检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立

定量检测艾滋病患者体内荷毒水平对于评价治疗效果和研究发病机理至关重要 ,我们建立了一种检测 HIV- 1DNA水平的竞争性 PCR方法 ( QC- PCR)。选择 HIV- 1的高度保守区域 gag基因作为靶序列 ,以重组 PCR方法和基因克隆技术构建两种重组质粒 ,分别插入有 gag和 Δ gag片段 ,其中后者比前者内部缺失 50 bp,用作定量检测中的竞争模板。将梯度稀释的竞争模板加入到反应体系中与待测的野生型模板共同扩增 ,PCR产物经 8%聚丙烯凝胶电泳后进行密度扫描测定 ,结果表明该方法稳定可靠 ;8份艾滋病患者的 PBMC DNA标本经该方法的检测也得到较好的结果。我们认为 QC- PCR是一种较为理想的 HIV- 1DNA水平的定量方法 ,非常适合于临床标本的检测和治疗研究的应用。