奥氮平诱导雄性大鼠产生胰岛素抵抗的机制研究

目的探讨奥氮平诱导雄性Sprague Dawley(SD)大鼠产生胰岛素抵抗的机制。方法将20只雄性SD大鼠随机分为对照组和奥氮平组,每组10只;奥氮平组大鼠每日给予1.5 mg·kg^-1奥氮平灌胃,对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃,连续8周。于给药前及给药后第1~8周测2组大鼠空腹血糖(FBG),并记录大鼠体质量。给药后2、4、6、8周取大鼠尾静脉血,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血浆胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);给药后第8周,行口服糖耐量实验(OGTT);并于给药后第8周末取大鼠白色脂肪组织及大脑前额叶皮质,Western blot法检测2组大鼠白色脂肪组织中早期生长反应因子-1(Egr-1)、香叶基香叶基二磷酸合成酶(GGPPS)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达水平,ELISA检测2组大鼠白色脂肪组织及大脑前额叶皮质中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果给药前2组大鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);给药后第1~8周,2组大鼠体质量均呈稳定上升,但2组大鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药前及给药后1~2周,2组大鼠FBG比较差异无统计学意义(P>0.05);给药后3~8周,奥氮平组大鼠FBG高于对照组(P<0.05);给药后第2、4、6、8周,奥氮平组大鼠胰岛素水平、HOMA-IR高于对照组(P<0.05)。奥氮平组和对照组大鼠OGTT曲线下面积分别为932.4±51.5和762.8±90.7,奥氮平组大鼠OGTT曲线下面积大于对照组(P<0.05);奥氮平组大鼠白色脂肪组织中Egr-1、GGPPS、IRS-1蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。奥氮平组大鼠白色脂肪组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平高于对照组(P<0.05)。2组大鼠大脑前额叶皮质中TNF-α、IL-1β和IL-6水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论奥氮平可诱导雄性SD大鼠产生胰岛素抵抗,且胰岛素抵抗的形成可能与白色脂肪组织中Egr-1、GGPPS、IRS-1和炎性因子水平显著增高有关。

Npc1基因突变引起脂质代谢异常从而诱导肾脏细胞凋亡并促进纤维化

目的:研究Npc1基因突变小鼠肾脏细胞及组织功能异常情况,为C1型尼曼-匹克病(NPC1)患者的治疗提供借鉴。方法:取出生后60 d的Npc1^-/-与Npc1^+/+小鼠,HE染色检测肾脏组织形态变化;油红O染色检测肾脏组织中脂质代谢变化;TUNEL染色检测肾脏细胞凋亡情况;Western blot检测肾脏组织中凋亡相关蛋白的表达变化;免疫荧光检测肾脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(vimentin)的表达变化。结果:形态学观察表明,与Npc1^+/+小鼠相比,Npc1^-/-组小鼠肾组织出现明显空泡,且无脂质沉积;随后,TUNEL染色结果显示Npc1^-/-小鼠肾脏中凋亡细胞数量显著增多(P<0.01),并且凋亡相关蛋白Bax和Bad表达水平显著增高(P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著下降(P<0.05);免疫荧光检测显示Npc1^-/-小鼠肾脏组织中α-SMA及vimentin染色阳性区域强度及面积均显著提高(P<0.01)。结论:Npc1基因突变可引起小鼠肾脏结构变化及细胞脂质代谢异常,从而诱导肾脏细胞凋亡并促进肾脏组织纤维化。

C1型尼曼-匹克病小鼠肝脏功能及病理变化

目的探讨晚期(P60)Npc1^(-/-)小鼠肝脏功能和病理变化,为C1型尼曼-匹克病(NPC1)患者肝脏的病理发生及临床治疗提供实验依据。方法小鼠称重后,眼内眦取血检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性变化,评价Npc1^(-/-)小鼠的肝功能变化;取肝组织进行石蜡和冷冻切片,通过HE染色和油红O染色评估肝脏组织的形态变化和脂肪储存情况,以及Masson染色评估肝脏组织胶原沉积情况;Real-time PCR和Western blotting分别检测肝脏组织促炎症因子,白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA和蛋白水平表达情况;TUNEL染色评估肝脏组织凋亡情况。结果与Npc1^(+/+)小鼠相比,Npc1^(-/-)小鼠的体重及肝脏系数显著降低(P<0.001);LDH、ALT及AST活性显著升高(P<0.001);HE染色发现,Npc1^(-/-)小鼠肝脏组织形态改变明显,出现大量泡沫细胞;油红O染色显示,Npc1^(-/-)小鼠肝脏脂肪含量显著降低;Real-time PCR显示,Npc1^(-/-)小鼠肝脏组织IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著升高(P<0.01,P<0.05和P<0.001),同时,Western blotting也显示,3个因子的蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.05和P<0.01),证实Npc1^(-/-)小鼠肝脏晚期发生炎症反应;Masson染色未发现Npc1^(-/-)小鼠肝脏纤维化的发生;TUNEL染色显示,Npc1^(-/-)小鼠肝脏组织凋亡细胞数量增加。结论 Npc1基因突变导致肝脏组织形态发生改变,大量的巨噬细胞聚集引发炎症反应,而炎症反应的发生可能是引起肝脏细胞凋亡和肝功能受损的重要途径之一。

C1型尼曼-匹克氏症小鼠免疫系统功能异常初步研究

目的探讨Ⅳpcl基因突变型（Npcl^-/-）和野生型（Npcl^＋/＋）小鼠免疫系统差异，从免疫学角度完善对C1型尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease type C1，NPCI）发病机制的研究，为人NPCI疾病的治疗提供重要支持。方法分别测量不同时间节点Npc1^-/-与Npcl^＋/＋小鼠体重、胸腺及脾脏重量，计算胸腺与脾脏指数；血常规检测小鼠外周血白细胞数量；qPCR检测小鼠外周血白细胞细胞因子表达：流式细胞术检测小鼠外周血与脾脏中CD4^＋、CD8^＋和CDl9^＋淋巴细胞比例；免疫荧光及β-半乳糖苷酶染色检测小鼠脾脏的凋亡与衰老。结果与野生型小鼠相比，Day14±2时Npcl^-/-小鼠脾脏和胸腺重量差异无统计学意义，Day42±2时，Npc1^-/-小鼠脾脏重量显著增加，而胸腺重量却显著降低，至Day63±2时，脾脏重量显著降低；其次，Day42±＋2时Npc1^-/-小鼠中性粒细胞数量的显著增加，淋巴细胞绝对数量虽与野生型小鼠相比差异无统计学意义，但所占百分比显著降低；其次，Day42±2时Npc1^-/-小鼠血液白细胞中细胞因子（IL-1、IL-2、IFN-γ、TNFα、IL-4、GA及GB）的基因表达与野生型小鼠相比具有明显异常；进一步，流式细胞术检测发现，Day42±2时Npc1^-/-小鼠无论在血液还是脾脏中，T（CD4^＋和CD8^＋）淋巴细胞数量较野生型小鼠显著减少，而B（CDl9^＋）淋巴细胞却显著增多；最终，通过对小鼠脾脏组织的凋亡和衰老染色发现，Day63±2时Npc1^-/-小鼠脾脏细胞凋亡和衰老明显。结论Npc1基因突变引起的脂质代谢异常，导致Npc1^-/-小鼠在其生长过程中免疫系统及功能活性与野生型小鼠存在明显异常。该结果可为NPCI患者在临床上的用药与治疗提供借鉴，最大限度地改善患者生活质量并延长患者生存时间。

C1型尼曼–匹克病小鼠雄性不育的睾丸病理研究

该文主要研究C1型尼曼–匹克病小鼠(Npc1–/–小鼠)雄性不育的睾丸病理变化,并进一步探讨Npc1基因对雄性不育的影响。随机选取P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠各12只,观察隐睾发生率;然后,随机选取P20、P40和P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠睾丸组织,统计睾丸重量并计算睾丸指数, HE染色观察生殖细胞层数并测量生精小管直径, PAS糖原染色观察生殖细胞周期并统计精母细胞在总细胞数中的相对百分比,油红O染色观察间质细胞的脂质存储;最后,随机选择P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠睾丸,通过TUNEL染色观察生殖细胞凋亡,并通过Western blot检测凋亡蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、p53、Bax和Bcl-2的表达水平。结果显示,与Npc1+/+雄鼠相比, Npc1–/–雄鼠均有隐睾发生,睾丸重量和睾丸指数均显著降低(P<0.05, P<0.001),生殖细胞层数不明显,生精小管管径显著减小(P<0.001),生精周期不规律且精母细胞数量显著减少(P<0.001),间质细胞的脂质存储显著减少(P<0.001);生殖细胞凋亡大幅增加(P<0.001), Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、p53、Bax表达量显著升高(P<0.001),Bax/Bcl-2比率显著升高(P<0.001)。该文结果提示, Npc1基因突变导致隐睾、睾丸结构异常、间质细胞脂质储存减少及生殖细胞凋亡,因此, Npc1基因可能成为研究男性不育的新靶点。