医学检验专业应用型人才实践能力培养的探索

实践教学环节是培养和提升学生实践技能的载体,在本科教学中的重要性受到高度重视,医学检验专业教学是凸显综合性、技术性和实践性的特点。为了宽口径培养实用型高素质检验人才,各个高校的医学检验人士不懈努力,积极探索医学检验教学改革方法,寻求提高综合能力的新途径。

大学生群体中神经系统软体征和焦虑发生率的调查

目的试图研究大学生群体中神经系统软体征(NSS)和焦虑的发生率,探讨两者的相关性。方法随机抽样调查浙江绍兴文理学院300名大学生,对其进行NSS检查,并用焦虑自评量表同时检测焦虑发生情况。结果 300名(男女生各150名)调查对象中有焦虑的28名,有NSS的37名,同时存在NSS和焦虑的4名。NSS的发生率为12.33%,焦虑的发生率为9.33%。结论 NSS与焦虑发生在统计学上无相关性,且焦虑的发生率与性别无必然联系。

264例老年呼吸道感染病原菌分析

呼吸道感染是老年人最常见的疾病之一,其发病率和病死率都非常高,在临床治疗的过程中,相当多的医生并不按照常规进行病原菌检验,而是直接使用广谱抗生素,就增加了病原菌的耐药性,这样不但增加了老年呼吸道感染治疗难度,而且还增大了患者的经济负担。为了解老年呼吸道感染病原菌的种类及其耐药性。

TBL教学法在生物化学教学中的应用

基于团队的学习是美国教育学家Larry Michaelsen教授等在PBL基础上提出的一种以团队协作学习为特点的教学方法。在生物化学教学中应用TBL教学法有助于激发学生对生物化学的学习兴趣,提高学生的团队协作能力、自主学习能力和理论联系实践的应用能力。

甲型副伤寒杆菌重组蛋白OmpW的表达与鉴定

目的构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompW的原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpW免疫原性,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株ompW基因携带率。方法采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得ompW基因克隆并构建其原核表达系统,重组蛋白纯化后用SDS-PAGE及Western-Blotting分析。采用PCR检测95株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompW基因携带率。结果与报道的相关序列比较,所克隆的ompW基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。rOmpW免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带ompW基因。结论构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompW的原核表达系统,证明了ompW是存在于甲型副伤寒杆菌的序列保守、分布广泛的外膜蛋白基因,为进一步研究该蛋白作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原奠定基础。

市售奶粉亚硝酸盐添加剂的检测

目的检测并分析市售奶粉中亚硝酸盐添加剂水平。方法选取6种不同品牌的市售奶粉,采用亚铁氰化钾-乙酸锌去蛋白预处理的方法,去除奶粉中蛋白质等干扰物质,运用荧光分光光度法对亚硝酸盐水平进行测定,并与奶粉中亚硝酸盐水平的国家标准(2mg/kg)进行比较评价。结果 6种奶粉的亚硝酸盐水平均低于国家标准,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论所选6种市售奶粉的亚硝酸盐水平均未超标。

甲型副伤寒杆菌ompA基因分布及重组表达产物的免疫学鉴定

目的构建甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统，确定其重组表达产物rOmpA免疫原性和保护作用，检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。方法采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因，T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE和Bio—Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量，采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。采用小鼠感染模型，了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较，所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65％。rOmpA能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生免疫反应（Western blot），并可在家兔中诱导产生抗体。94．9％（93／98）甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因。100μg和200μg rOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41．7％（5／12）和58．3％（7／12）。rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1：5～1：40。结论ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛。rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用，可考虑为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。

甲型副伤寒杆菌nmpC基因原核表达及表达产物免疫保护作用

目的 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因nmpC的原核表达系统,确定其重组表达产物rNmpC免疫原性和保护作用,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.方法 采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得nmpC基因克隆并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rNmpC表达情况及其产量,采用免疫扩散法、Western blot和微量肥达试验鉴定其抗原性和免疫应答性.采用PCR和ELISA分别检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.采用小鼠感染模型了解rNmpC对甲型副伤寒杆菌致死性感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的nmpC基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rNmpC表达量约为细菌总蛋白的30%.rNmpC免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号.所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带nmpC基因并表达NmpC蛋白,但伤寒杆菌、乙型及丙型副伤寒杆菌未检出nmpC基因.100μg和200μgrNmpC对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%（5/12）和66.7%（8/12）.rNmpC免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清仅对甲型副伤寒杆菌H抗原产生1∶5～1∶40的凝集效价.结论 NmpC是甲型副伤寒杆菌独有的序列保守、分布广泛且自然表达的外膜蛋白抗原,该外膜蛋白具有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.

人单核-巨噬细胞和中性粒细胞杀灭问号钩端螺旋体能力差异及其机制

目的 了解人单核-巨噬细胞和中性粒细胞杀灭问号钩端螺旋体（简称钩体）能力差异及其机制.方法 人THP-1单核细胞和HL-60细胞分别用佛波酯（PMA）和全反式维甲酸（ATRA）预处理,使其分化为单核-巨噬细胞和中性粒细胞.采用激光共聚焦显微镜法检测问号钩体黄疸出血群赖型赖株感染THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞内总活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）水平和游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）变化.采用荧光分光光度法检测总ROS、NO抑制剂和胞内游离Ca2＋螯合剂（NAC、SMT和BAPTA/AM）作用前后THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞杀灭胞内问号钩体的能力及其差异.结果 THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞感染问号钩体后总ROS、NO水平和[Ca2＋]i均显著升高（P〈0.05）,但前者总ROS、NO水平和[Ca2＋]i显著高于后者（P〈0.05）.THP-1单核-巨噬细胞杀灭胞内问号钩体能力显著强于HL-60中性粒细胞（P〈0.05）.抑制胞内总ROS、NO和游离Ca2＋可导致THP-1单核-巨噬细胞杀灭胞内问号钩体能力显著下降（P〈0.05）,但对HL-60中性粒细胞无明显影响.结论 单核-巨噬细胞而非中性粒细胞是感染时清除问号钩体的主要吞噬细胞,高水平总ROS、NO和胞内游离Ca2＋与单核-巨噬细胞杀灭问号钩体能力密切相关.

基于幽门螺杆菌UreB优势抗原表位多抗原肽疫苗制备及其免疫保护作用

目的构建串联式幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527原核重组表达系统，制备UreB322和UreB527表位与多肽载体Poly—Asp．Lys的多抗原肽（MAP）疫苗并确定其免疫原性和免疫保护性。方法采用连接引物PCR构建含肠激酶（EK）位点的串联式UreB322和UreB527表位基因及其原核表达系统。表达的目的重组融合蛋白8×[rEK-UreB322-EK-UreB527-EK]经EK水解后用SephadexG-25柱分离rUreB322-EK和rUreB527-EK片段。采用碳二亚胺法将rUreB322-EK、rUreB527-EK与Poly．Asp—Lys载体分子交联，制备出多抗原肽疫苗MAP—rUreB322／B527。采用ELISA和Westernblot分别检测各重组表位肽及MAP-rUreB322／527的抗原性和免疫反应性。采用幽门螺杆菌SS1株感染BALB／c小鼠模型检测MAP—rUreB322／527免疫保护效果。结果获得了8次重复串联的UreB322和UreB527编码基因及其原核表达系统，目的融合蛋白8x[rEK—UreB322-EK—rUreB527-EK]表达量可达细菌总蛋白的48％。肠激酶可将目的融合蛋白完全水解为rUreB322-EK和rUreB527-EK片段。rUreB322-EK和rUreB527-EK与Poly—Asp-Lys交联率高达92．5％。幽门螺杆菌全菌抗体及rUreB．IgG均能识别rUreB322．EK、rUreB527．EK和MAP．rUreB322／527并与之结合。MAP．rUreB322／527免疫小鼠血清抗体水平明显高于rUreB（P〈0．05）。50或100p,gMAP—rUreB322／527对幽门螺杆菌SS1株感染小鼠的保护率（83．3％和91．7％）明显高于等量rUreB（41．7％和50．0％）（P〈0．05）。结论本研究成功地构建了幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527重复串联式编码基因及其原核表达系统，基于UreB优势抗原表位的多抗原肽疫苗MAP—rUreB322／527能显著提高免疫保护效果。

甲型副伤寒沙门菌spaO—ompA融合基因构建及其表达产物免疫保护作用

目的构建甲型副伤寒沙门菌spaO—ompA融合基因及其原核表达系统，确定重组表达产物rSpaO—OmpA免疫保护作用。方法采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因，构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE和Bio—Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO—OmpA表达情况及其产量。采用免疫扩散法、微量肥达和Westernblot法鉴定rSpaO—OmpA抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rSpaO—OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用，实验中采用重组表达的SpaO（rSpaO）及OmpA（rOmpA）作为对照。结果所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。所构建的原核表达系统EcoliBk21DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA。rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号，免疫家兔后可产生特异性抗体。100汕g或2006xgrSpaO—OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66．7％（8／12）和83．3％（10／12），明显高于等量rSpaO及rOmpA（P〈0．05）。rSpaO—OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1：5～1：40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO—OmpA免疫双扩散效价为1：1～1：16。结论人工融合重组抗原rSpaO—OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强。