幽门螺杆菌vacA cagA基因亚型与抗生素耐药的关系

目的研究幽门螺杆菌(H.pylori)cagA vacA基因亚型及其与抗生素耐药的关系方法用琼脂稀释法测定50例 H.pylori临床分离株对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑的最低抑菌浓度(MIC),并计算MIC_(50)和MIC_(90)值。用多重PCR鉴定H.pylori菌株的vacA(sla,slb,s2,ml,m2)及cagA的型别.结果克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑对H.pylori的MIC_(50)和MIC_(90)分别为:<0.016mg·L^(-1);0.016mg·L^(-1),0.047mg·L^(-1);16.000mg·L^(-1),52.000mg·L^(-1);25.140mg·L^(-1),76.800mg·L^(-1).H.pylori菌株对克拉霉素.阿莫西林,替硝唑,甲硝唑的耐药率分别为0％,0％,20％和38％.在对替硝唑敏感的H.pylori菌株中,vacA sla,slb和s2型分别占50.0％,42.5％和7.5％;vacA m1和m2型占60.0％和40.0％;vacA s1a/ml,s1b/ml,s1a/m2,s1b/m2和s2/m2型分别占32.5％,27.5％,17.5％,15.0％和12.5％;cagA^1和cagA型为87.5％和12.5％.在对替硝唑敏感的H.pylori菌株中,vacA s1a,s1b和s2型分别占50.0％,40.0％和10.0％;vacA m1和m2型占40.0％和60.0％;vacA s1a/ml, s1b/ml,s1a/m2,s1b/m2,和s2/m2型分别占20.0％,20.0％,30.0％,和10.0％;cagA和cagA^-型为80.0％和20.0％.结论 H.pylori菌株对中硝唑的耐药率明显高于H.pylori对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑的耐药率,不同cagA vacA基因亚型的H.pylori菌株对替硝唑的耐药率无显著差异.

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因在减毒鼠伤寒杆菌中的表达

目的 制备能表达幽门螺杆菌 (Hp)尿素酶 B亚单位(Ure B)的减毒鼠伤寒杆菌 ,初步确定其是否可用作抗 Hp的口服疫苗 .方法 应用 PCR扩增 Hp Ure B基因片段 ,测序后克隆入原核表达载体 PTc0 1,转化 L B5 0 0 0修饰后再转化SL32 6 1,得到重组的减毒鼠伤寒杆菌 SL32 6 1/ PTc0 1- Ure B.应用抗 Hp菌体蛋白兔血清行 Western- blot检测 Ure B在SL 32 6 1中的表达 .SL 32 6 1/ PTc0 1- Ure B在 L B培养基上连续传代 6 0代以确定其稳定性 .结果 从 Hp基因组 PCR扩增出 170 0 bp片段 ,测序为 Ure B基因序列 .酶切及 PCR鉴定提示 PTc0 1- Ure B原核表达载体的构建以及转化减毒鼠伤寒杆菌 SL32 6 1是成功的 .Western- blot显示 SL32 6 1/ PTc0 1-Ure B表达约 6 1KD的蛋白 ,与 Hp U re B亚单位相符 .体外连续培养 6 0代未见 PTc0 1- Ure B质粒丢失及其对宿主菌的毒性 .结论 减毒鼠伤寒杆菌 SL32 6 1/ PTc0 1- Ure B表达的Ure B蛋白具有免疫原性 ,有望用作抗 Hp感染的口服疫苗 .

多重聚合酶链反应鉴定幽门螺杆菌基因型

目的建立鉴定幽门螺杆菌(H.pylori)cagA,vacA基因型别的多重聚合酶链反应(PCR)方法,并对90例H.pylori临床分离株的cagA,vacA型别进行鉴定。方法将鉴定cagA基因的引物P1,P2及鉴别vacA基因型别的引物VAG-F,VAG-R,VA1-F,VA1-R,SS1-F加入同一反应管中,一次性扩增出2～4条特异性DNA片段,并判定H.pylori cagA,vacA基因型别。结果建立了鉴定H.pylori cagA,vacA基因型别的多重PCR系统,其灵敏度为300CFU。90例H.pylori菌株中,82例(91.1％)含cagA基因;vacA基因信号区sla,slb和s2型分别为46例(51.1％),36例(40.0％)和8例(8.90％);中间区ml和m2型分别为46例(51.1％),44例(48.9％)。82例sl型H.pylori菌株中79例(96.3％)为cagA^+,8例s2型H.pylori菌株中2例(25.0％)为cagA^+,其差异有显著统计学意义(X^2=38.39,P<0.001)。结论建立的鉴定H.pylori cagA,vacA基因型别的多重PCR方法具有简便、快速、特异、经济的特点。西安地区人群感染的H.pylori菌株绝大多数为cagA^+菌株,H.pylori vacA基因的sl型(特别是sla型)和cagA基因的出现密切相关。