旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析

目的 获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。 方法 旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入 PET- 2 8a(+)表达载体 ,异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物 ,SDS- PAGE、 EL ISA和 Western blotting对表达产物进行分析鉴定 ,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果 SDS- PAGE结果显示 ,表达产物为分子量约为 4 0 k Da的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别 ,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。 结论 获得一个新的旋毛虫成虫 Ts87基因重组蛋白 ,该蛋白具有特异的抗原性。

旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化

目的 为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因 ,本文原核表达了PET - 2 8a(+) /Ts87重组质粒 ,并纯化鉴定了该蛋白。方法 将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET - 2 8a(+) ,形成重组质粒PET - 2 8a(+) /Ts87,转化后经IPTG诱导得到表达蛋白 (约 4 0kDa) ,利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析纯化目的蛋白 ,进行复性 ,并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果与结论 成功构建了PET - 2 8a(+) /Ts87,SDS -PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,经过亲和层析得到纯化的目的蛋白 。