腺苷干预人结直肠癌SW480细胞RECK基因甲基化及其机制

目的探讨腺苷干预人结直肠癌SW480细胞RECK基因甲基化及其机制。方法分别用0、3.0 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测RECK基因启动子区Cp G岛甲基化情况;逆转录PCR、Western blot、流式细胞仪检测腺苷处理前后RECK基因mRNA和蛋白的表达、甲基转移酶(methyltransferases DNMT1,DNMT3a)蛋白表达及细胞凋亡的变化。结果腺苷干预后RECK基因甲基化程度明显低于对照组[(49.14±2.38)%vs(74.84±2.38)%,P<0.01];腺苷干预后RECK基因mRNA转录及蛋白表达、细胞凋亡均明显高于对照组[0.335 3±0.350 2 vs 0.080 0±0.003 6,0.603 0±0.017 8 vs 0.090 0±0.003 0;(27.90±2.32)%vs(5.09±0.30)%,P<0.01];甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a)蛋白表达均明显低于对照组(0.141 3±0.002 1 vs 0.645 0±0.009 2,0.130 0±0.004 6 vs 0.526 7±0.009 5,P<0.01)。结论腺苷通过抑制甲基转移酶的活性,降低RECK基因DNA启动子区域的甲基化水平,使RECK基因mRNA及蛋白表达水平增加,促使SW480细胞凋亡。

腺苷对人结直肠癌细胞hMLH1基因甲基化的影响

目的 探讨腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响.方法 分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,采用亚硫酸氢盐测序（BSP）法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况、反转录PCR法检测hMLH1 mRNA的表达、Western印迹法检测hMLH1蛋白的表达、采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96 h后通过四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测各组细胞活力.结果 腺苷干预后1.5、3.0、4.5 mmol/L各组甲基化程度分别为65％±4％、45％±11％和16％±4％,均明显低于对照组（80％±4％,均P＜0.01）;hMLH1 mRNA转录水平、蛋白表达水平、细胞凋亡水平均明显高于对照组（0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019比0.079±0.010,0.353±0.016、0.654±0.018和0.854 ±0.014比0.126±0.016,11.9％±0.6％、20.0％±1.8％和35.8％±1.8％比3.9％±1.4％,均P＜0.01）.MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后,各组细胞活力均明显低于对照组（均P＜0.05）,有一定的时间-剂量依赖性.结论 腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态,使hMLH1表达增加,抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡.