Calpain在卡铂引起的耳蜗Ⅰ型传入神经系统损害中的作用

目的研究观察Ｃａｌｐａｉｎ在灰鼠耳蜗内的定位及其注射卡铂后不同时间的表现。方法应用免疫细胞化学方法在透射电镜下观察卡铂引起的耳蜗毛细胞及其传入神经系统中 Ｃａｌｐａｉｎ的活动变化。结果发现卡铂首先损坏耳蜗Ⅰ型传入神经的树突并伴有 Ｃａｌｐａｉｎ的破坏活动。结论卡铂引起的耳蜗 Ｉ型传入神经系统的早期破坏可能是由于细胞内形成的高钙浓度激活了Ｃａｌｐａｉｎ的活性，由此导致了Ｉ型传入神经原的蛋白质水解变性。

速尿引起的小鼠耳蜗血管纹缺血缺氧性病变

目的观察腹腔注射速尿引起的小鼠耳蜗血管纹缺血缺氧病变过程,探讨速尿破坏蜗管外壁开放血-迷路屏障的最佳时机。方法选择42只听力正常的健康CBA小鼠用于本实验。其中24只小鼠被平均分为3组,全麻下分别按照每公斤体重400毫克或200毫克或100毫克的剂量腹腔注射速尿,同时监测注射速尿前后的听性脑干反应的变化,在用药后1周终止实验并记录各组动物的存活数量,以确定不同剂量速尿对听觉功能的影响及其安全性。另外18只小鼠被平均分为6组,分别在注射速尿前和注射速尿后10分钟,30分钟,1小时,3小时和6小时随机处死3只小鼠,用于观察腹腔注射速尿后引起的血管纹缺血缺氧性病理改变过程。受试动物的一侧耳蜗制作成全耳蜗螺旋韧带铺片并用伊红染色,观察血管纹毛细血管内的红血球充盈情况以评估血管纹的供血在注射速尿后不同时间的缺血程度,另一侧耳蜗用环氧树脂法包埋后切片,观察血管纹上皮细胞因组织缺血缺氧而引起的病理学改变。结果按照每公斤体重400毫克的剂量腹腔注射速尿引起的小鼠死亡率约为75%,按照每公斤体重100毫克剂量腹腔注射速尿引起的小鼠听性脑干反应仅发生短时间的中等程度阈移,而按照每公斤体重200毫克剂量腹腔注射速尿的小鼠死亡率小于15%,但可造成较长时间的严重耳聋,因此按照每公斤体重200毫克的剂量腹腔注射速尿是实现小鼠暂时性耳聋的安全有效剂量。耳蜗螺旋韧带铺片结果显示按照每公斤体重200毫克的剂量腹腔速尿注射后10分钟即开始发生供血减少;用药后30分钟和1小时,血管纹呈现许多空血管;用药后3小时,毛细血管内的红细胞数量开始有所增加;但直到用药后6小时仍未完全恢复。血管纹切片结果显示,用药后10分钟,血管纹上皮细胞已经开始因缺氧而发生肿胀;用药后30分钟和1小时,血管纹细胞内出现许多空泡;用药后3小时和6小时,血管纹上皮细胞的积水肿胀仍然十分严重。结论腹腔注射速尿后可在数分钟内阻断供应耳蜗外侧壁的血流,血管纹的供血在用药后6小时逐渐趋向于恢复,但因缺血引起的血管纹细胞缺氧性肿胀和破坏还可持续一段更长的时间。从腹腔注射速尿后1小时至少到6小时可能都是蜗管外壁血-迷路屏障因缺氧变性而暂时性开放的重要时机。

卡铂导致毛细胞及其传出神经损害的耳蜗分析图

目的：介绍一种同时评估耳蜗传出神经和毛细胞的简便的组织化学技术。方法：首先应用脱氢酶染色选择性标记毛细胞，再用乙酰胆碱酯酶染色标记传出神经纤维。双重染色的耳蜗铺片样品在光学显微镜下沿着耳蜗基底膜的全长分别对毛细胞和穿越Ｃｏｒｔｉ隧道的传出神经纤维计数；根据卡铂耳中毒灰鼠的毛细胞及其传出神经纤维损伤的百分比制备耳蜗图。结果：耳蜗分析图充分显示：当绝大多数内毛细胞坏死以及部分外毛细胞坏死时，穿越隧道的传出神经纤维数的减少接近于外毛细胞损失的百分比；但当大量内毛细胞坏死而外毛细胞正常时，穿越隧道的传出神经纤维亦保持正常。结论：卡铂损害耳蜗传出神经系统可能是由于外毛细胞受损所致。