阿普卡林对低氧-复氧乳鼠心肌细胞保护作用的机制

目的探讨低氧/复氧(H/R)对心肌细胞内Ca浓度(犤Ca犦i)的影响,以及阿普卡林减轻H/R过程中钙超载的作用。方法采用SD大鼠乳鼠(n=80)进行心肌细胞培养,用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载30min,然后分3组:(1)正常对照组;(2)H/R组:细胞低氧30min/复氧30min;(3)阿普卡林组:先加入终浓度为100μmol/L的阿普卡林,再行低氧30min/复氧30min。于两个实验组接受低氧处理前及刚开始复氧时、复氧30min后用激光共聚焦显微镜技术检测3个组心肌细胞犤Ca2+犦i的变化。实验重复8次,共观察24个细胞。结果对照组心肌细胞犤Ca2+犦i荧光强度和荧光光密度值较低,分别为645.5U,80.3U及0.5%,0.3%。低氧30min后复氧即刻,犤Ca2+犦i荧光光密度值开始增加,复氧30min后犤Ca2+犦i荧光强度和荧光光密度值显著增高(与对照组比较,P<0.01)。而阿普卡林组细胞内荧光光密度值显著低于H/R组(χ2=20.51,P<0.01)。结论心肌细胞H/R导致钙超载;而阿普卡林有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2+超载的作用,从而保护心肌细胞。

卵巢切除及雌激素替代对大鼠脑单胺氧化酶和行为学的影响

目的观察卵巢切除对大鼠脑内单胺氧化酶和学习记忆的改变及雌二醇对其影响的可能机制。方法采用Morris水迷宫方法观察切除卵巢后大鼠的行为学改变 ,用比色法测定了大鼠大脑皮层和海马中单胺氧化酶 (MAO)活性。结果大鼠切除卵巢后 6周 ,Morris水迷宫试验逃避潜伏期 ( 88.9± 3 5 .1)明显延长 ,记忆频度 ( 18.7± 2 .7)减退 ,大鼠大脑海马组织中单胺氧化酶 (MAO)活性升高 ( 2 2 3 .0± 66.8) ,与Sham组比较 ,P均 <0 .0 5。应用雌激素可以改善记忆障碍 ,并能拮抗因卵巢切除造成大鼠大脑海马组织中MAO活性的升高 ( 13 4.2± 46.6,P <0 .0 1) ,大脑皮层MAO活性无变化。结论大鼠卵巢切除可以造成学习记忆减退 ,雌激素替代能改善学习记忆 ,同时雌激素能抑制海马组织中MAO活性 ,这可能是改善大脑功能的机制之一。

蟾毒灵诱导人急性早幼粒细胞性白血病细胞凋亡的实验观察

目的 研究蟾毒灵治疗急性粒细胞白血病的作用机理。方法 采用体外细胞培养技术 ,MTT法 ,流式细胞术 ,透射电子显微镜观察法 ,了解蟾毒灵对人急性早幼粒细胞性白血病细胞株 (HL 6 0 )是否有细胞毒及诱导凋亡作用。结果 蟾毒灵对HL 6 0细胞有很强的细胞毒作用 ,蟾毒灵在体外作用 18h即可诱导细胞凋亡 ,流式细胞仪检测出典型细胞凋亡峰 ,透射电镜观察到染色质凝集 ,碎裂 ,凋亡小体形成等凋亡细胞形态学改变。结论 蟾毒灵有极强的细胞毒作用 ,在体外能诱导HL 6 0细胞凋亡 。

RNasin对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的：探讨核糖核酸酶抑制因子（ＲＮａｓｉｎ）对脑胶质瘤生长的抑制作用及可能机理。方法：从人胎盘组织中提取制备ＲＮａｓｉｎ，体内外观察其对人ＳＨＧ４４和大鼠Ｃ６胶质瘤细胞生长的抑制作用。结果：（１）体外不同浓度的ＲＮａｓｉｎ对培养的Ｃ６及ＳＨＧ４４胶质瘤细胞存活率无明显影响，与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；（２）加入ＲＮａｓｉｎ后裸鼠体内Ｃ６胶质瘤平均重量为１．７２ ｇ±０．１８４ ｇ，平均大小（直径）为１２．８４ ｍｍ±１.１５ ｍｍ；ＳＨＧ４４胶质瘤平均重量为１．０１２ ｇ±０．１７４ ｇ，平均大小为１１．２０ ｍｍ±１．２１ｍｍ，均与对照组有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ＲＮａｓｉｎ体外对培养的胶质瘤细胞生长无抑制作用，而体内对胶质瘤瘤体的生长有明显抑制作用。

人乳腺癌全套抗体可变区基因的扩增与克隆

目的 扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因 ,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法 收集乳腺癌患者外周转移淋巴结 30例 ,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA ,行RT PCR扩增 ,制备T载体 ,用于PCR产物的克隆。结果 总RNA纯度高 ,完整性好 ,mRNA获得率为 1%。经RT PCR ,VH、Vλ、Vκ的每一条 5 '端引物均与其相应的 3'端引物成功地扩增出了可变区基因片段 ,轻、重链T载体库分别为 1.7× 10 8和 3.5× 10 8。结论 所采用的引物能够10 0 %扩增目的片段 ,T载体过渡能显著提高克隆效率 ,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。

抑制ATM表达对^(60)Co照射下宫颈癌细胞损伤修复机制的影响

目的:探讨抑制毛细血管扩张-共济失调突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)表达对人宫颈癌细胞株HeLa在60Co照射下细胞损伤修复机制的影响。方法:电穿孔法将人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒pSup-ATM转染宫颈癌HeLa细胞;G418筛选建立稳定转染株;RT-PCR、W estern-b lot、免疫荧光法检测ATM基因表达的抑制情况;W estern-b lot法检测60Co照射前后各组细胞ATM、p53Ser15磷酸化、CHK2Thr 68磷酸化、p53、CHK2蛋白的表达水平;流式细胞术检测60Co照射后各组的细胞周期变化。结果:ATM基因在HeLaATM细胞中表达明显低于在HeLa、HeLans细胞中的表达水平,成功地建立了ATM低表达的宫颈癌细胞模型。HeLaATM细胞在60Co照射后p53Ser15磷酸化、CHK2Thr68磷酸化、p53蛋白表达均显著降低,细胞周期呈现为G2期延长,G1/G2倒置。结论:抑制ATM基因表达可显著抑制宫颈癌细胞对60Co辐射损伤的修复。这一机制可能与HeLaATM细胞中ATM蛋白表达缺失,ATM依赖性的细胞损伤修复通路受阻有关。

Sp1调控FoxM1在卵巢癌中的表达

探讨Sp1调控转录因子FoxM1在卵巢癌中的表达。免疫组织化学染色验证FoxM1在卵巢癌组织中高表达,Spearman'rho秩相关分析Sp1与FoxM1在卵巢癌组织中的表达相关性;双荧光素酶报告系统检测Sp1对FoxM1的调控作用;Real-time quantitative RT-PCR和蛋白免疫印迹技术验证Sp1对FoxM1的调控作用。FoxM1在大于60%的卵巢癌组织中呈阳性表达(阳性率33/42≈79%),并且与Sp1的表达显著相关(r=0.809,P<0.01);Sp1可以结合并激活Foxm1启动子(P<0.05);上调Sp1表达可以激活FoxM1在卵巢癌中的表达(P<0.05),而干扰Sp1后可以下调FoxM1的表达(P<0.05)。Sp1参与调控增殖相关转录因子FoxM1在卵巢癌中的表达。

ANP和CGRP对油酸型急性肺损伤家兔细胞因子的影响

目的:研究心钠素(ANP)和降钙素基因相关肽(CGRP)对油酸型急性肺损伤(AL I)家兔血及支气管肺泡灌洗液(BAL F)中TNF- α、IL- 8和ET- 1含量的影响。方法:观察油酸型AL I家兔ANP+CGRP治疗前、后不同时间静脉血和BAL F中上述3种细胞因子浓度的变化,并于实验结束后测定肺水质量分数。结果:油酸致伤后30、6 0和12 0 min血及BAL F中TNF- α、IL- 8和ET- 1浓度显著增高(P<0 .0 5～0 .0 1) ,尤其以TNF- α增幅最大,ANP+CGRP治疗后各因子浓度明显降低(P<0 .0 5～0 .0 1) ,肺水质量分数也显著降低(P<0 .0 5 )。结论:静脉注射ANP+CGRP可有效降低油酸致伤后血和BAL F中TNF- α、IL- 8及ET- 1含量,抑制肺内炎症反应,减轻肺损伤。

复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠心室重构及左室功能的影响

目的 :观察复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠 (SHR)心室重构及左室功能各项指标的影响。方法 :12周龄SHR 5 0只随机分为 5组 ,即空白对照组 (SHR- C组 )、依那普利组 (SHR- Y组 )及复方鳖甲小剂量组 (SHR- B1组 )、中剂量组 (SHR- B2组 )、大剂量组 (SHR- B3组 ) ,每组 10只。并以正常 SD大鼠 10只作对照 ,称为 SD组。治疗 10周后测定各组大鼠收缩压 (SBP)、左室舒张末压 (L VEDP)、左室压力微分值最大 (± dp/ dtmax)、心脏质量指数 (HMI)、左室质量指数 (L VMI)以及胶原蛋白含量等指标。结果 :治疗 10周后 ,SHR- Y组的 SBP、HMI、 L VMI较对照组显著降低 (P<0 .0 1) ,而 SHR- B各组无显著改变 ;SHR- Y组 ,SHR- B2组及 SHR- B3组的 L VEDP较对照组显著降低(P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。SHR- Y组的 +dp/ dtmax较对照组显著增大 (P<0 .0 5 ) ,SHR- B各组无显著改变。 SHR- Y组及 SHR- B各组的 - dp/ dtmax较对照组显著增大 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。 SHR- Y组、SHR- B2组及 SHR- B3组胶原蛋白含量较对照组均显著降低 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。结论 :复方鳖甲软肝方无明显降压功能 ,但可通过抑制心肌纤维化 ,有效影响 SHR的心室重构 ,改善左室功能。

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。 方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 + ]i变化。 结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 + ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 + ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 + ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。 结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 +

胃癌患者围手术期静脉营养支持血清4种细胞因子的动态观察

临床静脉营养支持(ＰＮ)是20世纪临床医学四大进展之一。其在临床上的广泛应用,挽救了众多危重患者的生命。特别是在外科围手术期的应用,由于可大大降低大手术的死亡率,已为多数外科医生所共识。但对于ＰＮ对免疫功能的影响尚有争议:部分学者认为,ＰＮ支持不会影响机体的?..

肠胃清胶囊对慢性溃疡性结肠炎患者生活质量主观满意度的影响

目的:观察中药肠胃清胶囊对慢性溃疡性结肠炎患者生活满意度的影响。方法:选择2003-01/10解放军第四军医大学西京医院门诊病例100例,随机分为肠胃清组和对照组,每组50例,肠胃清组:给予本院制剂号药品肠胃清胶囊,5粒/次,3次/d;对照组:给予柳氮磺胺嘧啶,2.0g/次,3次/d。两组均30d1个疗程,共观察3个疗程,观察两组治疗前后总有效率(以腹泻、腹胀、纳差等症状的改善,显效、有效、无效做评估标准,计算总有效率)以及患者生活质量主观满意度的改善情况。结果:两组各有50例纳入结果分析。肠胃清组治疗后生活质量主观满意度(满意40例)优于对照组(满意10例)。肠胃清组总有效率(87.1%)优于对照组(47.1%),差异有显著性(χ2=15.32,P<0.005)。结论:肠胃清胶囊治疗慢性溃疡性结肠炎临床疗效满意,能改善患者生活质量主观满意度。

人白细胞介素-2基因在转染角质形成细胞中的稳定表达(英文)

目的 观察人白细胞介素 - 2 (IL- 2 )基因在转基因角质形成细胞中的稳定表达、分泌情况以及角质形成细胞作为基因治疗靶细胞的可行性 .方法 分离原代皮肤角质形成细胞 ,无血清培养基培养 ,L ipofectamine介导转染 ,G41 8筛选 ,DNA斑点杂交、RNA斑点杂交、原位杂交、免疫组织化学、Western blot分析及 MTT法检测 IL- 2在细胞中的表达及分泌情况 .结果 DNA斑点杂交、RNA斑点杂交、原位杂交及免疫组织化学染色均显示转染细胞组有阳性信号 ;Westernblot分析显示转染组在相对分子质量 (Mr) 1 50 0 0处出现一条特异性染色带 ,其大小与 IL- 2一致 ;第二代、第四代转染细胞培养上清中 IL- 2的活性分别是 2 7.7U· m L-1和 1 5U·m L-1 .结论 外源基因在角质形成细胞中能稳定表达基因产物 ,并能分泌具有生物学活性的蛋白质 ,以角朊细胞作靶细胞进行基因转染、基因表达。

骨松康胶囊对大鼠绝经后骨质疏松模型的影响

目的:研究骨松康胶囊对大鼠绝经后骨质疏松模型的治疗作用。方法:将健康雌性SD大鼠32只,随机分成五组:正常组、模型组、西药组、中药组,各8只。除正常组外对其它组大鼠进行摘卵巢手术制造绝经后大鼠模型,术后1周,西药组灌服浓度为5％的尼尔雌醇,每只灌服5ml／周,其它时间灌服等量生理盐水;中药组灌服浓度为20％的骨松康胶囊,每只灌服5ml／日;正常组和模型组每日同时灌服等量生理盐水。投药8周后再次称重,尔后进行摘眼球取血,取左侧股骨。结果:正常组、西药组、中药组与模型组相比,骨密度(BMD)、血清雌二醇(E2)均有显著增高,P<0．01,体重显著降低,P<0．01,正常组、西药组、中药组之间进行比较并无显著性差异P>0．05。结论:骨松康胶囊能够增加去势大鼠BMD、血清E2,降低大鼠体重。

胰岛素抑制自体移植静脉内皮细胞凋亡

目的探讨胰岛素对移植静脉进行处理是否保护缺血、再灌注的自体移植静脉血管内皮细胞。方法 32只杂种犬施行自体颈静脉-颈动脉移植术,术中将取出的移植静脉段分别浸入不同分组的处理液(每组8只):肝素生理盐水(vehicle)组(saline:0.9%NaCl;肝素12500U/L);GIK组(葡萄糖:250g/L;胰岛素:60U/L;KCl:80mmol/L;肝素12500U/L);GK组(葡萄糖:250g/L;KCl:80mmol/L;肝素12500U/L);GIK加渥曼青霉素(GIK+Wortmannin)组[处理液同GIK组,移植静脉再灌注前5min和后1～4h静脉注射渥曼青霉素2μg/(kg.min)]。术后4h获取移植静脉段进行凋亡蛋白caspase-3免疫组织化学测定和用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位平端标记法(TUNEL)定性和定量检测内皮细胞凋亡。结果与肝素生理盐水组相比,GK组增加移植静脉段内皮细胞和血管平滑肌细胞的凋亡(P<0.001),而GIK组则显著减少凋亡(P<0.001),渥曼青霉素则能有效抵抗胰岛素的抗凋亡作用。结论胰岛素对移植静脉段内皮细胞有保护作用,可能对移植静脉再狭窄有一定预防作用。

中药骨松康胶囊对更年期综合征患者骨密度和微循环的作用

目的:探讨中药骨松康胶囊对更年期综合征患者骨密度的影响和微循环的改善情况,从而为骨松康胶囊治疗更年期综合征的临床疗效提供可靠依据。方法:选择2003-01/2003-12解放军第四军医大学西京医院门诊病例,随机分为骨松康组和对照组,每组50例,骨松康组:骨松康胶囊,5粒/次,3次/d;对照组:西药谷维素,20mg/次,3次/d。两组均30d为1个疗程,治疗3个疗程后观察骨密度和甲皱微循环积分的变化情况。结果:骨松康组与对照组各50例纳入结果分析。①两组患者治疗前后骨密度变化:骨松康组治疗后高于治疗前,差异有显著性意义[(0.764±0.126)和(0.616±0.128)g/cm2;(t=5.92,P<0.001)]。对照组治疗后高于治疗前,差异无显著性意义[(0.652±0.112)和(0.628±0.132)g/cm2;(t=1.98,P>0.05)]。骨松康组治疗后骨密度高于对照组,差异有显著性意义(t=4.686,P<0.001)。②两组患者治疗前后甲皱微循环变化:骨松康组甲皱微循环总积分由治疗前6.00±0.46降至3.08±0.24,(P<0.05);对照组甲皱微循环总积分由治疗前5.92±1.018降至5.25±0.34,(P>0.05),骨松康组治疗后微循环改善优于对照组,差异有显著性意义(t=36.78,P<0.001)。结论:中药骨松康胶囊能够增加骨密度,改善微循环,对更年期综合征患者有明显的治疗作用。

芍药甙对离体大鼠下丘脑腹内侧核神经元电活动的影响

目的:研究芍药甙(PF)对正常大鼠下丘脑腹内侧核(VMH)神经元兴奋性的影响。方法:应用脑片全细胞膜片钳技术记录了35个正常的VMH神经元的自发放电,观察PF对它们的作用。结果:①当脑片用含PF(300μmol/L)的人工脑脊液灌流后,有22个神经元放电频率明显减少,平均放电频率从(7.1±2.2)Hz减少到(3.2±0.7)Hz(P<0.01);在去极化方波刺激下放电数目也明显减少,洗脱后恢复;②PF对VMH的葡萄糖受体神经元(GRN)表现为明显的抑制作用,与其对非葡萄糖受体神经元的作用相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PF能够降低VMH GRN的放电频率,调节下丘脑饱中枢神经元的兴奋性,从而影响动物的摄食行为。

高血糖对小鼠骨髓来源细胞参与脉络膜新生血管形成的体内动态观察

背景 我们先前的研究提示高血糖可加重脉络膜新生血管（CNV）的严重程度,并有可能通过促进骨髓来源细胞（BMCs）的趋化参与血管发生,且已证实在体生物发光成像（BLI）技术能实时、活体观察CNV的动态变化,但糖尿病与CNV发生的关联性尚无明确的研究证据.目的 应用BLI技术并结合组织学研究方法,动态观察高血糖状态下BMCs参与CNV的形成过程. 方法 将荧光素酶-绿色荧光蛋白（FlucGFP）双转基因小鼠的BMCs移植至野生型C57BL/6J小鼠构建嵌合体,嵌合度＞85％的小鼠纳入实验并按照随机数字表法分为对照组和糖尿病组,每组9只.糖尿病组嵌合体小鼠采用腹腔内注射链脲佐菌素法[（STZ60 mg/（kg＆#183;d）,连续5d]建立糖尿病模型,血糖浓度＞15 mmol/L者视为建模成功,对照组不进行注射.2个组嵌合体小鼠均应用532 nm倍频激光视网膜光凝法诱导CNV形成.采用IVIS Kinetics小动物成像系统,分别于CNV模型建立后第1、3、5、7、14、21和28天对2个组小鼠进行BLI检测,动态观察CNV小鼠眼部发光信号.于CNV模型建立后第7天处死动物,制备视网膜脉络膜组织切片行苏木精-伊红染色,比较2个组小鼠CNV的长度和厚度.结果 流式缅胞仪分析显示,C57BL/6J小鼠行Fluc-GFP双转基因小鼠BMCs移植后28 d,纳入实验的嵌合体小鼠平均嵌合度为（88.85±2.46）％;糖尿病组嵌合体小鼠平均血糖浓度为（17.88±0.86） mmol/L.小鼠视网膜脉络膜组织病理学检查显示,CNV造模后第7天,新生血管穿过Bruch膜到达视网膜下腔,糖尿病组小鼠CNV长度为（338.67±33.17） μm,明显长于对照组小鼠的（180.33±24.68） μm,差异有统计学意义（t=8.943,P＜0.05）;2个组间小鼠CNV的厚度差异无统计学意义（t=1.790,P＞0.05）.CNV建模后第1天,两组小鼠眼部出现光学信号,第7天光学信号值均达最高,且糖尿病组明显强于对照组;第14天后两组小鼠眼部信号减弱.CNV建模后第5、7、14和21天,糖尿病组小鼠眼部光学信号均明显强于对照组小鼠,差异均有统计学意义（t=3.411、5.594、5.067、2.663,P＜0.05）.结论 高血糖可促使更多的BMCs参与CNV的形成过程,加重CNV的严重程度.BLI技术可用于评估和比较高血糖条件下BMCs在CNV形成过程中的动态变化.

可视化动缘探测系统检测rHuEPO对缺血/再灌注心室肌细胞舒、缩功能和钙瞬变的影响

目的:探讨人重组促红细胞生成素(rHuEPO)对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌细胞的保护作用。方法:常规酶解法获得成年大鼠心室肌细胞,用氰化钠/乳酸钠灌注造成细胞化学缺氧以模拟缺血。缺血15min后以台氏液或台氏液加rHuEPO复氧模拟再灌注,用可视化动缘探测系统同步检测rHuEPO对单个I/R心室肌细胞收缩力和钙瞬变的影响。结果:发现rHuEPO(10～10000IU/L)浓度依赖性地使再灌注后心室肌细胞肌小节收缩幅度、收缩/舒张速度以及钙瞬变增大(P<0.05,n=10,来自8个心脏)。结论:rHuEPO可促进I/R心室肌细胞收缩及钙瞬变的恢复而发挥其保护作用。