人β-NGF基因在COS-7细胞中的表达及其生物学活性的研究

目的研究人β-神经生长因子(β-NGF)cDNA在真核细胞中的表达及其表达产物的活性。方法将质粒pGEM-β-NGF进行酶切并回收β-NGF cDNA片段，构建重组真核表达载体pcDNA3-β-NGF。利用脂质体Lipofectamine方法转染COS-7细胞，对阳性克隆COS-7细胞的mRNA和培养上清分别进行Northern blot分析和观察对PC12细胞突起生长的作用。结果β-NGF基因在COS-7细胞中获得表达。阳性克隆COS-7细胞培养上清能够促进PC12细胞突起生长。结论目的基因在COS-7细胞中成功表达β-NGF蛋白，并具有良好的生物学活性。

胸膜渗液中白细胞介素2及自然杀伤细胞毒因子活性的研究

采用核素掺入法及微量酶法检测２６例结核性和肿瘤性胸膜渗液中ＩＬ—２和自然杀伤细胞毒因子（ＮＫＣＦ）活性。结果表明：结核性胸膜渗液中ＩＬ—２、ＮＫＣＦ水平分别高于肿瘤性胸膜渗液。结核组病人胸膜渗液中，ＩＬ—２水平与ＮＫＣＦ杀伤活性呈线性正相关。

结核性与肿瘤性胸膜渗液中T淋巴细胞亚群分布比较研究

用单克隆抗体（ＯＫＴ３、ＯＫＴ４、ＯＫＴ５ ）经间接免疫荧光法分别检测１４例结核性胸膜炎及１２例肿瘤性胸膜炎患者胸腔积液中Ｔ淋巴细胞及其亚群。结果表明：结核性胸膜渗液中ＣＤ＋３、ＣＤ＋４Ｔ淋巴细胞群体均高于肿瘤性胸膜渗液，且后者ＣＤ＋４／ＣＤ＋４比率倒置。

结核性与肿瘤性胸腔积液IFN—γ活性的比较研究

用ｒ－干扰素（ＩＦＮ—ｒ）单克隆抗体经ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测结核性与肿瘤性胸膜炎胸腔积液２６例ＩＦＮ－ｒ含量。结果显示：结核性显著高于肿瘤性（Ｐ＜０．０１）。

人β-NGF基因的体外扩增、克隆及其序列的分析

目的 对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法 本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－ 神经生长因子（β－ ＮＧＦ）基因，并和Ｔ４ 载体相连接，经筛选得到人β－ ＮＧＦ克隆，并用Ｓａｎｇｅｒ 双脱氧末端终止法进行序列分析。结果 凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。

人脑神经生长因子的分离和纯化及其生物学活性的鉴定

人胎脑经离心、透析和离子交换纤维素层析等方法，分离纯化２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）。根据７ＳＮＧＦ和其活性亚单位β－ＮＧＦ的等电点的不同，分离得到２．５Ｓ的ＮＧＦ。用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电脉测得其分子量约１３．３。用等电聚焦电泳测得其等电点分别为９．０、９．２和９．３５。在ＰＣ１２细胞的培养过程中，加入ＮＧＦ的提取物可以促进ＰＣ１２细胞的突起生长。

人β-神经生长因子基因重组真核表达载体的构建

目的 构建 β 神经生长因子 (β NGF)基因重组真核表达载体 ,为 β NGF基因治疗和临床实验诊断研究打下良好的基础。方法 将质粒PGEM β NGF进行酶切获得 β NGF基因片段 ,用T4连接酶将其插入真核表达载体PcDNA3;以T7、P2为引物进行PCR ,论证插入片段的方向 ;经测序和酶切对插入片段进行分析和进一步鉴定。结果 PCR产物琼脂糖电泳结果显示 :在预期位置有阳性条带 ;序列分析和酶切结果证实插入片段序列正确。结论 β NGF基因重组真核表达载体PcDNA3 β NGF构建成功 ,为进一步开展 β NGF基因治疗神经系统疾病和临床实验诊断奠定了基础。

低剂量照射对LAK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的影响

作者采用３Ｈ－ＴｄＲ释放实验，观察了低剂量γ射线照射对ＬＡＫ细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的影响。来自健康献血员的外周血淋巴细胞，用重组白介素２培养９６小时获取ＬＡＫ效应细胞，在细胞培养的不同时期（分别为２４，４８，７２小时）给予培养中的细胞一次不同剂量（分别为０．６６，１．３１，２．６２，５．２４ｍＧｙ）的γ射线照射。实验显示低剂量照射能够提高ＬＡＫ细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的细胞毒活性，细胞培养７２小时给予照射的实验组细胞毒活性提高最为显著，与对照组相比有统计学差异。基于本实验结果，我们认为低剂量照射对ＬＡＫ细胞的杀伤活性具有辐射刺激作用。

胸膜渗液中IFN-γ、IL-2及NKCF活性的研究

有实验证明，结核性胸膜炎是研究局部细胞免疫的一个很好模型。因在结核性胸膜液中有多种免疫细胞聚集，势必也含有许多与免疫有关的细胞因子。本文对１４例结核性胸膜炎及１２例肿瘤性胸腔积液病人胸膜渗液中的细胞免疫成分进行了研究。测定其主要细胞因子的含量，以比较迟发型变态反应性的结核性胸水与免疫反应减弱的肿瘤性胸水中细胞因子含量的异同，进一步阐明两种疾病局部免疫的不同机制。我们所研究的细胞因子有γ-干扰素（ＩＦＮ-γ）、白细胞介素２（ＩＬ-２）和自然杀伤细胞毒因子（ＮＫＣＦ）。结果显示：结核性胸膜液中ＩＦＮ-γ、ＩＬ-２及ＮＫＣＦ活性均比肿瘤性渗液为高，以ＩＦＮ-γ含量为最高。