维德维康推出食品安全快速检测新方案:荧光定量快速检测系统

中国有句古话叫＂民以食为天＂,食品安全是人类生存和社会发展最基本的一项生存条件。食品的安全关系到全人类的生存、延续,是人类的重要课题。近年来,频繁曝光的食品安全事件,使食品安全问题日益成为全社会关注的焦点,加强对食品安全的监控已成为政府和社会关注的重大问题,政府对食品安全监管的要求也越来越高。目前,食品中有害化合物主要来源于农药、兽药、霉菌毒素和非法添加物等的残留以及食品添加剂的滥用,这些有害化合物通过食物链的生物富集最终进入人体,从而引起人类急性食物中毒或慢性中毒的发生，导致细菌耐药性增强，甚罕引发“三致”（致突变、致畸、致癌）。

利用时间分辨荧光免疫层析法同时定量检测玉米中的伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)

建立了一种可同时定量检测玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的时间分辨荧光免疫层析方法。利用活化酯法制备时间分辨荧光微球和伏马毒素抗体的偶联物,将伏马毒素抗原包被到硝酸纤维素膜上作为T线,通过优化不同T线包被条数,最终建立伏马毒素竞争性免疫层析方法。并对所建立方法的灵敏度、特异性、准确度、精密度和与国标方法分析结果的相关性进行评价。包被两条T线建立的检测方法检出限为107.68~168.28μg/kg,定量限为283.46~444.63μg/kg;与伏马毒素B_(1)、伏马毒素B_(2)和伏马毒素B_(3)的交叉反应率分别为100%、85.59%和72.72%,与其它5种常见的真菌毒素均无明显交叉;加标回收率范围88.37%~117.42%,变异系数小于10%;该方法与国标方法GB 5009.240-2016中规定的免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)检测结果的符合度在92.17%~107.21%之间。建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法能满足对玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的现场快速定量检测。

牛奶中喹诺酮类药物残留的AlphaLISA检测方法的研究

本文旨在建立一种可检测牛奶中喹诺酮类药物(Quinolones,QNS)残留的均相光激化学发光免疫分析方法(Amplifiedluminescent proximity homogeneous assay linkedimmune sorbent assay,AlphaLISA)。采用EDC/NHS活泼酯法在诺氟沙星分子连接6-氨基己酸作为间隔臂,制备生物素修饰诺氟沙星半抗原(Biotin-6AS-NOR),并在受体微球上偶联QNS单克隆抗体,Biotin-6AS-NOR可与牛奶样品中的QNS竞争结合喹诺酮抗体;通过优化受体微球的QNS抗体偶联量,Biotin-6AS-NOR及供/受体微球的用量等参数,以及牛奶样品的稀释方案,建立了牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法。采用1:5牛奶样品稀释方案,所建立牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法的检出限和定量限分别为0.19 ng/mL和0.46 ng/mL,回收率在85.97%~110.11%之间,日内和日间变异系数均小于10%,与诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、达氟沙星和洛美沙星的交叉反应率均高于70%。本研究所建立AlphaLISA检测方法具有灵敏度和准确度高、重复性好等优点,且在整个检测过程中不需要繁琐洗涤操作,具有较高的应用和推广价值。

肉脯加工工艺及保藏研究进展

肉脯是中国特色传统小吃,在我国有着悠久的食用历史及丰富的营养价值,也是肉制品精深加工中不可或缺的品类。肉脯风味独特,便于保存携带,近年来深受市场的喜爱,围绕肉脯展开的创新工艺研究发展迅速,针对传统肉脯的品质改善与保藏研究也成为近年来的热点。该文综述了近年来国内外肉脯相关的文献,根据原料对肉脯进行分类,并总结了具有代表性的肉脯创新工艺、品质改善及保藏等方向的研究情况,为后续肉脯产品加工方向提供参考,尤其为延缓肉脯氧化研究方向提供理论依据。

同时检测牛奶中喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法研究

【目的】喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物,对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果,是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可能导致对人类健康的危害,因此,为了保护消费者的健康,研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。【方法】建立了同时检测牛奶中13种喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体按比例进行混合标记。同时,采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的pH值和抗体用量对灵敏度的影响,并对这两类药物抗原的包被条件进行选择确定。在此基础上研发出可同时检测牛奶中13种喹诺酮类药物和庆大霉素的胶体金快速检测试纸条,试纸条采用直接竞争法原理。【结果】该方法可同时检测恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氟甲喹、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、噁喹酸、麻保沙星、氟罗沙星、奥比沙星、达氟沙星和洛美沙星这13种喹诺酮类药物和庆大霉素,对其他喹诺酮类药物如:沙拉沙星、二氟沙星、司帕沙星、帕珠沙星等无交叉反应,同时对其他氨基糖苷类药物如:链霉素、新霉素、卡那霉素等也无交叉反应。该试纸条对牛奶中这13种喹诺酮类药物和庆大霉素的检测限均为20 ng·mL-1,完全满足国家对这两类药物的残留限量要求。牛奶样本直接检测,无需处理,整个检测过程5 min内完成。【结论】采用该方法和HPLC-MS/MS对60份牛奶盲样进行比对试验,阳性样品全部检出,同时筛选方法未出现假阳性和假阴性现象,二者的测定结果基本相符,表明该方法准确可靠,适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。实际操作过程中,可以采用胶体金免疫层析对样品进行现场快速初筛;筛选的疑似阳性样品,可以采用HPLC-MS/MS方法对样品中QNS和GEN的含量进一步确认。

一种检测奶样中布鲁氏菌抗体免疫层析方法的建立

通过制备脂多糖(LPS)并将其作为检测抗原,建立了一种检测奶样中布鲁氏菌抗体的酶联免疫层析方法。通过对处理方法和反应条件的优化,制备出敏感性高、特异性强的布鲁氏菌抗体检测试纸条。该试纸条敏感性为98.0%,抗体滴度为1:2~1:8,特异性为96.0%,且与其他常见病原无交叉反应,批内、批间重复性良好。保存期加速试验显示,该试纸条在2~30℃下可保存12个月;符合率验证显示,该方法与标准奶样的符合率达94.9%。上述结果表明,该检测方法具有敏感性高、特异性强以及方便、快捷等优点,适用于现场大批量检测,因而可应用于奶牛场布鲁氏菌病的快速诊断。

兽药制剂中氯霉素的ELISA检测方法的研究

为了检测兽药制剂中氯霉素的非法添加,优化反应条件和前处理方法,建立直接竞争ELISA方法。该方法检出限为1 mg/kg,添加回收率为81.00%~112.00%,批内和批间变异系数均小于10%,与国标仪器方法检测结果一致性好。本文建立的氯霉素直接竞争ELISA方法具有较高的精确度和稳定性,操作简单,检测时间短,可满足兽药制剂中氯霉素的检测。

牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立

为建立定量检测牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析方法,以羧基化铕微球作为荧光标记物,与阿维菌素鼠单克隆抗体G10703进行共价偶联后喷涂于释放垫上,将阿维菌素抗原和羊抗鼠免疫球蛋白G分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线(T)和质控线(C),制备免疫层析试纸条;利用牦牛肉样本阿维菌素添加量和对应的T线与C线荧光信号峰值比值(T/C)拟合得到四参数标准曲线,建立牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析检测方法,并对所建立方法的灵敏度、准确度、特异性、精密度和稳定性等进行评价,用液相色谱-串联质谱方法对所建立方法的性能进行确证。结果表明:本方法对牦牛肉中阿维菌素的定量限为1.0μg/kg,加标回收率为86.9%~105.2%,与阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素及依普菌素的交叉反应率分别为100.0%、73.1%、42.6%和97.5%,批内变异系数为5.4%~9.5%,批间变异系数为7.5%~11.2%,该方法准确度、精密度、灵敏度均较高,且性能稳定。

磺胺类药物广谱性多克隆抗体的制备

基于磺胺类药物(Sulfonamides,SAs)公共母环(对氨基苯磺酰胺)结构,合成了两种具有该结构的半抗原:2-(对氨基苯磺酸氨基)-4-噻唑乙酸(TS)和对氨基苯磺酰胺基苯甲酸(SS)。采用碳二亚胺法合成了免疫原和包被原,分别免疫10只新西兰大白兔,制备广谱性磺胺类药物抗体。应用间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清的灵敏度和特异性,发现所有兔子对TS-BSA和SS-BSA均产生较高效价和特异性。其中SS-1号和TS-6号兔的血清灵敏度最好,效价分别为1∶80 000和1∶160 000,对10种磺胺类药物均有不同程度的识别能力。SS-BSA组IC50为257.9～6 590.9ng/mL,而TS-BSA组IC50为12.9～586.1ng/mL。结果表明,具有磺胺母环结构的半抗原TS和SS,可以应用于广谱性磺胺类抗体的制备。通过10只兔子免疫试验证明,应用SS获得的血清具有较高的簇特异性、相似的亲和性,优于TS。

高灵敏度酶联免疫法快速检测动物源性产品中氯霉素残留的研究

本试验旨在应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测动物组织中氯霉素的残留。根据试剂盒操作说明对样本进行前处理,样品中的氯霉素与氯霉素酶结合物竞争结合酶标板微孔中固相化的氯霉素特异性抗体,根据酶催化显色剂显色的深浅来判断样品中氯霉素含量。试验结果显示,该方法对样品的检测限在0.1μg/kg以下;以20～300ng/kg浓度的氯霉素添加到动物源性产品中,其回收率范围74.4%～105.4%;变异系数在15%以下。结果表明建立的ELISA试剂盒能满足检测动物源性产品中氯霉素残留的需要。

青海牦牛肉中四环素药物残留时间分辨荧光免疫层析测定方法的研究

本研究通过用时间分辨荧光定量免疫层析法测定青海牦牛肉中四环素药物残留含量,建立起一种快速、简单、灵敏度高的四环素类药物残留含量快速检测方法。根据北京维德维康公司提供的时间分辨荧光免疫定量分析方法,对青海牦牛肉中四环素类药物残留进行测定,并对测定方法的灵敏度、准确度、精密度等进行评价,并将其与LC-MS/MS方法进行对比。本试验方法的定量限为10ug/kg,添加平均回收率80.0~120.0%之间,平均RSD值为11~15%,该方法可在30 min内完成样本的前处理,10 min完成定性定量检测。由此说明,时间分辨荧光免疫层析法操作简便,准确度、灵敏度均较高,可用于基层实验室对牦牛肉中四环素药物残留含量检测,具有较好的应用前景。

禽肉中氯霉素残留化学发光酶免疫分析方法的建立

研究旨在建立检测禽肉中氯霉素残留的化学发光酶免疫分析方法（CLEIA）;通过方阵法确定包被抗体及酶标抗原的浓度,建立了氯霉素直接竞争性CLEIA的标准曲线,用CLEIA与液相色谱串联方法（LC-MS/MS）检测禽肉中氯霉素的含量.结果表明,建立的检测鸡肉和鸭肉中氯霉素残留的CLEIA法,检测限分别为13.4 pg/g和12.8 pg/g,CLEIA法的回收率为74.7％～107.8％,变异系数为4.5％～11.5％,CLEIA和LC-MS/MS两种方法分析结果无显著性差异（P＞0.05）.

ELISA快速测定牛奶中阿维菌素前处理方法的建立

改进ELISA快速测定牛奶中阿维菌素的前处理方法,以改进后处理液作为标准品基质绘制标准曲线,IC50浓度值为1.9μg/L,与PBS缓冲液测定值相同;对牛奶中阿维菌素的检出限为2.0μg/L,对牛奶样品的加标回收率范围为75.8%-104.8%,批内、批间变异系数均未超过15.0%;以两种前处理方法对实际样品进行处理后检测,改进后处理方法检测结果更接近仪器方法检测值且与检测值相差不大,因此该试剂盒可满足相关残留检测国家标准,能满足我国市场和进出口食品检测需要。

时间分辨荧光免疫层析定量检测牦牛肉中喹诺酮类药物

目的:本研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的牦牛肉中喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、达氟沙星等)残留的荧光定量免疫层析检测方法。方法:将环丙沙星鼠单克隆抗体G10785与羧基化铕微球进行偶联标记,环丙沙星抗原和羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T)和控制线(C);根据T线荧光信号值与C线荧光信号值的比值(T/C)和样本中喹诺酮类药物浓度建立定量标准曲线;对所建立方法的灵敏度、准确度、精密度等进行评价,并将其与LC-MS/MS方法进行对比。结果:本研究所建立方法的定量限<0.96μg/kg,批内回收率为82.94%~111.27%,变异系数为4.13%~9.90%,批间回收率为88.86%~107.05%,变异系数为3.86%~9.39%。与环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、达氟沙星的交叉反应率分别为100%、77.36%、107.66%、93.55%和50.92%。结论:本研究所建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法准确度、精密度、灵敏度较高,性能稳定,具有良好的应用前景。

多功能食品安全综合快速现场检测仪设计

目的设计一种食品安全快速检测仪,实现多功能、高通量检测与数据采集传输一体化,提高食品安全现场检测效率。方法通过分析比色法、酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、胶体金试纸及相应仪器的工作原理,依据现场快速检测的实际需求,提出了基于分光光度法的单光束与多光束光路集成的仪器优化方案和一种基于图像处理技术的现场胶体金试纸自动快速检测方案。以MC9S12XS128单片机为控制核心,设计搭建了分光机构、胶体金试纸图像采集、试样容器、光电转换与信号调理电路等模块,实现了4通道和96通道ELISA的光路转换、信号采集与处理、试样载板控制、胶体金多元检测等功能。结果 ELISA检测模块光度准确度?T<1.403%,光度重复度δT<0.14%,通道间透光率差异小于0.97%;比色检测模块光度准确度?T<1.650%,光度重复度δT<0.50%;胶体金试纸自动读取模块,快检试纸的量化结果与真值的相关度r^2=0.84。结论 ELISA模块和比色法各项指标符合食品安全快速检测的应用要求,胶体金试纸自动读取模块量化结果与真值的相关度低于要求,需要继续进行算法和装置的优化。

大观霉素人工抗原的合成及其多克隆抗体制备

以大观霉素(SPE)、盐酸羧甲基羟胺(CMO)、乙二醇二环氧甘油醚(EDE)、牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)等为原料,采用活泼酯法和EDE双功能团活泼试剂方法分别合成2种免疫原和2种包被原。以免疫原免疫家兔制备多克隆抗体,以建立的间接ELISA方法来测定多克隆抗体效价及灵敏度。结果表明,免疫原SPE-CMO-BSA具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体经ELISA检测效价可达1∶160000,IC50为0.484ng/mL。本研究结果为下一步SPE残留快速检测试剂盒的研制奠定了基础。

牛奶及奶粉中三聚氰胺残留酶联免疫检测方法的研究

通过4,6-二氨基-2-氯-1,3,5-三嗪与对氨基苯丁酸反应获得三聚氰胺半抗原,再以活性酯法与载体蛋白偶联制备三聚氰胺免疫原或包被原。免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备出针对三聚氰胺的特异性单克隆抗体。采用间接竞争酶联免疫吸附法(ciELISA)建立检测三聚氰胺的标准曲线,线性范围是17.4～345.5ng/mL,50%抑制浓度(IC50)61.3ng/mL。牛奶和奶粉加标回收率在68.1%～91.0%,变异系数在2.4%～14.5%。结果表明,该方法可以满足牛奶和奶粉中三聚氰胺残留分析要求。

ELISA一步法快速检测牛奶中三聚氰胺的研究

在制备三聚氰胺单克隆抗体的基础上建立了一种用于检测牛奶中三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫检测方法,采用一步法操作,评估了方法的回收率、准确度、精密度和特异性,并利用液相色谱？串联质谱法进行了盲样确证试验。结果显示,该方法的线性检测范围为10~810 ng/mL,灵敏度为10 ng/mL,回收率为84.0%~90.0%,同类似物交叉反应率均小于0.1%。本试验建立的ELISA一步法能满足牛奶中三聚氰胺的检测要求。

生物样本中莱克多巴胺检测方法的研究进展

莱克多巴胺(ractopamine,RAC)是一种常用的β-兴奋剂,近年来,人们发展了许多方法检测其在食用动物中的残留情况,以期达到对其使用的有效监控。作者在介绍RAC基本理化性质和作用机理的基础上,论述了国内外检测生物样本中RAC的分析方法,并对这些方法的优缺点进行了分析,进一步说明无论仪器分析方法还是免疫分析方法都有其固有的特性和优缺点,彼此是无法完全替代的,并在此基础上,对未来RAC分析方法的发展方向进行了展望。

基于重组E^(rns)蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

为建立中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体间接ELISA方法,本研究对新疆地区多个发病牛场临床发病牛肛拭子提取总RNA,RT-PCR扩增BVDV-E^(rns)基因截短片段(681 bp),将该片段克隆于表达载体中,经大肠杆菌表达并纯化后作为ELISA包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。特异性试验显示该方法与牛其它常见5种病原阳性血清均无交叉反应。敏感性试验显示在阳性血清1∶1 600倍稀释时仍能够检出。重复性试验显示批内、批间变异系数均小于10%。与爱德士(IDEXX)商品化试剂盒相比较,总符合率较高。应用该方法对新疆地区2个散户牛场和3个规模化牛场的564份牛血清样品进行了检测,结果显示BVDV抗体阳性率分别为11.76%、13.04%、82.76%、77.96%、75.82%,表明BVDV感染在新疆部分地区已呈高发态势。该方法的建立对新疆地区BVDV的血清流行病学调查和养牛业的健康发展具有重要意义。