人神经干细胞体外培养、鉴定及电镜观察

目的 探讨体外人神经干细胞培养及鉴定。方法 用无血清培养与单细胞克隆技术对人胚胎脑组织进行分离、培养。用光镜、免疫组织化学及电镜对其进行鉴定与观察。结果 人胚胎分离的细胞具有连续分化及克隆能力 ,克隆球与早期的原始细胞神经上皮干细胞蛋白 (nestin)抗原呈阳性。成熟分化后胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)及神经丝 2 0 0 (NF 2 0 0 )抗原呈阳性。电镜下观察较原始的神经干细胞核大、胞浆少、细胞器不发达。诱导分化后 ,较成熟神经干细胞内可见到发达的细胞器 ,粗面内质网尤其丰富。并观察到神经微管微丝、胶样丝等结构。结论 胚胎脑组织在体外培养并克隆成神经球 ,具有很强的增殖能力 。

立体定向大鼠脑胶质瘤颅内接种生长情况的观察

目的通过建立类似于人脑胶质瘤的动物模型,观察颅内肿瘤生长特点。方法借助动物立体定向仪,将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个,悬浮于无血清DMEM培养液60μL中)接种于Wistar大鼠左侧尾状核区。接种后观察实验大鼠的生存状态及肿瘤的生长特性,分别于接种后5、14 d进行MRI检查。在实验3、6、9、121、5 d时解剖标本,做组织病理学和GFAP免疫组化检查。结果该方法建立的胶质瘤动物模型在组织病理学上接近人脑胶质瘤.而且颅内生长稳定,成瘤率高,未见颅外转移病灶,实验周期短,重复性好。结论C6大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤生长及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。

BALB/c小鼠C6脑胶质瘤模型的建立及生长特性观察

目的建立BALB/c小鼠C6脑胶质瘤模型,观察其生长特性。方法将体外培养的细胞数为1×103,1×104,5×104个分别悬浮于无血清DMEM培养液10μl中的C6胶质瘤细胞接种于BALB/c小鼠左顶枕区,观察不同C6细胞浓度实验鼠的生存状态及肿瘤生成率。对自然死亡荷瘤鼠行组织病理学和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学检查。另外,在实验3d、6d、9d、12d、15d、20d时解剖实验鼠,对肿瘤体积进行统计测量。结果该方法建立的胶质瘤动物模型在组织病理学上接近人脑胶质瘤,且颅内生长稳定。3组成瘤率分别为65%、75%、80%。未见颅外转移病灶,实验周期短,重复性较好。结论BALB/c小鼠C6脑胶质瘤模型的肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。