多种基质金属蛋白酶在高氧所致急性肺损伤中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶(MMPs)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在高氧所致急性肺损伤(ALI)发病中的作用。方法72只小鼠按随机数字表法分为正常对照组和高氧24、48、72h组,每组18只。高氧组小鼠置于密闭的氧气室,暴露于体积分数>98%的高氧;正常对照组小鼠呼吸室内空气作为对照组。分别于24、48和72h活杀高氧组小鼠,取肺评价肺损伤程度;逆转录聚合酶链反应(RT PCR)及免疫组化法测定肺组织MMP2、MMP9及EMMPRIN的mRNA和蛋白表达及组织分布。结果高氧能引起ALI。RT PCR结果显示,高氧组动物肺组织MMP2、MMP9及EMMPRIN的mRNA表达均增高;免疫组化研究显示,MMP2和MMP9蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和炎性细胞的胞浆中,EMMPRIN蛋白则主要表达于上述细胞胞浆和细胞膜上;它们在气道上皮细胞中的表达在高氧环境下明显升高。结论高氧能引起ALI,伴MMP2、MMP9和EMMPRIN的表达增高,MMPs通过降解细胞外基质从而在高氧所致ALI过程中发挥重要作用。

DNA双链断裂修复过程中的重要蛋白53BP

DNA双链断裂(double-strand breaks,DSBs)修复对于保证基因组完整性以及维持细胞的平衡稳定性起着关键作用。p53结合蛋白1(p53-binding protein 1,53BP1)是针对产生的双链断裂损伤做出反应的重要调控因子。目前,研究人员对于53BP1被招募到受损的染色质上的过程,以及53BP1在DSBs修复过程中阻止同源重组(homologous recombination,HR)的同时推动非同源末端连接(non-homologous end-joining,NHEJ)的过程,已经有了新的认识。并且,近期的研究结果启发科学家们提出了一种新的模型,即53BP1的招募需要直接识别DSBs特异性的组蛋白密码,而53BP1发挥作用时的通路选择则与BRCA1蛋白的拮抗作用有关。结合近年来有关53BP1的研究进展,主要综述了53BP1的结构与功能特点,其作为调控因子在DSBs修复过程中发挥的作用,以及53BP1达到有效聚集的方式。

基质金属蛋白酶-2／9及其组织抑制剂比例失衡在高氧所致急性肺损伤中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶-2／9（MMP-2／9）及其组织抑制剂（TIMP-1／2）在高氧所致急性肺损伤（ALI）发病过程中的作用。方法将54只小鼠置于含体积分数大于98％氧气的密闭室中，以18只呼吸正常空气的小鼠作为对照组。分别于暴露24、48和72h活杀各组小鼠，取肺组织标本，测定肺湿／干重（W／D）比值、支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量及胸腔积液，以评价肺损伤程度。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定肺组织MMP-2／9和TIMP-1／2的mRNA表达；用酶联免疫吸附法（ELLSA）测定BALF中MMP-2／9及TIMP1／2的蛋白含量。结果高氧能引起ALI，各实验组的肺W／D比值、BALF中蛋白浓度及胸腔积液均明显高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。RT—PCR结果显示，高氧组肺组织MMP-2／9及TIMP-1的mRNA表达均较对照组明显增高（P〈0．05或P〈0．01），TIMP-2 mRNA表达无明显变化；MMP-2／TIMP-2的mRNA比值在高氧组中均明显升高（P均〈0．01）。ELISA结果显示，高氧组BALF中MMP-2／9和TIMP-1蛋白含量较对照组明显升高（P〈0．05或P〈0．01），而TIMP-2蛋白含量同样无明显变化；MMP-2／TIMP-2的蛋白比值在高氧组中也明显升高（P均〈0．01）。结论高氧能引起ALI伴MMP-2／9和TIMP-1的表达增高，而MMP-2／TIMP-2平衡失调导致细胞外基质降解在奠发生过程中起重要作用。

基质金属蛋白酶 2 ,9在高氧所致急性肺损伤实验中的表达(英文)

目的 探讨基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP - 2 ,MMP - 9)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用。方法将 5 4只小鼠置于密闭的氧气室暴露于 >95 %的高氧 ,另取18只小鼠置于呼吸室内 (空气 )作为对照组。分别于 2 4 ,4 8和 72h取出小鼠评价肺损伤程度 ,以基质金属蛋白酶谱分析调查支气管肺泡灌洗液中MMP - 2及MMP - 9的释放及活性。逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)及免疫组织化学法测定肺组织MMP - 2及MMP - 9的表达及组织分布。结果 高氧能引起急性肺损伤伴支气管肺泡灌洗液MMP -2及MMP - 9释放及活性增加 ,RT -PCR结果显示高氧组动物肺组织MMP - 2及MMP - 9的mRNA表达增高 ,免疫组织化学研究显示MMP - 2和MMP - 9蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和炎性细胞的胞浆中 ,它们在气道上皮细胞的表达在高氧环境下明显升高。结论 基质金属蛋白酶 2 。

高氧所致小鼠急性肺损伤时一氧化氮合成酶的表达(英文)

目的 探讨一氧化氮合成酶 (INOS ,eNOS)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用。方法 将 5 4只小鼠置于密闭的氧气室暴露于 >95 %的高氧 ,另 18只小鼠呼吸正常空气作为对照组 ;分别于 2 4、 4 8h和 72h取出小鼠 ,评价肺损伤程度同时进行支气管肺泡灌洗液细胞分类和计数 ;免疫组织化学测定肺组织iNOS和eNOS的表达及组织分布。结果 高氧能引起急性肺损伤伴支气管肺汽灌洗液细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞数均明显增加 ;免疫组织化学研究显示iNOS和eNOS蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和巨噬细胞的胞浆中 ,它们在气道上皮细胞的表达在高氧环境下明显升高。结论 在高氧环境下一氧化氮合成酶通过促进肺组织中一氧化氮合成从而在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用。

高氧所致急性肺损伤小鼠肺组织细胞凋亡和坏死的研究

目的 观察吸入高浓度氧所致急性肺损伤中细胞死亡方式 ,探讨细胞凋亡在急性肺损伤中所起的作用。方法 将 5 4只小鼠置于密闭的高浓度氧气室 (氧浓度 >98% ) ,另 18只小鼠呼吸正常空气作为对照组 ;分别于 2 4、4 8和 72h取出小鼠评价肺损伤及气道上皮脱落程度 ;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法 (TUNEL)检测损伤的肺组织中细胞凋亡的发生程度 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组织化学测定肺组织中caspase 3的表达及组织分布。 结果 高氧能引起急性肺损伤 ,伴部分支气管上皮从基底膜分离甚至脱落 ;TUNEL分析显示当暴露于高氧 4 8h后 ,支气管上皮细胞及肺泡上皮细胞凋亡指数分别为 0 5 1± 0 10和 0 4 6± 0 0 8,较对照组 (0 0 4±0 0 2 ,0 0 2± 0 0 1)显著增加 (P均 <0 0 1) ;RT PCR结果显示caspase 3mRNA表达量在暴露于高氧4 8h后达 0 5 3± 0 0 9,较对照组 (0 34± 0 0 7)显著增加 (P <0 0 5 ) ,72h达最高 (0 6 0± 0 0 8) ;免疫组织化学研究结果显示在损伤的肺组织中 ,caspase 3蛋白表达于气道上皮细胞、肺泡上皮细胞和巨噬细胞的胞浆及细胞核中 ,caspase 3蛋白在气道上皮细胞的表达在高氧环境下 2 4h达 4 1 6 2± 3 4 6 ,较对照组 (15 86± 1 84 )显著升高

骨桥蛋白在高氧所致急性肺损伤中的作用及机制的初步探讨

目的探讨骨桥蛋白(OPN)在高氧所致小鼠急性肺损伤(ALI)发病过程中的作用及其机制。方法将72只OPN基因野生型(OPN+/+)小鼠随机分为正常对照组(WN组)、高氧24h组(WO1组)、高氧48h组(WO2组)、高氧72h组(WO3组),每组18只;将72只OPN基因缺失型(OPN-/-)小鼠随机分为正常对照组(DN组)、高氧24h组(DO1组)、高氧48h组(DO2组)、高氧72h组(DO3组),每组18只。正常对照小鼠呼吸室内空气,高氧小鼠置于密闭的氧气室(氧浓度>95%)。行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及分类,评价小鼠肺损伤程度;将OPN-/-、OPN+/+小鼠各20只暴露于高氧下纪录生存时间;明胶酶谱分析基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9的释放及活性;逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测OPN、MMP2、MMP9、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP1)和TIMP2mRNA的表达。结果DO3组小鼠肺损伤较WO3组更严重。OPN-/-小鼠生存期显著缩短(χ2=23.91、P<0.01)。DO3组小鼠BALF细胞总数[(72.2±22.3)×104/L]显著高于WO3组[(39.7±10.4)×104/L,P<0.05],其中中性粒细胞数增加近8倍[(207.54±36.45)×103/L,(25.33±6.43)×103/L,P<0.01]。明胶酶谱分析显示,DO3组小鼠BALF活化的MMP9表达[(4.36±0.65)×104]显著高于WO3组[(2.84±0.44)×104,P<0.01]。RT PCR显示,WO2、WO3组小鼠肺组织OPNmRNA表达(0.87±0.08、0.92±0.07)显著高于WN组(0.69±0.04,P均<0.05);WO3组小鼠TIMP1表达(1.09±0.12)显著高于DO3组(0.62±0.09,P<0.05);WO2、WO3组小鼠肺组织TIMP2mRNA表达(1.05±0.23、0.99±0.13)分别与DO2、DO3组比较差异均有统计学意义(0.59±0.11、0.75±0.16,P<0.01、<0.05)。结论OPN通过促进TIMP的表达而抑制MMP的释放和激活,从而减轻高氧所致的ALI。