上消化道疾病患者幽门螺杆菌的感染率及耐药性

目的 了解西安地区胃肠疾病患者幽门螺杆菌的感染率及对常用抗菌素的敏感性 ,为幽门螺杆感染治疗的药物选择提供依据 .方法 采用细菌培养的方法对 2 5 9例胃肠疾病患者胃粘膜活检标本进行了幽门螺杆菌的分离鉴定 ,并用琼脂稀释和浓度梯度法对随机抽取的 5 0株幽门螺杆菌进行了抗生素敏感性试验 .结果 西安地区胃肠疾病患者幽门螺杆菌的感染率为 74% ,其中胃癌的感染率为 5 8% ;胃溃疡的感染率为 75 % ;十二指肠溃疡的感染率为 95 % ;其他胃肠疾病也有不同的感染率 ,幽门螺杆菌对阿莫西林和克拉霉素的敏感率均为 10 0 % ,两种检测方法无差异 .幽门螺杆菌对甲硝唑的耐药率较高 ,琼脂稀释法为 38% ,浓度梯度法为 5 8% ,存在一定的差异 .结论 幽门螺杆菌是胃肠疾病发生的重要因素 ,在西安地区阿莫西林和克拉霉素是治疗幽门螺杆菌感染的首选药物 ,控制甲硝唑在治疗幽门螺杆菌感染中的使用 .在进行幽门螺杆菌对甲硝唑的敏感试验时 ,应采取琼脂稀释和浓度梯度两种方法 。

奥替溴铵、比特诺尔和地芬诺酯治疗肠易激综合征的双盲随机对照研究

目的 探讨奥替溴铵、比特诺尔和地芬诺酯对IBS的治疗作用及副作用。方法 2 0 1例IBS腹泻型和腹痛型患者按照双盲随机对照观察分为A组 (奥替溴铵 )、B组 (比特诺尔 )和C组 (地芬诺酯 )。所有患者均需进行治疗前、后症状评分。疗效判断标准为 :显著、中度、轻度缓解和无效。结果 三组治疗后症状平均积分均显著低于治疗前 (P≤ 0 .0 48)。A组和C组中度以上缓解率 (69.4%和 72 .1% )显著高于B组 (5 0 .7% ,P =0 0 2 9,0 0 1)。A组治疗后腹痛、腹胀、排便异常感和腹部触痛积分均显著性减低 (P=0 .0 0 0～ 0 .0 39) ,B组和C组治疗后腹痛、排便异常 (排便次数增多、大便性状、黏液便 )和腹部触痛积分和组内平均积分显著低于治疗前 (P≤ 0 0 47)。A组副作用发生率 (8.1% )显著低于B组 (2 3.9% ,P =0 .0 14 )和C组 (35 .3% ,P =0 0 0 0 ) ,主要由于B组(12 7% )和C组 (2 5 0 % )便秘发生增加。结论 上述三种药物对IBS的治疗均有效 ,其中奥替溴铵选择性作用于腹痛型 ,比特诺尔和地芬诺酯主要作用于腹泻型。奥替溴铵副作用少 。

消化性溃疡患者生活质量及心理状态分析

目的 研究消化性溃疡患者生活质量及其治疗后的变化 ,初探胃及十二指肠溃疡患者的心理情感状态 ,及可疑心理异常患者在治疗前后的变化 .方法 采纳 Mcmaster生活质量问卷 ,对 2 2例正常人及 74例十二指肠溃疡 (DU)患者、44例胃溃疡 (GU)患者在治疗前后进行问卷调查 ,评价其包括一般生活能力、社交能力激心理情感状态等方面的生活质量 .结果 正规临床治疗可以明显提高 PU患者 QOL 分值 ,但其中 1 8例 DU患者 ,6例 GU患者 ,其心理状态相关题目的得分在治疗前后均明显低于正常人 ;年轻 PU患者多分布于学生、个体户和战士 .结论 正规治疗可以明显提高 PU患者的QOL;临床治愈并不能完全纠正一部分患者原有的心理状态可疑紊乱 .年轻

人工肝支持系统治疗急慢性肝功能衰竭的临床研究

背景:目前肝功能衰竭尚缺乏有效的治疗方法,除非及时接受肝移植,否则患者要经受长时间的住院治疗,死亡率高。应用肝脏辅助支持系统治疗急、慢性肝功能衰竭在临床上已广泛开展。目的:对各种病因所致的肝功能衰竭患者应用血浆置换(PE)和分子吸附再循环系统(MARS)进行治疗,探讨两种非生物人工肝在急、慢性肝功能衰竭中的作用。方法:148例肝功能衰竭患者在常规内科治疗的基础上分为两个治疗组,PE组60例,MARS组88例。观察患者治疗前后肝肾功能、血氨、凝血机制、电解质、血常规等指标的变化,同时评价两个治疗组的临床转归和存活率。结果:经1～3个月的随访,PE和MARS组的存活率分别为55.0%和64.8%,MARS组存活率略优于PE组,但差异无统计学意义。PE和MARS治疗后肝功能指标明显改善,血氨显著降低,总蛋白、肾功能、电解质、血常规和血气分析指标无显著变化。治疗结束72h后复查凝血指标的变化,发现凝血酶原活动度显著升高,凝血酶原时间显著降低。PE组寒颤、胸闷气短、恶心呕吐等不良反应发生率较高,MARS组不良反应主要是恶心呕吐,发生率较低。结论:PE和MARS是治疗肝功能衰竭患者安全、有效的辅助方法,尤其对非病毒性终末期患者疗效更加显著。

奥替溴铵、比特诺尔和复方地芬诺酯治疗肠易激综合征的双盲随机对照研究

目的:观察奥替溴铵、比特诺尔和复方地芬诺酯对IBS的用药安全性。方法:201例IBS腹泻型和腹痛型患者按照双盲随机对照观察分为奥替溴铵组（n=62）、比特诺尔组（n=71）和复方地芬诺酯组（n=68）。所有患者均需进行治疗前、后症状评分。疗效判断标准为:显著、中度、轻度缓解和无效。结果:三组治疗后症状平均积分均显著低于治疗前（P<0.05）。奥替溴铵组和复方地芬诺酯组中度以上缓解率（69.4％和72.1％）显著高于比特诺尔组（50.7％,P<0.05）。奥替溴铵组治疗后腹痛、腹胀、排便异常感和腹部触痛积分均显著性减低（P<0.05～<0.001）,比特诺尔组和复方地芬诺酯组治疗后腹痛、排便异常（排便次数增多、大便性状、粘液便）、腹部触痛积分和组内平均积分显著低于治疗前（P<0.05）。奥替溴铵组不良事件发生率（8.1％）显著低于比特诺尔组（23.9％,P<0.05）和复方地芬诺酯组（35.3％,P<0.001）,其主要是由于比特诺尔组（12.7％）和复方地芬诺酯组（25.0％）便秘发生率增高。结论:上述三种药物对IBS的治疗均有效,其中奥替溴铵选择性作用于腹痛型,比特诺尔和地芬诺酯主要作用于腹泻型。奥替溴铵副作用少,而比特诺尔和复方地芬诺酯长期使用易导致便秘。

腹腔灌洗引流在重症急性胰腺炎非手术治疗中的作用——附104例随机对照研究

目的探讨腹腔灌洗引流在SAP非手术治疗中的作用。方法104例SAP患者随机分为腹腔灌注组（n=45）和腹腔未灌注组（n=59）,腹腔未灌注组给予常规胃肠减压、抑酶等非手术治疗,腹腔灌注组在常规治疗基础上加腹腔灌洗引流。观察两组疗效、并发症发生率以及平均住院天数,按BalthazarCT分级标准和Ranson标准评分。结果两组治愈率和好转率比较无显著差异（P〉0.05）,但腹腔未灌注组病死率（15.3%）显著高于腹腔灌注组（P〈0.01）。死因多数由于严重并发症,如感染并发ARDS、MODS和DIC等。两组治愈病例的CT分级和Ranson分值无显著性差异,但两组好转病例CT分级均显著高于治愈病例（P〈0.01）。两组治愈或好转病例治疗后的Ranson分值均显著低于入院时（P〈0.01）。腹腔灌注组弥漫性腹膜炎、低血容量性休克、急性肾衰、Ⅱ型呼衰、ARDS和MODS的并发症发生率显著低于腹腔未灌注组（P〈0.01或P〈0.05）。腹腔灌注组治愈和好转病例平均住院天数为（21.7±10.1）d和（30.3±19.9）d,显著短于腹腔未灌注组的（35.3±16.2）d和（41.1±22.6）d（P〈0.01）。结论腹腔灌洗引流术是一种安全有效的SAP辅助治疗方法,在非手术治疗基础上行腹腔灌注的疗效明显优于单纯非手术治疗,可以减少严重并发症的发生率,降低病死率。

TSG101 siRNA表达载体的构建及其作用研究

目的构建TSG101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)小干扰RNA(TSG101 siRNA)的真核表达载体并鉴定,初步研究其与胃癌多药耐药的相关性。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;将TSG101 siRNA的真核表达载体转染胃癌长春新碱(VCR)耐药细胞SGC7901/VCR,通过Western blot鉴定TSG101 siRNA的抑制效率;以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素(ADM)的药物敏感性。结果所构建的载体经酶切后释放出预期大小的片断并经测序证实;TSG101 siRNA真核表达载体瞬时转染胃癌耐药细胞SGC7901/VCR后,发现TSG101的表达被显著抑制;细胞生长减慢,且对VCR、ADR的敏感性增加。结论成功构建了TSG101 siRNA的真核表达载体,并初步提示其参与了胃癌的多药耐药,为下一步工作奠定了基础。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗结肠癌的研究

目的:观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统在体内外对结肠癌的杀伤效应。方法:构建携带 HSV-tk基因的逆转录病毒载体,将该重组逆转录病毒感染结肠癌细胞株 SW480,筛选稳定表达 tk 的细胞克隆 SW4801tk,测定 SW480/tk 细胞在体外对GCV 的敏感性;SW480/tk 细胞在裸鼠皮下成瘤,用 GCV 治疗并观察疗效。结果:HSV-tk 基因整合入 SW480细胞并在 SW480/tk 细胞中稳定表达;GCV 在体外对 SW480/tk 细胞有明显的杀伤作用。其作用呈现剂量和时间依赖性特点和旁杀伤效应,对未转染细胞则无明显毒性。裸鼠 ex vivo实验得到相应结果,治疗组肿瘤受到明显抑制。结论在 in vitra 和 ex vivo 水平,表达 HSV-tk 基因的肿瘤细胞均可被 GCV 有效杀伤,逆转录病毒介导 HSV-tk/GCV 自杀基因治疗系统有可能成为结肠癌的有效治疗方法。

SOD在Hp感染阳性的胃癌、胃粘膜不典型增生及慢性胃炎中表达的研究

目的 观察 SOD在 Hp感染与胃癌、胃粘膜不典型增生及慢性胃炎之间所起的作用。方法 采用免疫组织化学方法观察 SOD在 Hp感染阳性胃癌、胃粘膜不典型增生及慢性胃炎组织中的表达。结果 Hp感染的阳性胃癌、胃粘膜不典型增生及慢性胃炎组织中的 SOD表达无变化。而在胃癌、胃粘膜不典型增生及慢性胃炎三者之间 SOD的表达有差异。结论 胃癌、胃粘膜不典型增生及慢性胃炎组织中 SOD的表达不受 Hp感染的影响。监测胃粘膜中 SOD的变化 。

构建fas基因真核表达载体逆转胃癌耐药细胞MDR表型

目的将ｆａｓ基因转导入胃癌耐药细胞，建立高表达ｆａｓ的耐药株，比较转导前后ｆａｓｍＲＮＡ与蛋白的表达水平，观察转导株对化疗药物的敏感性．方法采用分子克隆技术将人ｆａｓ基因的全长ｃＤＮＡ片段插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆位点之间，并借助脂质体将重组表达载体转导入人胃癌多药耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，Ｇ４１８筛选克隆细胞，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ观察ｆａｓ基因的表达，ＭＴＴ法检测转导株对ＶＣＲ，ＣＤＤＰ，５ＦＵ的敏感性．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫｆａｓ；转导细胞后，从２×１０５细胞中筛选出大约１２０个抗性克隆，转导率大于０５‰，随机挑选２个克隆继续筛选与扩增培养，最终获得了１株稳定的抗性细胞，命名为ｆａｓＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ；杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｆａｓ基因的表达，但转导株ｆａｓｍＲＮＡ及其蛋白水平显著高于非转导株；ＭＴＴ实验结果显示，转导株对ＶＣＲ，ＣＤＤＰ，５ＦＵ的敏感性显著升高．结论在胃癌耐药细胞中ｆａｓ基因处于低表达状态．将ｆａｓ基因全长ｃＤＮＡ导入耐药细胞，能有效增强ｆａｓｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平，并使耐药细胞对化疗药物的敏感性显著?

功能性消化不良患者胃固体排空功能与其临床症状关系的研究

目的 研究功能性消化不良运动障碍亚型患者胃固体排空功能与其临床症状的关系。方法 对有4周以上腹胀、恶心、食欲减退等症状的患者进行症状评分 ,症状总积分≥ 9分 ,早饱、上腹胀至少具备一项且≥2分者 ,行胃镜、B超等有关检查 ,排除器质性病变后诊断为功能性消化不良运动障碍亚型。确诊患者服用标准试餐加固体小钡条 ,餐后 5h透视确定胃内钡条排空情况 ;同时所观察患者服用西沙必利每次 5mg、每日 3次治疗 ,并于治疗 2周及 4周末复查。结果 功能性消化不良运动障碍亚型中 6 7 5 %的患者有胃排空异常 ,女性与男性无显著性差异 (P >0 0 5 )。治疗前胃排空正常者的症状积分为 10 0 0± 1 41,,胃排空异常者为 11 70±2 2 8,二者相比无明显差异 (P >0 0 5 ) ;治疗 2周及 4周后 ,胃排空正常者的症状积分分别为 4 90± 2 45、2 10± 1 19,胃排空异常者则分别为 7 0 0± 3 12、4 2 0± 2 39,与治疗前相比二者的症状总积分均明显降低 ,而且前者比后者的症状积分更低 (P <0 0 5 )。治疗前患者的症状积分虽与胃内钡潴留无明显相关 (r =0 0 78,P >0 0 5 ) ,但治疗后二者却有一定的相关性 (r =0 47,P <0 0 5 )。结论 功能性消化不良患者有明显的胃排空延迟 ;胃排空延迟确与运动障碍样症状有关 ,但?

番泻叶提取物对小鼠胃肠运动及其组织形态学的影响

目的:研究番泻叶提取物对 BALB/c 小鼠胃肠运动及组织形态学的影响,以建立动物模型,获取实验组小鼠的胃肠道组织,为从中分离出番泻叶在动物肠道中的作用蛋白及阐明番泻叶的作用机制奠定基础。方法:通过应用番泻叶提取物经不同途径给药致小鼠腹泻、胃肠推进运动试验和胃肠运动 X 线分析来观察其对小鼠胃肠运动的影响。光镜下观察连续、递增剂量灌胃小鼠3h,3、4、6和10周后胃、小肠和结肠组织学改变,透射电镜观察6周时其小肠和结肠组织细胞超微结构的改变。结果:0.3ml 番泻叶提取液灌胃后,小鼠均可在1～1.5h 出现腹泻,皮下注射0.8 ml 番泻叶提取物后观察8h 无腹泻。胃肠推进运动试验显示0.3 ml 提取液灌胃能显著增加小鼠的胃肠运动(P<0.05),胃肠运动 X 线分析显示灌胃0.4 ml 提取液可明显缩短钡剂在胃肠道内的传递时间。光镜下见灌胃小鼠各时期胃肠道粘膜无明显改变。透射电镜观察6周时小肠粘膜上皮细胞散在变性坏死,固有层内巨噬细胞增多,内含较多吞噬颗粒。结肠上皮较多变性坏死细胞,平滑肌细胞变性。结论:番泻叶提取物主要经消化道进入后起作用,作用于胃肠道组织,促进胃肠运动增强,分泌增加。长期灌胃番泻叶提取物可引起小肠和结肠粘膜上皮的损害。

番泻叶提取物对豚鼠结肠平滑肌细胞的收缩作用(英文)

目的 研究番泻叶提取物对游离的豚鼠结肠平滑肌细胞收缩的影响 .方法用含 1 g· L-1胶原酶及 0 .1 g· L-1大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液消化 ,获得游离的单个豚鼠结肠平滑肌细胞 ;将不同浓度番泻叶提取物加入细胞悬液中 ,用测微尺观察随机遇到的 50个细胞长轴变化情况 ,计算用药前后细胞平均长度 .结果 成功获得了游离的结肠平滑肌细胞 .证实不同浓度的番泻叶提取物 (0 .2 2 ,0 .44,0 .89g· L-1 )与平滑肌细胞共孵育后 ,可使细胞的平均长度缩短为 (93±2 0 ) ,(86± 2 5) ,(85± 1 5)μm,生理盐水对照组为 (1 0 2± 2 3)μm,细胞长度下降的百分数为 8.7% ,1 5.7%和 1 6.6% ,与对照组相比有显著差异 (P<0 .0 5) ;在剂量为 0 .2 2～ 0 .89g·L-1 范围内 ,番泻叶对平滑肌细胞的收缩作用逐渐增强 (P<0 .0 5) ,呈剂量 -效应关系 .

缺氧诱导因子HIF-1α在胃癌细胞系中的表达和意义

目的 研究缺氧诱导因子HIF-1α在人多种胃癌细胞系中的表达及意义。方法 分别利用RT-PCR和Westernblot的方法检测多种胃癌细胞系中HIF-1α的表达水平。结果 常氧条件下,在永生化的胃粘膜上皮细胞系GES及多种胃癌细胞系(包括耐药细胞)中均能检测到HIF-1αmRNA的表达,其表达水平无明显差异;对部分细胞系中HIF-1α蛋白表达进行检测,同样发现常氧时即有HIF-1α的表达,但表达水平明显不同。结论 常氧时在多种胃癌细胞系及永生化的胃粘膜上皮细胞系中均有HIF-1α的表达;在胃癌细胞系中,HIF-1α的调节可能主要在翻译水平而非转录水平;HIF-1α在常氧时胃癌细胞系的异常表达,提示除缺氧刺激外,非缺氧因素可能也在胃癌的发生、发展中发挥了一定的作用。

应用基因转染方法调节HSP70在人胃癌细胞株SGC7901中的表达

目的 为探讨 ＨＳＰ７０ 在人胃癌中过度表达的意义， 调节ＨＳＰ７０ 在人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１ 中的表达．方法 应用脂质体介导的基因转染方法，将表达针对ＨＳＰ７０的反义ＲＮＡ 表达载体及ＨＳＰ７０ 表达载体转入ＳＧＣ７９０１ 细胞，通过ｈｙｇｒｏ ｍ ｙｃｉｎｅ 抗性筛选， 挑选阳性克隆；对阳性克隆从ＲＮＡ 水平（ 点杂交及ＲＮａｓｅ 保护试验） 及蛋白质水平（ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 及免疫组化） 进行研究．结果 ＨＳＰ７０ 在转染细胞中的表达得到了调节． 为进一步研究ＨＳＰ７０ 对胃癌形成与发展的作用创造了条件．结论 经过ＨＳＰ 反义或正义ＲＮＡ 转染的ＳＧＣ７９０１ 细胞具有不同的ＨＳＰ７０ 表达水平可用于胃癌发生机制的研究．

表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定

目的 研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。 方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２ ０００处有１条可与抗ＭＧ７ ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。

巴豆提取物对人肠上皮细胞生物学特性的影响

目的研究巴豆提取物对人肠上皮细胞生物学特性的影响。方法应用MTT法观察巴豆提取物对体外培养的人肠上皮细胞生长的影响。采用递增剂量(4mg·L 1～40mg·L^1)巴豆提取物作用细胞6wk后,用流式细胞术观察细胞增殖周期变化,同时用光镜和透射电镜观察细胞形态学的改变。结果大剂量巴豆提取物(80mg·L^1)可致培养的人肠上皮细胞全部死亡,中等剂量(20mg·L 1～40mg·L^1)明显抑制细胞的生长1.3,5,7d时OD值依次为:(20mg·L^1)0.040±0.003,0.081±0.012,0.147±0.022,0.0240±0.016;(40mg·L^1)0.033±0.004,0.056±0.012,0.104±0.010,0.189±0.006;对照为0.031±0.008,0.096±0.012,0.173±0.009,0.300±0.016,P<0.01-0.0001),且呈剂量依赖关系,其IC_(50)为52mg·L^1;小剂量(4mg·L^1)对细胞的生长无明显影响(1、3、5、7d时OD值依次为:0.053±0.005,0.089±0.009,0.166±0.002,0.262±0.008,P>0.05),用递增剂量(4mg·L^1～40mg·L^1)巴豆提取物持续作用细胞6wk后,可见其G_1—S期进程加快,G_1期细胞的数分数由0.604减少为0.584,S期细胞的数分数由0.302增加为0.336,P>0.05,DI增高为1.15;光镜下见细胞体积变小,核大质少,核浆比例失调;电镜下可见宽大突起的细胞膜,表面微绒毛丰富,长短不一,胞核明显增大,核仁增多,并可见病理性核分裂相。结论巴豆提取物对人肠上皮细胞生长的影响呈剂量依赖性,大剂量可致细胞生长延缓或死亡,小剂量无明显影响。长期使用递增剂量巴豆提取物可诱导细胞增殖加快,异倍体DNA含量增加,促使细胞发生恶性转化。

应用噬菌体肽库筛选胃癌相关抗原模拟表位

目的 利用噬菌体递呈随机肽文库筛选技术 ,进行胃癌相关抗原 MG7Ag模拟表位的研究 .方法 应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗胃癌单克隆抗体 MG7m Ab,细胞 EL ISA方法检测其活性 .以 MG7m Ab作为筛选分子 ,生物淘洗噬菌体递呈随机 7肽文库 .经 3次淘洗后将筛选所得的噬菌体克隆进行 DNA测序 ,递呈随机 7肽氨基酸序列同源性分析 .结果 对阳性噬菌体进行递呈肽氨基酸序列分析 ,获得一侯选模拟表位 (KPHx Hx H) .结论 经过对随机 7肽库的生物淘洗 ,获得一侯选胃癌相关抗原模拟表位 。

利用细菌内重组腺病毒系统构建胃癌MG7-Ag模拟表位疫苗

目的:以复制缺陷的腺病毒为疫苗载体,构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒疫苗.方法:将编码MG7-Ag模拟表位的互补序列设计到上游引物的5/端.以含有HBcAg全序列的质粒p1.2Ⅱ为模板,通过PCR扩增,获得MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因.经序列测定证实后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组.经抗性筛选及酶切鉴定的重组质粒,再用导入293细胞进行包装,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:序列测定证实,PCR产物为胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片段;酶切鉴定表明胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片断插入了pAdTrack-CMV穿梭质粒,卡那霉素进行抗性筛选及PacⅠ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.PacⅠ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d后见明显的绿色荧光蛋白表达.回收病毒,可重复感染293细胞,证实有感染能力的病毒颗粒包装成功.结论:胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒载体的构建成功,为进一步研究胃癌MG7-Ag模拟表位诱发抗胃癌免疫打下了基础.