牛CART基因启动子片段重组载体构建

[目的]构建以及鉴定可卡因—苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine regulated transcript peptides,CART)基因启动子片段双荧光素酶报告载体,为后续筛选CART基因核心启动子奠定试验基础。[方法]美国国家生物技术信息中心(national center for biotechnology information,NCBI)基因数据库(登录号:NC_037347.1)获取牛CART基因序列,经聚合酶链式反应(PCR)扩增启动子片段,经双酶切后连接pGL3-Basic载体。将pGL3-1222载体、pGL3-Control载体和pRL-TK载体转染293T细胞,检测细胞相对荧光活性。[结果]pGL3-1222载体测序结果显示与目标序列一致,证明载体构建成功;转染293T细胞后,细胞状态良好且绿色荧光分布均匀、强度适中,则转染操作无误;检测相对荧光活性显示pGL3-1222组相对荧光活性显著高于pGL3-Basic,则证明CART基因启动子片段具有活性。[结论]CART基因启动子-1200 bp—+22 bp区域双荧光素酶载体构建成功。