动脉粥样硬化遗传易感性与HUMARA(GGC)n基因多态性的相关性研究

目的 :研究雄激素受体基因 (HU MARA )多态性在陕西地区老年动脉粥样硬化 (AS)人群中分布规律及其该位点与 AS遗传易感性的关系。方法 :应用 PCR- Am p- FL P(多聚酶链反应扩增片段长度多态性 )技术对老年 AS患者 10 0例及非 AS老年人 78例 HU MARA - STR(短串联重复序列 short tandem repeats)位点进行多态性分析。结果 :在正常人群中 HU MARA基因 GGC位点共检测出 16种基因型 ,13个等位基因 ,其片段大小在 177～ 2 6 7bp,杂合度为 85 %,多态信息量 (polymorphism information content,PIC)为 0 .80 ;AS人群 HU MARA基因 GGC位点共检出 15种基因型 ,13个等位基因 ,其片段大小为 195～ 2 37bp,杂合度为 77%,多态信息量为 0 .72 ,两群体中基因频率分布有显著差异 (P<0 .0 1) ,发现某些片段存在基因频率分布高峰 ,在两群体中亦有差异性。结论 :推测 HU -MARA基因 STR多态位点与 AS的遗传易感性相关。

高强度聚焦超声对转移性肝癌患者机体免疫功能的影响

目的:观察高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对转移性肝癌患者机体免疫功能的影响。方法:转移性肝癌患者30例,通过全身麻醉、超声肿瘤定位进行HIFU治疗,采用流式细胞仪及双抗体夹心法,检测治疗前、后外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、NK细胞的百分率及sIL-2R的变化。采用LDH释放法检测NK细胞的杀伤活性。结果:HIFU治疗后CD3+、CD4+、NK细胞的百分率明显升高(P<0.05),CD8+细胞的百分率明显降低(P<0.05),NK细胞杀伤活性较治疗前升高,但无统计学差异(P>0.05);sIL-2R的水平较治疗前降低,但无统计学差异(P>0.05)。结论:HIFU具有免疫激活作用,可一定程度改善患者的机体免疫功能。

组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)抑制人脐静脉内皮细胞增殖及侵袭和迁移

目的分析组蛋白特异性去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞周期、凋亡和迁移的影响。方法合成JMJD3的小干扰RNA(siRNA)、构建JMJD3过表达载体;阴性对照siRNA、si JMJD3或质粒p MSCV-PIG、p MSCV-JMJD3转染HUVEC 48 h后,通过荧光实时定量PCR检测JMJD3 mRNA的水平;流式细胞术检测各转染组HUVEC的细胞周期与凋亡的变化;TranswellTM实验和划痕实验检测转染后的HUVEC侵袭和迁移能力的变化。结果 HUVEC转染si JMJD3 48 h后JMJD3的表达水平下降,S期细胞增加、而G1期细胞明显减少。下调JMJD3后HUVEC的增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞侵袭、迁移能力增强。而在HUVEC转染JMJD3过表达质粒MSCV-JMJD3 48 h后,细胞内JMJD3水平增加,S期细胞显著减少,而G1期细胞则明显增加,同时HUVEC的增殖能力受到抑制,细胞凋亡增多,细胞侵袭和迁移能力减弱。结论 JMJD3具有抑制HUVEC增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡的作用。

陕西汉族人群细胞连接蛋白Cx37基因多态性分布

目的探讨心血管疾病相关的细胞连接蛋白37(Connexin37,Cx37)基因C1019T多态性在陕西汉族人群的分布。方法采用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对116例无血缘关系的健康陕西汉族人的染色体进行检测,分析基因型频率、等位基因频率分布,并与其他种族进行比较。结果Cx37基因C1019T等位基因频率为:C=68.5%,T=31.5%;基因型频率为:C/C=63.8%,C/T=30.2%,G/G=6.0%;其中男性等位基因频率为:C=76.1%,T=23.9%;基因型频率为:C/C=59.2%,C/T=33.8%,G/G=7.0%;陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率和等位基因频率在男女之间差异无统计学意义,与瑞典人群相比差异有统计学意义(P<0.05),而与日本、我国台湾人群相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率及等位基因频率与东方人种无差异,而有别于西方人种。

生物化学与分子生物学实验教学之体会

讨论了如何借助实验课的平台，使学生掌握作为21世纪的医务工作者必须了解和掌握的生物化学与分子生物学实验技术的基本原理和方法，有以下收获：合理安排实验课，充分准备实验课，完成好实验报告，检验教学效果。

游离脂肪酸诱导小鼠肝实质细胞体外脂肪化并加速细胞凋亡

目的建立小鼠非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)体外细胞模型,为进一步体外药物高通量的筛选以及深入探讨NAFLD发生发展的分子机制奠定基础。方法胶原酶灌注分离并培养小鼠原代肝实质细胞,随后给予不同浓度的游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)刺激,进行油红染色以及三酰甘油测定;通过MTS法以及流式细胞术分析游离脂肪酸对肝实质细胞增殖以及细胞凋亡的影响,使用Western印迹法检测肝实质细胞内的MAPK相关信号通路的变化,实时定量PCR检测细胞中bim与fas的表达。结果肝实质细胞内的脂质累积程度随加入的FFA浓度上升而呈明显增加(P<0.05);肝实质细胞的细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡明显增加,肝实质细胞内JNK信号通路随刺激时间延长强度增加,ERK信号通路随刺激时间延长强度减弱,细胞内bim和fas的表达量上升。结论成功建立了非酒精性脂肪肝病的体外细胞模型,能够很好地模拟体内肝实质细胞内脂肪累积以及细胞凋亡现象。

放疗技术在肝癌治疗中的应用与研究进展

肝癌的放疗已有多年的历史,然而由于正常肝组织放射耐受性的限制,使所给剂量达不到肿瘤的根治剂量,治疗效果难以令人满意,以致长期以来不为人所接受,本文主要就现行的各种放疗技术在肝癌治疗中的应用与研究进行探讨,对肝癌的放射治疗进行有益的总结,并希望进一步提高肝癌的疗效,提高患者的生存质量。

大黄总蒽醌对大鼠肾脏水通道蛋白2和水通道蛋白4表达的影响

目的研究大黄总蒽醌对大鼠肾脏水通道蛋白（AQP）2、AQP4表达的影响及探讨大黄利尿机制。方法32只SD大鼠随机分为正常对照组，大黄总蒽醌低、中、高剂量组，每组8只，分别给予不同剂量大黄总蒽醌灌胃，每天1次，共灌5d。第4天测定大鼠24h尿量，尿液Na^＋水平及尿渗透浓度。5d后处死大鼠，腹主动脉取血，进行血液生化指标检测；并留取肾脏，用免疫组化、Western印迹和RT—PCR法检测肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达变化。结果与正常对照组比较，大黄总蒽醌中、高剂量组大鼠24h尿量显著增加[（16．21±1．96）ml、（18．16±1．80）ml比（13．85±1．25）ml，P均〈0．05]，低剂量组大鼠尿量变化不明显；中、高剂量组大鼠肾脏AQP2蛋白及mRNA表达均显著下降（P均〈0．01），高剂量组大鼠肾脏AQP4蛋白及mRNA表达显著下降（P〈0．01）；中剂量组大鼠AQP4蛋白表达下降（P〈0．01），但mRNA表达无显著降低；低剂量组大鼠AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达无显著变化。结论大黄总蒽醌能降低大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达水平，这可能是大黄产生利尿的机制之一。

内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对脐血造血干/祖细胞增殖和植入的影响

目的 探讨内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对脐血造血干/祖细胞增殖和植入的影响.方法 诱导、表达及纯化内皮细胞靶向的可溶性hD1R融合蛋白.以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为支持细胞,联合应用5种人源性生长因子SCF、TPO、FL、IL-6、IL-3及hD1R蛋白,与人脐血CD34＋细胞共培养,分析在PBS组（PBS代替hD1R）、hD1R组、sup组（HUVEC上清代替HUVEC）、fix组（被固定HUVEC代替HUVEC）、Day 0组（未培养的CD34＋细胞）5种不同培养条件下CD34＋细胞增殖、凋亡及细胞周期,并将培养后的细胞经尾静脉移植给亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠,12周后用流式细胞术分析人源性细胞在小鼠体内植入的情况.结果 hD1R组的培养条件对CD34＋细胞有最佳的扩增作用,hD1R组扩增的细胞是Day 0组的87.50倍,是PBS组的7.98倍.hD1R组扩增的细胞约77.0％处于G0/G1期,hD1R明显抑制细胞凋亡,促进细胞增殖.体内移植实验显示hD1R组扩增的细胞在小鼠体内有明显植入优势.结论 成功建立了基于Notch信号的体外扩增体系,hD1R蛋白促进脐血造血干/祖细胞体外增殖及体内植入.

腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备

目的 :MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因 ,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列 ,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX -T -easy ,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到 pGEX -4T -1载体中 ,构建融合表达载体pGEX -4T-MCPR1,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达 ,得到GST -MCPR1融合蛋白 ,进行初步纯化及SDS -PAGE电泳 ,直接割胶 ,将其作为抗原免疫兔子。结果 :成功构建融合表达载体pGEX -4T -MCPR1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白 ,免疫兔子 1个月后 ,获得免疫血清 ,初步纯化得到多克隆抗体。Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6。结论 :MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础 ,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用 ,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段。