miRNA-3679抑制下游ZADH2-靶基因促进肝癌细胞增殖的机制研究

目的 寻找miRNA-3679与肝癌细胞系之间的关系,并验证其下游靶基因。方法 通过PCR检测miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达,使用ENCORI、miRDB、TargetScan数据库预测miRNA-3679的下游靶基因;通过qPCR检测(空白对照组、转染组及转染阴性对照组)转染靶基因表达水平确定靶基因为含锌结合醇脱氢酶结构域-2(ZADH2);Western blot检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2蛋白表达;EdU染色检测转染miRNA-3679抑制剂及同时转染miRNA-3679、ZADH2抑制剂后对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达水平均高于正常人肝细胞株(P<0.05),数据库中共筛选出6个在肝癌中下调的基因:GLUD1、B3GAT1、SLC46A3、MAP2K3、ATF5、ZADH2;qPCR检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2表达升高(P<0.01);转染miR-3679抑制剂后荧光素酶活性升高(P<0.01);Western blot检测miR-3679 inhibitor组中的ZADH2蛋白表达高于NC组(P<0.01);EdU分析检测miRNA-3679 inhibitor组阳性细胞数低于NC组及Inhibitor NC组(P<0.05);miR-3679inhibitor+si-ZADH2组克隆计数多于miR-3679 inhibitor组(P<0.01);流式细胞术检测提示miR-3679 inhibitor+si-ZADH2组细胞凋亡数目低于miR-3679 inhibitor组(P<0.01)。结论 miRNA-3679在肝癌细胞中显著高表达,可直接作用于ZADH2基因并影响其表达,且通过抑制ZADH2发挥促进HCC细胞的增殖及抑制其凋亡。