CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中的机制研究

目的:通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法:体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞,AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线,流式细胞仪检测扩增后细胞表型;采用Alex488染料标记siRNA,通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率;实时定量PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测CTLA4在蛋白水平的变化;混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后,T调节细胞的功能变化。结果:经过4周体外扩增,T调节细胞能够增长约1 200倍,并具有高活率和高纯度;siRNA的转染效率为61.8%±4.5%;Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降,其结果与对照组相比差异显著(P<0.05);混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖,Treg细胞能够抑制这种增殖,但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步,在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答,而si CTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论:CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用,这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg细胞CTLA4的表达,影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。

采用Edmonton免疫抑制方案的成人胰岛移植治疗1型糖尿病八例

目的探讨成人胰岛移植治疗1型糖尿病的临床效果。方法为8例1型糖尿病患者施行胰岛移植,供胰来自于成人尸体,消化、分离获得的胰岛培养过夜,然后经动脉插管输注至肝固有动脉,每例输注胰岛数为(8415±757)胰岛当量/kg。其中3例接受1个供者的胰岛移植,5例接受2个供者的胰岛移植(分2次进行)。8例患者中,除1例供、受者的ABO血型不同外,其余供、受者的ABO血型均相同。本组病例未行HLA配型。术后免疫抑制治疗采用Edmonton方案中的免疫抑制剂使用方法,即不使用类固醇激素,采用西罗莫司和他克莫司联用,并辅以5剂达利珠单抗。术后观察外源性胰岛素的使用量、血糖及血清C-肽的变化。结果移植后平均随访7.7个月,2例完全停用胰岛素,5例的胰岛素用量减少47%～90%,1例效果不明显,胰岛素用量仅减少21%。8例血糖从移植前的(10.6土3.9)mmol/L降至(6.6±1.3)mmol/L,控制更为平稳;糖化血红蛋白A_1从(11.9±1.6)%降至(5.9±1.2)%。移植有效者的血清C-肽基础值及葡萄糖刺激后C-肽水平分别由移植前的(0.054±0.076)nmol/L和(0.075±0.045)nmol/L升高至(0.620±0.080)nmol/L和(1.580±0.770)nmol/L。免疫抑制剂相关的并发症主要为白细胞减少(6例),减少或停用免疫抑制剂后白细胞可回升至正常,无大出血、门静脉栓塞或门静脉高压等并发症发生。结论经肝动脉输注成人胰岛治疗1型糖尿病具有一定的临床效果,采用Edmonton免疫抑制方案安全、有效。