基于溶酶体钙离子通道TRPML1探讨罗哌卡因在诱导心肌细胞自噬性凋亡中的作用机制

目的:基于溶酶体钙离子通道瞬时受体电位粘脂素亚家族1(TRPML1)探讨罗哌卡因在诱导心肌细胞自噬性凋亡中的作用机制。方法:将H9c2心肌细胞分为对照组、ROP诱导组、罗哌卡因+TRPML1抑制剂(1.25μmol/L ML-SI1)、罗哌卡因+活性氧(ROS)清除剂(100μmol/L NAC)组。CCK-8检测各组细胞增殖活性;Annexin V-APC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测ROS含量和钙离子水平;免疫荧光双染LC3与LAMP-1,观察自噬小体与溶酶体膜蛋白的共定位情况;Western blot检测凋亡相关(Caspase-3、cleaved Caspase-3)、自噬相关(LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62)蛋白表达情况。结果:与对照组相比,罗哌卡因诱导组细胞增殖活性降低,细胞内ROS和钙离子含量升高(P<0.05);当TRPML1表达被抑制时,能够降低细胞内ROS和Ca^(2+)水平,同时减少自噬小体的蓄积,改善细胞凋亡。结论:局麻药罗哌卡因通过激活ROS/TRPML1途径致自噬流受阻,从而引起ROS、Ca^(2+)和自噬小体的过度累积,导致心肌细胞出现凋亡。