外周血中性粒细胞的分离方法

外周血中性粒细胞的分离方法刘文超，刘智广，张晓楠，田俊士，胡家露，张学庸（第四军医大学西京医院消化内科，第四军医大学西京医院临床输血科，第四军医大学西京医院校中心实验室，西安７１００３２）中性粒细胞是短命细胞，其合成能力有限，缺少修复能力。同时，一旦...

维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa细胞间隙连接蛋白转导途径调控作用的研究

目的 探讨维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa细胞间隙连接蛋白 (Cx) 4 3信号转导途径的调控作用。方法 应用特异性钙指示剂 (Fluo 3AM)在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察维甲酸作用后的细胞质内信号转导分子游离钙的分布及强度变化。采用流式细胞仪、结合蛋白印迹技术分析 ,检测外源信号分子对Cx43的表达以及蛋白酪氨酸磷酸化状态的影响。结果 HeLa细胞内游离钙经维甲酸作用后明显超载 ,细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)由静息状态下的 35 73μmol/L上升至5 8 16 μmol/L。流式细胞仪分析 ,Cx43阳性细胞表达率由 1 9%上升至 2 6 3%。蛋白印迹技术分析 ,HeLa细胞出现Cx43酪氨酸磷酸化。结论 维甲酸对HeLa细胞Cx43信号转导途径的调控是在细胞质内游离钙的参与下 ,使Cx43阳性细胞表达率上升 。

三磷酸腺苷敏感性钾通道介导一氧化氮对缺氧/复氧鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道 (KATP)在一氧化氮 (NO)对缺氧 /复氧心肌细胞损害中的保护作用。方法 采用细胞缺氧 /复氧损伤模型 ,培养细胞随机分为 5组 :A组 ,正常对照组(培养 3h) ;B组 ,格列本脲 (glybenclamide ,Gly ,商品名 :优降糖 )预处理组 ,加入终浓度为 10 μmol/LGly后培养 3h ;C组 ,单纯缺氧 /复氧组 (A/R缺氧 2h ,复氧 1h) ;D组 ,一氧化氮预处理组 ,加入S 亚硝基 已酰青酶胺 (S nitroso n acetyl penicillamine ,SNAP)使其终浓度为 1mmol/L ,预处理 4 0min后缺氧复氧 ;E组 ,Gly +SNAP预处理组 ,加入终浓度为 10 μmol/LGly ,培育 2 0min后再加入SNAP使其终浓度为 1mmol/L ,预处理 4 0min后缺氧复氧。与复氧后测定细胞存活率 ,培养液中乳酸脱氢酶、肌酸激酶含量 ,细胞内丙二醛及游离Ca2 + 的变化。结果 与正常组相比 ,Gly处理组和正常组各指标无明显差别 ;与正常组相比 ,单纯缺氧 /复氧组乳酸脱氢酶、肌酸激酶、细胞内丙二醛水平显著升高 (P<0 0 1) ,与正常组相比 ,细胞存活率显著降低 (P <0 0 1)及发生明显钙超载 (P <0 0 1) ;1mmol/LSNAP预处理组明显减轻上述变化 (P <0 0 1) ;而与NO预处理组相比 ,Gly +SNAP预处理组取消了NO组上述保护作用 (P <0 0 1)。