甘草酸二铵对于HCV相关性B-NHLCD25^-和CD25^+T细胞增殖影响研究

目的:本研究初步探究甘草酸二铵(Diammonium Glycyrrihizinate,DG)对HCV相关性B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-cellnon-Hodgkin's lymphoma,B-NHL)CD25-T细胞、CD25+T细胞的免疫调控作用。方法:应用流式细胞分析仪检测HCV相关性B-NHL CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例、CD25+细胞占总PBMC比例,并与单纯HCV感染患者、健康人检测结果相对照。应用免疫磁珠分离法(MACS)分选获得CD25-和CD25+细胞,将两者和未分选的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC)以CFSE标染孵育72小时后,应用流式细胞分析仪将APC CD3阳性细胞设定为门检测CD25-T细胞、未分选T细胞、CD25+T细胞的增殖情况,及甘草酸二铵干预后的CD25-T细胞、CD25+T细胞增殖情况。结果:应用流式细胞分析仪检测健康人、单纯HCV感染者和HCV相关性B-NHL患者在CD4+CD25+占总CD4+细胞比例和CD25+占总细胞比例上均呈现逐步递增的关系(分别为33.94%±2.18%,57.95%±1.77%,70.24%±12.75%,P<0.05;18.16%±2.23%,33.45%±1.32%,54.69%±8.66%,P<0.05)。CFSE标染后孵育72小时检测(M1+M2)分裂相百分比呈现CD25-T细胞最高、未分选T细胞其次、CD25+T细胞最低的表现(分别为74.4%±1.2%,63.1%±5.4%,47.2%±5.9%,P<0.05)。甘草酸二铵干预后CD25-T细胞较未干预CD25-T细胞M1分裂相百分比增加(分别为57.7%±4.2%,46.5%±5.6%,P<0.05)。甘草酸二铵干预后CD25+T细胞较未干预CD25+T细胞M1分裂相百分比减少(分别为14.7%±1.3%,22.1%±4.1%,P<0.05)。结论:HCV相关性B-NHL CD4+CD25+、CD25+细胞百分比较单纯HCV感染者、健康人明显增加,提示存在T细胞免疫抑制,且抑制程度重于单纯HCV感染。去除CD25+细胞后CD25-T细胞增殖较未去除CD25+的T细胞增殖活跃,说明HCV相关性B-NHL患者的CD25+细胞能够抑制CD25-T细胞增殖。而DG干预后HCV相关性B-NHL CD25+T细胞增殖M1分裂相减少,而CD25-T细胞增殖M1分裂相增加,表明DG对HCV相关性B-NHL具有抑制CD25+T细胞增殖而促进CD25-T细胞增殖的积极免疫调节作用。

甘草酸二铵对丙型肝炎病毒相关性淋巴瘤单核细胞PD-1表达的影响

目的初步探究甘草酸二铵(DG)对丙型肝炎病毒相关性淋巴瘤(HCV-NHL)患者单核细胞PD-1表达的免疫调控作用。方法从健康人、单纯丙型肝炎病毒(HCV)感染者和HCV-NHL患者的外周血中分离外周血单个核细胞(PB-MC),体外培养刺激后,应用流式细胞仪分析健康人、单纯HCV感染者和HCV-NHL患者CD14+PD-1+细胞占CD14+总单核细胞的比例;HCV-NHL患者PBMC加入DG和阳性对照HCV核心抗原干预后较HCV-NHL空白对照CD14+PD-1+细胞占CD14+总单核细胞比例的变化情况。结果与健康人比较,单纯HCV感染者和HCV-NHL患者CD14+PD-1+/CD14+均明显升高,并且HCV-NHL患者较单纯HCV感染者升高明显,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。HCV-NHL+HCV核心抗原组CD14+PD-1+/CD14+比例较HCV-NHL空白对照明显增加,而HCV-NHL+DG组CD14+PD-1+/CD14+比例较HCV-NHL+HCV核心抗原组明显降低,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HCV-NHL患者单核细胞程序性死亡通路激活增加,且程度重于单纯HCV感染,DG可以降低HCV-NHL患者单核细胞PD-1+的高表达。