SARI及PI3K/AKT通路分子在AML患者骨髓中的表达及其临床意义

目的:探讨SARI及PI3K/AKT通路分子在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者骨髓中的表达情况及其临床意义。方法:收集100例AML患者的骨髓标本,并以30例造血干细胞移植健康供者作为正常对照。分别采用qPCR和Western blot检测SARI及PI3K/AKT通路分子的mRNA及蛋白表达。结果:AML患者骨髓中SARI mRNA的表达低于正常对照(P<0.05),且初诊和复发组中SARI mRNA和蛋白表达量均低于缓解组(P<0.05)。ROC曲线分析显示当SARI mRNA的截断值为0.191时,诊断AML的AUC为0.705,灵敏度为70.0%,特异度为66.2%;SARI mRNA高表达组AML初诊患者的缓解率高于未缓解率(P<0.05),配对t检验分析显示同一AML患者其初诊阶段SARI mRNA表达明显低于缓解阶段(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示SARI mRNA高表达组AML患者总生存时间长于低表达组(P<0.05)。初诊和复发组中PI3K、AKT、mTOR、4EBP1 mRNA表达均高于缓解组(P<0.05);除p-AKT外,初诊和复发组中上述分子及对应的磷酸化分子p-PI3K、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表达均明显高于缓解组(P<0.05),且均与SARI蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论:SARI在AML骨髓中异常低表达,与患者疗效、预后密切相关,其机制涉及PI3K/AKT通路的激活。SARI可作为AML诊断、疗效与预后评估的新指标。

碲纳米片的制备及其在白血病体外治疗中的应用

目的:在水相中制备碲纳米片(Te NSs),并研究其在体外环境下对白血病细胞HL-60的杀伤作用。方法:通过液相剥离技术制备Te NSs,并通过X射线衍射仪(XRD)、透射电子显微镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)等技术对其进行表征,通过CCK-8实验、倒置显微镜以及Calcein/PI荧光染色等手段考察Te NSs对HL-60细胞增殖能力的影响。结果:成功合成Te NSs,TEM图像显示该纳米片的横向尺寸约为100 nm,AFM结果表明其厚度小于20 nm。细胞实验表明,Te NSs能够诱导HL-60细胞凋亡;0.81 g/L Te NSs与HL-60细胞共孵育24 h后,细胞致死率高达85.26%。结论:Te NSs作为一种新型纳米药物,能够有效杀伤白血病细胞,展现了良好的抗肿瘤效应,在白血病的体外治疗中表现出较大的潜能。

爱拉斯汀对急性髓系白血病细胞铁死亡的影响及其相关作用机制

目的探讨溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶3(LPCAT3)在爱拉斯汀(Erastin)诱导急性髓系白血病(AML)细胞铁死亡中的作用及其相关分子调控机制。方法四唑盐(MTS)法检测不同AML细胞对铁死亡经典诱导剂Erastin的敏感性,实时荧光定量PCR(qPCR)检测其LPCAT3 mRNA的基础表达水平,分析二者关联性。构建慢病毒介导的LPCAT3过表达AML细胞株(OE组)及阴性对照株(NC组)。在Erastin干预后,采用MTS、流式细胞术及微量法分别检测细胞活力、脂质活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)。qPCR和Western blot检测未折叠蛋白反应(UPR)经典通路信号分子(PERK、ATF4、GRP78等)的表达水平。采用UPR抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)联合干预后检测上述铁死亡相关指标,分析调控关系。结果4种不同AML细胞对铁死亡敏感性不同,其中K562细胞相对不敏感,4种AML细胞对Erastin的IC50与LPCAT3表达水平呈负相关(r=-0.919,P<0.001)。Erastin干预后,与NC组相比,OE组K562细胞的细胞活力被Erastin抑制(P<0.001),脂质ROS与MDA水平增加(P<0.001);qPCR、Western blot检测结果显示,与NC组相比,OE组中UPR经典通路分子PERK、ATF4、GRP78 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.01);通过4-PBA抑制UPR通路后,与未抑制状态相比,K562细胞活力下降(P<0.01),脂质ROS与MDA水平升高(P<0.01)。结论过表达LPCAT3可促进K562细胞铁死亡,且其激活的UPR经典通路PERK/ATF负向调控该过程。

miR-483-3p在急性髓系白血病患者中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨急性髓系白血病(AML)中miR-483-3p的表达及意义,研究其对AML细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR分析miR-483-3p在30例AML患者外周血单个核细胞中的表达水平,分析其与临床特征的关系。分别转染mimic和anti-miR质粒过表达及敲低AML细胞系Kasumi-1中miR-483-3p的表达,应用MTS法检测Kasumi-1细胞增殖能力变化,流式细胞术和Western blot联合分析Kasumi-1细胞凋亡水平变化。结果与正常组相比,miR-483-3p在初诊AML患者外周血单个核细胞中表达明显下调(P<0.05),miR-483-3p表达水平的高低与AML患者的年龄、性别、外周血WBC、HGB、PLT数量以及骨髓原始细胞比例、FAB分型等临床特征均无关系。过表达miR-483-3p可显著抑制Kasumi-1细胞增殖,并促进其凋亡;而敲减miR-483-3p则可显著促进其增殖,并抑制其凋亡。结论miR-483-3p在AML中发挥抑癌基因作用,并参与AML发生、发展,可作为AML潜在的标志物及新靶点。