实时荧光PCR快速检测水产品中副溶血性弧菌的研究

目的建立快速检测水产品中副溶血性弧菌的实时荧光PCR方法。方法利用副溶血性弧菌TDH基因的保守序列设计引物和探针，建立快速检测副溶血性弧菌的实时荧光PCR方法。结果本研究建立的检测副溶血性弧菌的实时荧光PCR方法．其纯菌检测低限低于10cfu／PCR反应体系；对模拟阳性样品直接检测，检测低限为103cfu／g。模拟样品经增菌培养4～6h后，检测低限达1cfu／g；用本法对24株标准菌株／参考菌株进行检测，结果除副溶血性弧菌呈阳性外．其他23株非副溶血性弧菌均呈阴性反应；重复性试验结果：批内和批间变异系数均小于1％。结论本研究建立的副溶血性弧菌实时荧光PCR方法具有快速、灵敏、特异和重复性好的优点，可在8h内对水产品中的副溶血性弧菌进行定性或定量检测。

多重荧光PCR检测水产品致病菌方法的建立与应用研究

根据沙门氏菌invA基因、副溶血性弧菌toxR基因和大肠杆菌O157:H7RFBE基因的保守序列,设计引物和探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度和特异性,建立了可同时检测上述三种致病菌的多重实时荧光PCR方法。该方法对纯菌的检测灵敏度均低于10cfu/PCR反应体系。人工染菌样品经6h增菌,检测的灵敏度可低于10cfu/25g;对48株标准/参考菌株的检测结果,只有目的菌株呈阳性反应;而定量检测批内和批间的变异系数均小于2%。应用本法检测人工染菌样品和进出口水产品样品,结果与SN标准方法检测结果一致。本法可在8h内完成对水产品中上述三种致病菌的定性或定量检测,可适应于进出口水产品的快速检验。

沙门菌和副溶血性弧菌双重荧光PCR快速检测方法的建立

根据沙门菌invA基因和副溶血性弧菌toxR基因的保守序列设计引物和探针,通过优化反应条件与参数,建立了可同时检测沙门菌和副溶血性弧菌的双重荧光PCR方法。结果显示,该方法敏感度高,特异性强,重复性好。对沙门菌和副溶血性弧菌的检测低限均低于每反应体系10CFU,经对29株非目标菌进行检测均呈阴性,而定量检测批内和批间的变异系数均小于2%;应用该方法检测人工染菌样品和实际样品,结果与SN标准方法的检测结果一致;应用该法可在8h内完成对样品中沙门菌和副溶血性弧菌的同步检验。