麝香通心滴丸对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨麝香通心滴丸(STDP)对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用。方法建立心肌缺氧/复氧模型。将H9c2细胞分为5组:对照组(细胞正常培养,不做任何处理)、模型组、STDP组(在复氧前40 min给予STDP 50 mg/L)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在复氧前40 min给予3-MA 5 mmol/L)及STDP+3-MA组(在复氧前40 min分别给予STDP 50 mg/L及3-MA 5 mmol/L)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞存活率,并测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛及肌酸激酶水平。采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测信使RNA(mRNA)自噬相关基因Beclin-1、Atg5的表达水平,并通过Western-blotting检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3(BNIP3)、Beclin-1、Atg5的表达水平。结果各组细胞存活率比较,差异有统计学意义(F=85.893,P=0.028),且STDP组细胞存活率较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组细胞存活率均显著升高[(90±7)%、(63±5)%、(80±5)%、(81±6)%,P均<0.05]。各组细胞LDH、丙二醛、肌酸激酶水平,细胞凋亡率,Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=78.381、23.519、48.376、22.726、6.315、5.294、75.219、116.546、21.125、39.724、65.247,P均<0.05)。进一步两两比较发现,在STDP组细胞中,LDH[(92±6)、(194±13)、(195±11)、(192±10)μmol/L,P均<0.05]、丙二醛[(12.5±0.7)、(17.2±1.2)、(18.5±1.6)、(17.9±1.0)μmol/L,P均<0.05]、肌酸激酶[(19.9±1.0)、(34.3±2.2)、(35.3±2.2)、(34.8±2.5)μmol/L,P均<0.05]水平,细胞凋亡率[(5.8±0.8)%、(8.8±0.9)%、(7.6±0.7)%、(7.3±0.5)%,P均<0.05]较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组均明显降低;Beclin-1 mRNA、Atg5mRNA、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平较模型组均明显降低,而较3-MA组及STDP+3-MA组均显著升高(P均<0.05);HIF-1α蛋白表达水平较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组均明显升高(P均<0.05)。结论STDP可通过调控HIF-1α/BNIP3信号通路发挥对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。