抗BP180N C16A IgG亚型检测方法的建立以及在大疱性类天疱疮中的意义

目的建立抗BP180NC16A IgG亚型的检测方法，并探讨其在大疱性类天疱疮（BP）中的意义。方法原核表达GST—NC16A融合蛋白，并采用亲和层析法纯化。优化ELISA关键环节，建立抗BP180NC16AIgG各亚型的ELISA检测方法，并对10例未经治疗的BP、5例妊娠疱疹、1例成人线状IgA大疱性皮病、2例天疱疮患者血清分别进行检测。结果通过方阵测定法确定GST—NC16A融合蛋白的包被浓度为500μg／L，包被条件为4℃12h，血清稀释倍数为1：100，酶标二抗为1：2000，孵育条件为37℃1h，底物反应条件37℃20min。10例大疱性类天疱疮患者10例IgG1阳性，9例IgG2阳性，5例IgG3阳性，9例IgG4阳性。2例寻常型天疱疮、1例成人线状IgA大疱性皮病均阴性。5例妊娠疱疹所有亚型均阳性，以IgG1和IgG3亚型为主。结论抗BP180NC16AELISA检测法特异性强、重复性好，是检测BP和妊娠疱疹患者抗BP180NC16A抗体亚型的半定量方法。

大疱性类天疱疮和妊娠疱疹患者血清抗BP180NC16A抗体的纯化和鉴定

目的 探讨大疱性类天疱疮（BP）和妊娠疱疹（HG）患者血清抗BP180 NC16A抗体的纯化和鉴定方法.方法 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达GST/NC16A融合蛋白,将融合蛋白与谷胱甘肽琼脂糖凝聚微珠进行共价偶联.微珠亲和层析法纯化BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A抗体,并用ELISA、免疫荧光、及Western印迹进行鉴定.结果 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达37 000GST/NC16A融合蛋白,微珠亲和层析法纯化后得单一抗BP180 NC16A抗体.经ELISA方法定量后确定其含量为2.4 mg/ml；该抗体能与人皮肤基底膜带结合,证明抗体活性；免疫印迹可见单一片段,显示抗体纯度.结论 微珠亲和层析法纯化的BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A自身抗体活性高、特异性强.