目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理后,N9细胞自噬水平的变化,并探究LPS刺激下不同自噬水平对N9细胞的损伤和存活的影响。方法:体外培养N9细胞,给予24 h LPS处理,免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)及溶酶体相关膜蛋白2...目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理后,N9细胞自噬水平的变化,并探究LPS刺激下不同自噬水平对N9细胞的损伤和存活的影响。方法:体外培养N9细胞,给予24 h LPS处理,免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)及溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)的表达,Western Blot检测LC3与Beclinl的表达。LPS处理后分别使用自噬诱导剂雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)调节N9细胞自噬水平,Western Blot检测不同处理组自噬标记蛋白LC3、Beclinl的表达;使用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase)试剂盒、Cell Count Kit(CCK8)试剂盒检测细胞损伤及存活。结果:(1)LPS刺激造成N9细胞损伤,LDH释放量(113.6%±3.2%)较对照组(100.0%±3.9%)显著增加(P<0.01),存活细胞数(69.8%±2.1%)较对照组(100.0%±3.9%)显著减少(P<0.001);(2)与对照组相比,LPS显著上调N9细胞LC3以及Beclinl水平(P<0.05)并同时上调LAMP2水平;(3)RAP上调LPS处理后N9细胞的自噬水平并减少小胶质细胞损伤(100.8%±2.3%),促进细胞存活(87.4%±5.7%)(P<0.05)。3-MA则抑制LPS处理后N9细胞自噬水平并降低细胞存活(60.6%±2.9%),而细胞损伤(123.2%±3.7%)与LPS组相比未见统计学差异;(4)RAP与3-MA分别促进或抑制LPS诱导的N9细胞自噬相关蛋白的表达(P<0.05)。结论:上调自噬水平减少LPS刺激诱导的N9细胞损伤,促进细胞存活。展开更多
半个世纪以前,比利时细胞学家Christian de Duve用自噬这一术语来描述细胞利用溶酶体来消化胞浆成分这一过程。依据待降解产物运送到溶酶体时的形态不同,自噬主要可以分为三类:①大自噬,其特征是形成独特的双层膜细胞器.自噬小体...半个世纪以前,比利时细胞学家Christian de Duve用自噬这一术语来描述细胞利用溶酶体来消化胞浆成分这一过程。依据待降解产物运送到溶酶体时的形态不同,自噬主要可以分为三类:①大自噬,其特征是形成独特的双层膜细胞器.自噬小体,这是一种通过自噬小体与溶酶体融合的途径并在细胞稳态中起着重要作用;②小自噬,溶酶体器膜将胞浆成分直接内吞进去;③分子伴侣介导的自噬,是由分子伴侣热休克蛋白70、溶酶体相关的膜蛋白2A介导的降解过程。展开更多
文摘半个世纪以前,比利时细胞学家Christian de Duve用自噬这一术语来描述细胞利用溶酶体来消化胞浆成分这一过程。依据待降解产物运送到溶酶体时的形态不同,自噬主要可以分为三类:①大自噬,其特征是形成独特的双层膜细胞器.自噬小体,这是一种通过自噬小体与溶酶体融合的途径并在细胞稳态中起着重要作用;②小自噬,溶酶体器膜将胞浆成分直接内吞进去;③分子伴侣介导的自噬,是由分子伴侣热休克蛋白70、溶酶体相关的膜蛋白2A介导的降解过程。