11,P＜0.05或0.01)；与对照组和食物限制组相比,复合疲劳组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P＜0.05或0.01).在空间探索试验中,3组大鼠在平台所在象限的时间百分比差异有统计学意义(F=3.62,P＜0.05)；与对照组和食物限制组相比,复合疲劳组大鼠在平台所在象限的时间百分比明显降低(P＜0.05).3组大鼠海马区p-CREB的相对含量差异有统计学意义(F=730.07,P＜0.01)；复合疲劳组大鼠低于对照组和食物限制组(P＜0.01). 结论 复合疲劳对大鼠的空间学习、记忆能力具有损害作用,其机制可能与复合疲劳组大鼠海马区p-CREB的表达水平降低有关.

大鼠游泳运动疲劳模型力竭标准的研究

目的:探讨不同力竭标准判断对负重大鼠游泳运动疲劳程度的影响。方法:成年雄性SD大鼠24只,随机分为对照组、运动组1、运动组2,每组8只,每天对负重大鼠进行游泳训练,运动组1以大鼠连续反复下沉,沉入水下三次,每次超过五秒为力竭标准,运动组2以沉入水下十秒钟,且游泳失去平衡为评判标准,对照组不参与游泳运动,试验期为十天,记录游泳时间,末了处死大鼠,取血液、肝、骨骼肌,同时检测相应组织超氧化物歧化酶活性,乳酸、丙二醛的含量。最后进行统计比较和分析。结果:运动组1随着游泳天数的增加,游泳时间呈逐渐延长趋势,运动组2游泳随着游泳天数的增加,游泳时间呈缩短趋势。运动组1和对照组相比较,血清、骨骼肌丙二醛和乳酸明显高(P<0.05),肝变化不明显(P>0.05);超氧化物歧化酶的活性均明显降低(P<0.05)。运动组2和对照组、运动组1相比较,血清、骨骼肌丙二醛和乳酸明显高(P<0.05),肝变化不明显(P>0.05);超氧化物歧化酶的活性均明显降低(P<0.05)。结论:采用运动组2疲劳力竭判断标准是可靠的,可用于运动性疲劳机制的试验性研究。

高压氧预处理对脊髓神经元氧化损伤中超氧化物歧化酶和血红素氧合酶-1的影响

目的 研究高压氧（HBO）预处理诱导脊髓神经元氧化耐受的机制.方法 取胚胎小鼠脊髓行原代神经元培养,分为正常对照组和HBO预处理组（HBO组）.利用Westem Blot、RT-PCR等方法,观察HBO预处理对脊髓神经元抗氧化酶水平的影响.结果 HBO预处理前后超氧化物歧化酶（SOD）表达无统计学差异,血红素氧合酶（HO-1）在处理后表达增多.行RT-PCR检测HBO处理前后HO-1 mRAN水平,发现在预处理后4 h开始明显增多,处理后8 h表达达到高峰,直至处理后24 h其表达量仍比预处理前高.结论 HBO预处理对脊髓神经元氧化损伤的保护作用可能与诱导HO-1表达有关.

急性一氧化碳中毒大鼠脑组织Fas和caspase-3蛋白表达及高压氧的干预作用

目的 观察急性一氧化碳（CO）中毒后大鼠脑组织Fas和caspase-3蛋白表达的改变,为急性CO中毒后迟发性脑病delayed neuropathological sequelae,DNS）的发病机制提供新的证据.方法 50只SD雄性大鼠按数字表法随机分为对照组,染毒后1、3、7 组和高压氧（HBO）治疗7 d组,每组10只.采用HE染色、免疫组织化学染色及Western blot方法,观察染毒后各时间点大鼠脑组织损伤及Fas、caspase-3蛋白表达情况.结果 对照组Fas和caspase-3均表达极低,染毒后1 d,Fas和caspase-3蛋白表达均迅速增加,染毒后3 d达到高峰,3 d与7 d组表达无明显差别,HBO治疗组Fas和caspase-3蛋白表达均较染毒后7 d组显著减少（P〈0.01）,但仍高于对照组（P〈0.05）.Fas和caspase-3蛋白表达改变与脑组织损伤程度呈一致变化.结论 Fas蛋白表达和细胞凋亡是CO中毒后DNS的发生机制之一,HBO可能通过减少Fas蛋白表达和抑制细胞凋亡而减轻脑组织的损伤.

高压氧对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞的影响

目的 探讨高压氧（HBO）对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组（SS组）,缺血再灌注组（IR组）,高压氧治疗组（HBO组）.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,持续缺血1.5 h后再灌注,分别在第4、11、31天用氯化三苯四氮唑（TTC）染色,观察梗死灶面积的变化.采用免疫组化染色显示5-溴脱氧尿核苷（Brdu）阳性细胞和巢蛋白（nestin）阳性细胞,光镜下观察并统计分析HBO对脑缺血再灌注损伤后神经干细胞的影响.结果 TTC染色显示,HBO组各时间点梗死灶较IR组均有所减小;IR各组与SS组相比,皮层和纹状体BrdU阳性细胞和nestin阳性细胞数目均显著增多（P〈0.05）;HBO组与IR组相比,在第11天和第31天BrdU阳性细胞和nestin阳性细胞数均显著增多（P〈0.05）.结论 HBO对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞的增殖有促进作用.

急性一氧化碳中毒大鼠脑组织脱髓鞘病变及高压氧干预后的变化

目的通过建立急性一氧化碳（CO）中毒大鼠模型，观察CO中毒后大鼠脑组织髓鞘结构的改变及髓鞘碱性蛋白（MBP）表达的变化，为研究急性CO中毒迟发性脑病（DNS）的发病机制提供新的实验依据。方法60只雄性健康SD大鼠按数字表法随机分为对照组，染毒后3、7、14、30d组以及染毒后高压氧（HBO）治疗14d组（HBO治疗14d组），每组10只。对照组不作任何处理；染毒各组用CO染毒制作急性CO中毒模型，然后呼吸空气至大鼠恢复意识；HBO治疗14d组以同样方式制作急性CO中毒模型后行HBO治疗14d。各组分别于各时间点取材，通过电镜和Luxolfastblue染色后观察髓鞘的病理形态学改变，采用免疫组织化学染色和Westernblot方法观察MBP表达情况。结果电镜和Luxolfastblue染色结果显示，染毒后3d组开始出现髓鞘异常；染毒后14d组出现典型的脱髓鞘病变，此组神经纤维（nervefiber，NF）积分光密度（IOD）较对照组降低（P〈0．05）；HBO治疗14d组脱髓鞘病变较染毒后14d组减轻，IOD值增加（P〈0．05），但仍然有髓鞘异常。免疫组织化学染色显示，染毒后3d组MBP表达开始减少，染毒后14d组减少至最低（8835．75±133．49），此组MBP的IOD值较对照组有统计学差异（P〈0．05）；HBO治疗14d组较染毒14d组减轻，IOD值（156474．74±154．61）增加（P〈0．05）。Westernblot结果显示，染毒后3d组MBP表达减少，染毒后14d组减少至最低（P〈0．05），HBO治疔14d组较染毒后14d组减轻（P〈0．05）。结论本实验条件下，HBO治疗可以减轻CO中毒大鼠脑组织脱髓鞘病变。

常压氧与高压氧对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后微血管新生影响的比较

目的:研究常压氧与高压氧对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后微血管新生影响的差异。方法:将成年SD雄性大鼠随机分为三组:假手术组(SS组)、常压氧治疗组(NBO组)、高压氧治疗组(HBO组),每组又随机分为3、7、10天三个亚组。采用线栓法对NBO组和HBO组大鼠进行大脑中动脉栓塞(MCAO),缺血1.5小时后拔出栓子再灌注,NBO组进行常压氧治疗,HBO组进行高压氧治疗。大鼠分别在3、7、10天麻醉处死,取脑组织切片,血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体-1(FLT-1)和CD34免疫组化染色,光镜观察取图和统计分析。结果:NBO各组与SS各组相比,VEGF、FLT-1和CD34阳性细胞数目均明显增多(P<0.05);HBO各组与NBO各组比较,7天、10天组VEGF、FLT-1和CD34阳性细胞数目均显著增多(P<0.05)。结论:HBO治疗较NBO治疗对成年大鼠微血管的新生更有促进作用。

高压氧对急性CO中毒大鼠脑内源性神经干细胞的影响

目的:探讨高压氧对急性CO中毒大鼠脑内源性神经干细胞的影响,分析HBO治疗急性CO中毒脑损伤的机制。方法:建立急性CO中毒大鼠模型,给予高压氧(HBO)治疗后,H-E染色观察大鼠脑组织病理学变化,免疫组织化学方法检测大鼠脑内神经干细胞(nestin)和星形胶质细胞(GFAP)的表达。结果:H-E染色标本上,对照组脑内神经元形态正常,染毒组脑皮质出现大量变性坏死细胞,海马锥体细胞层稀疏,HBO组坏死细胞明显减少。免疫组化结果显示对照组nestin和GFAP表达数量形态均正常,染毒组nestin表达增加,但无统计学意义,GFAP形态数量发生改变,HBO组nestin表达明显增加,且在大脑皮层可见部分nestin阳性细胞和nestin-GFAP双阳性细胞;GFAP表达趋于正常。结论:急性CO中毒作为脑损伤因素可轻度激活大鼠脑内源性神经干细胞,并使星形胶质细胞增生变形、神经元变性坏死,HBO治疗可减轻星形胶质细胞损伤,明显激活内源性神经干细胞,并促使其增殖、迁移和分化。提示HBO可能通过激活神经干细胞起治疗作用。

高压氧对脑缺血再灌注大鼠星形胶质细胞的影响

目的 研究高压氧（HBO）对脑缺血再灌注大鼠星形胶质细胞的影响。方法 成年SD雄性大鼠64只，采用线栓法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,1.5h后再灌注，神经功能评定后剔除建模失败者。建模成功大鼠按数字表法随机分为缺血再灌注组（IR组）和HBO组，每组32只。HBO组在缺血再灌注后4h开始行HBO治疗，治疗压力0.28 MPa,之后每天1次。2组于建模成功后4、8、11、31d处死，取脑做石蜡切片。采用免疫组织化学染色显示胶质纤维酸性蛋白（GFAP），光镜观察、取图，测量积分光密度（IOD），并进行相关分析。结果 同组同时间点缺血半影区GFAP积分光密度显著高于对侧（P＜0.05），对侧IOD各时间点比较差异无统计学意义（P＞0.05）。IR组3、7、1O d缺血半影区IOD比较差异无统计学意义（P＞0.05），30 d时均显著高于其他各时间点（P＜0.05）。HBO组3d和7d、7d和10 d比较缺血半影区GFAP的IOD差异无统计学意义（P＞0.05），10 d时GFAP的IOD显著高于3d时（P＜0.05），30 d时与其他各时间点比较差异均有统计学意义（P＜0.05），并且各时间点IOD值均显著高于同时间点IR组的IOD（P ＜0.05）。结论 HBO对脑缺血再灌注大鼠星形胶质细胞具有时程调控作用，对缺血性脑损伤的功能恢复可能具有重要意义。