体外缺血/再灌注神经元DNA损伤的初步研究

目的和方法 :应用胎鼠皮层细胞原代培养 ,建立神经元的体外“缺血 /再灌注”模型 ,观察神经元缺血 /再灌注后DNA链的损伤。应用PANT和TUNEL染色分别检测缺血 /再灌注后DNA单链和双链损伤。结果 :神经元缺糖缺氧 2h引起极少量细胞死亡 ,4h引起少于 30 %的细胞死亡 ,而 6～ 8h的缺糖缺氧引起的细胞死亡数量达到80 %以上 ,6h缺糖缺氧再灌注 10～ 18h ,细胞死亡达高峰 ,而在 8h缺糖缺氧再灌注 2h细胞死亡已经达高峰。在缺糖缺氧 2 ,4 ,6 ,8h再灌注 5min ,PANT阳性细胞分别达 30 % ,5 0 % ,80 % ,90 %。而在同样的情况下 ,TUNEL染色阳性细胞数没有明显增加。结论 :体外神经元缺糖缺氧再灌注早期即出现DNA链的损伤 ,且以单链损伤为主。

真核表达载体pcDNA3.1(+)tPA的构建

组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ）具有高效、特异的溶栓作用。将人ｔＰＡｃＤＮＡ与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）重组，构建一种无形成病毒及激活原癌基因之虞的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｔＰＡ，以探讨其对纤溶活性的影响。用分子克隆方法，成功地构建了ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｔＰＡ真核表达重组体。初步结果显示，ｔＰＡ基因在基因工程改造的细胞中得到有效表达，血浆纤溶活性明显升高。