血管内皮细胞与平滑肌细胞复合构建组织工程人工血管的实验研究

目的 构建既具有活性血管平滑肌细胞 (VSMC)中膜层 ,又有血管内皮细胞 (VEC)内皮化的复层结构组织工程血管支架材料。方法 1将聚羟基乙酸 (PGA)纤维无纺网、VSMC和胶原纤维相混合 ,设计构建 VSMC活性的组织工程血管支架材料 ;2采用酶消化法从兔主动脉中分离培养兔 VEC并传代、纯化 ,接种于组织工程人工血管支架的内腔 ,体外培养 ,并行电镜观察。结果 构建的支架材料具有一定弹性和韧性 ,VEC在其内表面形成较完整内皮细胞层 ,且 VSMC能够保持活性 ,生长状况良好。结论 经胶原包埋处理的 PGA支架可作为组织工程化人工血管研究较理想支架材料 ;为组织工程方法构建具有分层结构的组织工程血管奠定实验基础。

糖基化对α-晶状体蛋白的修饰和分子伴侣活性的降低

目的 研究糖基化对 α-晶状体蛋白分子伴侣活性的作用。方法 分离牛晶状体α-晶状体蛋白 ,分别与 0 .5 mol· L- 1 果糖和 0 .5 m ol· L- 1 葡萄糖在 37℃温育 ,在第 0、2 4、32天测定 380 nm的光吸收值和 40 0 nm非色氨酸荧光值 ,高压液相色谱 ( high performanceliquid chrom atography,HPL C)和 SDS- PAGE评价蛋白质交联程度 ,采用过氧化氢酶( catalase,CAT)和βL-晶状体蛋白的热凝聚光散射值 ,作为α-晶状体蛋白的分子伴侣活性指标。结果 果糖和葡萄糖可导致时间依赖性 α-晶状体蛋白在 380 nm吸收值的增加 ,非色氨酸荧光值升高 ;HPL C和 SDS- PAGE提示糖与α-晶状体蛋白形成交联复合物。果糖较葡萄糖作用明显。糖基化导致 α-晶状体蛋白抑制 CAT和 βL-晶状体蛋白热凝聚作用降低 ,孵育第 2 4天 ,葡萄糖组α-晶状体蛋白分子伴侣活性分别降低约 12 %和 19% ,果糖组约7%和 9% .结论 糖基化导致 α-晶状体蛋白形成高分子聚合物、凝聚、交联 ,分子伴侣活性丧失 ,这在老化和糖尿病性白内障形成过程中起重要作用。

结缔组织生长因子在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,并鉴别增生膜中阳性细胞来源。方法采用SABC免疫组织化学方法对玻璃体切割手术获得的43例PVR增生膜进行CTGF蛋白的检测,并采用免疫荧光双标记技术在阳性表达的增生膜和正常人眼球标本中判定CTGF阳性细胞来源。结果免疫组织化学显示PVR增生膜中阳性细胞形态多是一类胞体为长圆形或多角形,胞浆丰富的上皮样细胞。17例C2-C3级膜中12例阳性,26例D1-D3级膜中19例阳性,其染色反应为阴性"-"、弱阳性"+"、阳性"2+"和强阳性"3+"的分别有5、3、6、3例和7、5、8、6例,总阳性率分别为70.6%和73.1%。统计学分析CTGF阳性表达与膜分级问无相关性(P>0.1)。免疫荧光双标记法显示PVR增生膜中有RPE、巨噬细胞、神经胶质细胞,CTGF阳性细胞来源于RPE细胞;正常眼球RPE层不表达CTGF。结论正常眼球RPE层不表达CTGF,PVR形成过程中RPE细胞在TGF-β1等生长因子的刺激下,CTGF表达上调,表明CTGF参与了PVR增生膜的形成和发展。

缺氧诱导因子1与眼内新生血管

缺氧可上调血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达 ,造成眼内新生血管形成。在缺氧状态下 ,VEGF的表达是由缺氧诱导因子 1(hypoxia in duciblefactor 1,HIF 1)诱导的。现就HIF 1的功能、信号传导途径、HIF

表皮生长因子对人视网膜色素上皮细胞增生及移行的影响

目的 观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法 对培养的人 3～ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 μg·L-1)及血清对人RPE细胞增生的影响 ;应用RPE细胞损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察EGF及血清对RPE细胞移行的影响。结果 在细胞增生的实验中 :无血清组 ,10～ 10 0 μg·L-1EGF达到最佳刺激浓度 ,其增生率为 81.8% ;5 0mL·L-1血清组 ,1～10 μg·L-1EGF的刺激作用最强达到 12 2 .7% ;无血清组与 5 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,且 5 0mL·L-1血清可明显促进人RPE细胞的增生 (P <0 .0 0 1)。在细胞的移行实验中 :无血清组 ,1～ 10 0 μg·L-1EGF可促进RPE细胞移行 ,但作用较弱 ;10 0mL·L-1血清组中 1～ 10 μg·L-1EGF促移行作用最强达 4 38.9% ;1～ 10 0 μg·L-1EGF的促进基础RPE细胞移行能力 (最强为 36 % )低于 10 0mL·L-1血清诱导的RPE细胞的移行能力 (强度为 14 7% ) ;无血清组与 10 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论 EGF对体外培养的人RPE细胞具有浓度依赖性促增生和移行的作用 ;

正常视力人群眼压和角膜中央厚度的关系

目的:了解正常视力人群(视力≥5.0)眼压和角膜中央厚度之间的关系。方法:分别采用角膜超声厚度计以及非接触式眼压计对视力≥5.0的志愿者54人(108眼,男22名,女32名,年龄27.82±7.78岁)进行角膜中央厚度的测量以及眼压测量。结果:正常视力人群眼压和角膜中央厚度均呈正态分布,眼压为14.63±3.25mmHg,中央角膜厚度为547.15±31.91μm。眼压和角膜中央厚度呈正相关,r=0.441,P<0.001。线形回归方程为Y=-10.05+0.045X,其中,Y为眼压,X为角膜中央厚度。其R2=0.195,拟合效率较低。结论:国人正常视力人群的眼压和角膜中央厚度均呈正态分布,两者之间呈正相关关系。正常视力(视力≥5.0)人群的角膜中央厚度可以在一定程度上反映眼压的大小,但影响较小。

表皮生长因子受体在增生性玻璃体视网膜病变视网膜周膜中的表达

目的 观察表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor,EGFR)在增生性玻璃体视网膜病变 (proliferative vitreoretinopathy,PVR)增生膜中的表达及其与病程的关系。方法 玻璃体手术中取出的 PVR增生膜 43例 ,按病程分为早期膜 (<2个月 ) ,中期膜 (2～ 6个月 )和晚期膜 (>6个月 ) ,用免疫组织化学及原位杂交技术从蛋白质及 m R-NA水平检测 EGFR的表达。结果 EGFR蛋白分子在早期膜中呈强阳性表达 ,中期膜中呈弱表达 ,晚期膜中呈阴性。EGFR基因仅在早期膜中呈阳性表达。结论 EGFR主要存在于 PVR的早期膜中 ,可能介导有丝分裂信号对

晶状体上皮细胞凋亡与白内障发生的分子生物学机制

目的:观察白介素转化酶3(Caspase-3)在白内障晶状体上皮细胞中的表达及与凋亡的关系。方法:经手术收集25只白内障晶状体前囊膜以及胚胎晶状体(6只)和成人透明晶状体(4只)的前囊膜,采用免疫组织化学染色的方法观察Caspase-3的表达及染色强度。并对Caspase-3在年龄相关性白内障与并发性白内障中的表达进行比较。结果:Caspase-3在白内障组有很好的表达,在年龄相关性白内障组16只中14只呈阳性表达,在并发性白内障组9只中8只呈阳性表达,在透明晶状体没有表达;在年龄相关性白内障与并发性白内障之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:凋亡在白内障的发生中存在。

结缔组织生长因子mRNA在增生性糖尿病视网膜病变视网膜前纤维血管膜中的表达

目的 观察结缔组织生长因子 ( connective tissue growth factor,CTGF) m RNA在增生性糖尿病视网膜病变 ( proliferative diabetic retinopathy,PDR)纤维血管性视网膜前膜中的表达。方法 采用原位杂交方法 ,对玻璃体切割术获得的 6例 PDR的纤维血管性膜进行 CTGF m RNA的检测。结果 2例纤维血管性膜标记为阳性染色 ( ) ,4例为强阳性染色 ( ) ;每例标本随机计数 10 0个细胞中的阳性细胞数 ,取 6例标本的平均值 ,计算平均阳性率为 77% .阳性细胞多见于成纤维细胞样细胞和新生血管的血管内皮细胞。结论 PDR纤维血管性膜形成过程中成纤维样细胞及血管内皮细胞在 TGF-β等生长因子的刺激下 ,CTGF m RNA显著上调 ,CTGF参与了 PDR纤维血管性膜的形成和发展。

转化生长因子-β受体Ⅱ在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达

目的:观察及评估转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达及临床意义。 方法:采用免疫组化和原位杂交方法,对13例PVR患者行玻璃体手术增生膜获得的16例进行TGF-βRⅡ的蛋白和mRNA的检测。 结果:免疫组化结果为:9例C2～C3级膜中,染色反应为阳性的有8例,总阳性率为88.9％。7例D1～D3级膜中有6例为阳性,总阳性率为85.7％。阳性细胞多是一类胞体为长圆形,胞核呈圆形或卵圆形的上皮样细胞。统计学分析TGF-βRⅡ标记与膜分级间无相关性(P>0.05)。原位杂交结果与免疫组化基本一致。 结论:PVR发生过程中视网膜色素上皮细胞在生长因子等的刺激下,TGF-βRⅡ表达显著上调,表明了TGF-β参与PVR增生膜的形成。眼科学报 2003;19:244-247。

紫外线辐射对α-晶状体蛋白分子伴侣活性的作用

目的 研究在老化和白内障形成过程中紫外线 (UV)辐射对α 晶状体蛋白分子伴侣活性的作用。方法 新生Sprague Dawley大鼠皮下注射亚硒酸钠诱导硒性白内障 (SC) ,采用SephacrylS 3 0 0HR分离幼年和老年兔晶状体皮质和核以及SC大鼠α 晶状体蛋白。以α 晶状体蛋白对过氧化氢酶热凝聚的抑制作为分子伴侣活性指标 ,观察UV B (3 0 0nm )辐射α 晶状体蛋白后 ,其伴侣活性的变化。结果 UV辐射新生和老年兔晶状体核αL 晶状体蛋白后 3 0h ,与辐射前比较伴侣活性降低约 18%和 14 % ,而皮质的变化不显著 ;至 10 0h时 ,老年兔皮质、核和新生兔核αL 晶状体蛋白的伴侣活性分别下降 8%、2 7%和 2 3 %。辐射第 192h ,正常大鼠和SC晶状体αH 和αL 晶状体蛋白的伴侣活性显著降低 ,正常组分别下降 3 5 %和 2 3 % ,SC组下降 3 1%和 10 %。结论 UV B辐射可降低α 晶状体蛋白的分子伴侣活性 ,并呈时间依赖效应。UV辐射对老年α 晶状体蛋白分子伴侣活性影响比幼年显著 ,晶状体核比皮质对UV辐射敏感 ,αH 晶状体蛋白比αL 晶状体蛋白敏感。UV辐射可进一步降低硒性白内障α 晶状体蛋白的分子伴侣活性。

激光经瞳孔温热疗法治疗高度近视性黄斑下脉络膜新生血管

目的观察激光经瞳孔温热疗法对高度近视性黄斑下脉络膜新生血管的治疗效果及其安全性。方法使用IRIS810nm半导体激光对26例28眼经眼底荧光素血管造影及吲哚青绿血管造影诊断为黄斑下脉络膜新生血管的高度近视患者进行了激光经瞳孔温热治疗。男10例11眼,女16例17眼,平均年龄40.2岁。屈光度-6.00～-12.00,均伴有不同程度矫正视力下降、注视性暗影、视物变形等临床症状。采用光斑直径为1.2、2.0及3.0mm光斑,功率为100～300mW的激光照射60s。6眼进行了2次治疗。随访4～40周,通过视力、直接眼底镜检查、眼底荧光素血管造影及吲哚青绿血管造影观察治疗效果。结果治疗后,矫正视力提高>2行者10眼(36%),无变化者16眼(57%),视力下降者2眼(7%)。12眼注视性暗影及视物变形等症状有程度不同的改善,眼底检查出血渗出完全消退或减轻者共6眼。复查眼底造影者中7眼脉络膜新生血管明显消退、出血减轻。结论激光经瞳孔温热疗法治疗高度近视性黄斑下脉络膜新生血管出血有一定的效果,该法较安全、经济。但其治疗参数、远期疗效及并发症仍需更大样本的长期临床观察。

波前像差及其应用与测量

波前像差引导的准分子激光角膜屈光手术 ,是通过测量人眼的波前像差 ,运用测量结果引导激光手术的一种个体化切削。随着这一手术的开展 ,波前像差成为屈光手术的一个热门话题。主要介绍波前像差的基础理论以及 3种具有代表性的检测方法 :外向型Shack Hartmann波前检测、视网膜成像型Tscherning波前检测以及入射型空间解像屈光测量 (Scheiner法 )。

早产儿视网膜病变筛查的护理配合

目的探讨早产儿视网膜病变筛查的护理配合。方法对134例早产儿和低体重儿用RetCamⅡ视网膜成像系统检查眼底,详细记录每例患儿的眼底视网膜情况,给予护理观察和配合。结果所有患儿均安全、顺利地完成眼底检查。结论早产儿的体重普遍偏低、器官发育不健全、抵抗力差,免疫力低下,进行眼底检查时需要护士进行科学、细心、安全的配合,以保证眼底筛查工作的顺利进行。

蛋白激酶C在缺氧人RPE细胞表达血管内皮生长因子中的作用

目的探讨蛋白激酶C(PKC)信号转导通路在缺氧诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用。方法在细胞培养液内加入CoCl2溶液以模拟缺氧环境,培养RPE细胞0·5、48h后,用免疫荧光法检测人RPE细胞内PKC的表达。将PKC激动剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(PMA)及PKC抑制剂Chelerythrine分别加入人RPE细胞培养液,在缺氧状态下分别培养6、12、24h后,用ELISA检测各组RPE细胞中VEGF的表达。对照组为常氧状态下培养的RPE细胞。结果免疫荧光染色显示缺氧及常氧状态下,RPE细胞浆及胞核内均有PKC的表达。PKC激动剂PMA可增强缺氧状态下RPE细胞对VEGF的表达,而PKC抑制剂Chelerythrine可减弱缺氧状态下RPE细胞对VEGF的表达。结论缺氧诱导VEGF在RPE细胞中的表达,其信号传导途径部分是通过PKC通路实现的。

缓减近视发展药物的新进展

迄今的研究表明 ,利用药物疗法可望减缓青少年近视的发展。其中已应用的主要药物有睫状肌麻痹剂、降眼压药物、多巴胺等。已经证实胆碱能受体阻断剂能够显著地减缓近视发展 ,阿托品是代表性的药物 ,但其不可避免的副作用限制了它的使用。派伦西平作为选择性的M1受体阻断剂表现出引人关注的发展前景。寻找有效减缓近视发展、应用方便、毒副作用轻微的药物或方法 。

胞磷胆碱配合遮盖治疗大龄弱视76例

目的 观察胞磷胆碱配合遮盖治疗大龄弱视患者的远期疗效 .方法 弱视患者 76例 ,年龄 12～ 2 6 (平均 16 .6±3. 3)岁 ,接受 1～ 3个疗程的胞二磷胆碱治疗 (体质量 <40kg,5 0 0 mg· d- 1 ,体质量≥ 40 kg,10 0 0 m g· d- 1 ) ,每个疗程15 d,随访 3～ 9mo.所有患者均先进行配镜矫正 .对双眼视力相差超过两行 (以国际标准视力表计 )的患者 ,连续遮盖 2 0d后 ,间断遮盖每周 6 d,3mo为一疗程 .对双眼视力相当的远视患者配合双色光闪烁弱视治疗仪治疗 ,双眼各 15 min·d- 1 .结果 经 1～ 3个疗程后 ,80 (71% )只眼视力提高在 2行以上 ,其中 36只眼 (32 % )提高在 4行以上 .停药 5 wk后视力均有不同程度降低 ,但遮盖及再次用药后仍能继续提高 .坚持治疗的患者视力有波动 ,但趋势向好 ;优势眼视力与弱视眼的视力均可提高 ;视力≥ 5 .0者视力仍可提高 ;大剂量组疗效显著 .结论 胞磷胆碱治疗大龄弱视 ,其疗效显著 。

雪旺细胞源性神经营养活性物质对培养视网膜节细胞正常及缺气损伤环境中存活及生长的作用

目的:探讨雪旺细胞(Schwann cells,SC)源营养神经活性物质(SC derived neurotrophic activity,SCNA)对体外培养视网膜节细胞正常及缺气损伤环境中存活及生长相关蛋白(GAP)_(43)表达的作用。方法:培养乳鼠SC,制备不同蛋白浓度的SCNA,加入原代培养的视网膜细胞中,MTT法检测SCNA活性培养荧光金逆行标记的新生3d的SD乳鼠视网膜细胞,接种于24孔板中。培养第2d时SCNA作用组培养液中加入300mg/l。SCNA,对照组不加;培养第5d缺气损伤组在培养液表面加入液体石蜡造成缺气损伤。12h后去除液体石蜡,观察细胞形态和计数荧光金逆行标记的视网膜节细胞(retinal ganglion cell,RGC)。Western Blot法分析SCNA对视网膜细胞GAP_(43)表达的影响。结果:SCNA能促进培养视网膜细胞的存活,并有蛋白浓度依赖关系。加SCNA后,视网膜细胞生长明显旺盛,悬浮的死细胞较少,RGC数量明显多于视网膜细胞单纯培养组(F=62.89,P<0.01)。缺气损伤组视网膜细胞出现肿胀改变,加有SCNA缺气损伤组细胞形态大致正常,RGC数与对照组相比有显著性差异(F=49.27,P<0.01)。GAP_(43)的表达在视网膜细胞正常及缺气损伤SCNA作用组上调。结论:SCNA对培养RGC具有明显营养作用,并上调GAP_(43)的表达。在培养液中加入SCNA,可以减轻“缺气”造成的损伤,提高体外培?