葡萄糖调节蛋白78在复合致病因素诱导的大鼠肝肺综合征中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肝肺综合征发病中的作用及其与肠源性内毒素血症的关系。方法:Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并肝肺综合征(HPS)模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。采用HE染色观察肺组织病理变化;测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、TNF-α和肺组织匀浆中的TNF-α、丙二醛(MDA)的含量。Western blotting和RT-PCR法检测肺组织标本中GRP78蛋白和mRNA表达水平。结果:模型组动物血浆内毒素含量随病程进展逐渐增高;肺组织中GRP78蛋白和mRNA的表达随HPS进展逐步增高,且各时点间的表达有显著差异(P<0.05);血浆内毒素与升高的GRP78蛋白水平间呈高度正相关(P<0.01)。血浆ALT和TNF-α含量以及肺组织匀浆中TNF-α和MDA含量随病程进展逐渐增高;血浆内毒素含量以及肺组织中GRP78蛋白分别与血浆TNF-α和肺组织中TNF-α、MDA的含量呈高度正相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物血浆TNF-α含量、肺组织匀浆TNF-α、GRP78蛋白及mRNA均显著高于正常对照组(P<0.05)。在第6周和第8周,模型组动物血浆内毒素和ALT的含量以及肺组织匀浆中MDA的含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:肝硬化时形成的肠源性内毒素血症作为内质网应激的重要应激原,通过氧化应激激活肺组织的内质网应激反应导致GRP78表达增高,很可能是HPS发病的重要机制。

GRP78在肝硬化大鼠肠源性内毒素血症引发心脏病变中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在肝硬化大鼠肠源性内毒素血症引发心脏病变中的作用。方法:51只Wistar雄性大鼠随机分为肝硬化模型4周组、6周组、8周组和同期正常对照组。于第8周检测大鼠心功能;检测各组心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和丙二醛(MDA)水平;甲苯胺蓝染色和van Giesan染色分别观察心肌细胞数量的变化和计算心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测心肌组织GRP78和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达情况。结果:随肝硬化病程进展:(1)肝硬化8周组大鼠左室舒张末期压(LVEDP)及左室内压最大上升和下降速率(±LV dp/dtmax)均较对照组降低(P<0.05);(2)心肌组织中TNF-α、MDA、CVF、GRP78蛋白和HIF-1α蛋白水平均逐渐升高并显著高于正常对照组(P<0.05);(3)甲苯胺蓝染色显示模型各组心肌细胞数量逐渐减少并显著低于正常对照组(P<0.05);(4)血浆中内毒素水平分别与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、同型半胱氨酸(Hcy)、TNF-α、GRP78和MDA呈显著正相关(P<0.05);(5)GRP78蛋白分别与HIF-1α、Hcy、MDA、ALT和CVF呈显著正相关(P<0.05)。结论:肝硬化大鼠伴发的肠源性内毒素血症通过直接或间接作用引起内质网应激和GRP78表达增加,后者可能是引起心肌重构、导致心脏功能变化的关键分子。

丹参素对肝肺综合征大鼠肺脏的保护作用

目的:探讨丹参素减轻肝肺综合征大鼠肺组织炎性损伤的作用。方法:SD大鼠被随机分为正常对照组(n=8)、肝肺综合征组(n=11)和丹参素干预组(n=9)。采用HE染色观察肝及肺组织病理改变,计数肺组织巨噬细胞;测定血浆丙氨酸转氨酶(ALT)的活性以及内毒素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和同型半胱氨酸(Hcy)的浓度及肺组织匀浆中TNF-α、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)的含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果:与正常对照组相比,肝肺综合征组动物肺泡腔变小、间隔增厚、肺泡腔内和间隔内有大量巨噬细胞聚集,且体积明显增大。与肝肺综合征组相比,丹参素干预组肺组织巨噬细胞数量明显减少、病理改变显著减轻。肝肺综合征组大鼠血浆ALT的活性和内毒素、TNF-α、Hcy的浓度以及肺组织中TNF-α、NO和MDA含量以及iNOS的活性,均高于正常对照组,而使用丹参素干预后各指标均明显降低。结论:丹参素可能通过降低肠源性内毒素,减轻肺组织的炎性反应,延缓肝肺综合征的进展。

葡萄糖调节蛋白78在大鼠肝肺综合征肺微血管重构中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)引发大鼠肝肺综合征(HPS)肺微血管重构的机制。方法:Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并HPS模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。免疫组化染色法观察肺组织GRP78、Ⅷ因子相关抗原(FⅧ-RAg)C/EBP同源蛋白(CHOP)/生长阻滞及DNA损伤诱导蛋白153(GADD153)、caspase-12、Bcl-2和核因子(nuclear factor,NF)-κB的表达。RT-PCR和Western blotting法检测肺组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白表达水平。结果:模型组动物肺组织中GRP78、FⅧ-RAg及VEGF蛋白的表达随HPS进展逐步增高,CHOP/GADD153及caspase-12的表达随HPS进展逐步降低,Bcl-2和NF-κB随病程进展表达逐渐增加,NF-κB尤以胞核表达增高明显。GRP78与FⅧ-RAg及VEGF蛋白水平呈明显正相关(P<0.01),而与CHOP/GADD153及caspase-12的表达呈明显负相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物肺组织GRP78和FⅧ-RAg显著高于正常对照组;VEGF蛋白和mRNA均显著高于正常对照组;而CHOP/GADD153及caspase-12的表达均低于正常对照组(P<0.05)。结论:GRP78可能通过促进血管内皮细胞增殖和抑制其凋亡,促进肺微血管重构,导致HPS的发病。

微小残留白血病检测在AML治疗及预后判断中的意义

急性髓细胞白血病（AML）是较为常见的造血系统恶性克隆性疾病,尤其是成人急性白血病。据国外文献报道,大剂量化疗后完全缓解率约为50%-80%,但由于缓解后复发,仅30%-40%的年轻患者,不及20%的老年患者能达到长期无病生存。

HIV-1gp41胞外域对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响

目的探讨HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响。方法以人脑微血管内皮细胞作为体外血脑屏障模型,在细胞培养玻片或transwell小室上长成单层,用HIV-1 gp41-I90预处理后,再用新生隐球菌感染细胞单层,免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白actin(肌动蛋白)和filamin(肌动蛋白连接蛋白)的形态变化,并测定gp41-I90处理的人脑微血管内皮细胞单层对辣根过氧化物酶和新生隐球菌的通过率。结果 gp41-I90能明显增强新生隐球菌所致的人脑微血管内皮细胞骨架蛋白actin和filamin的改变,actin和filamin的丝状排列扭曲,纹理稀疏;gp41-I90处理的人脑微血管内皮细胞单层通透性增强,对辣根过氧化物酶和新生隐球菌的通过率明显增加。结论 HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽促进新生隐球菌黏附和侵入血脑屏障,与其增强新生隐球菌所致人脑微血管内皮细胞骨架改变有关。

葡萄糖调节蛋白78促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其机制

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白重链结合蛋白(GRP78/BiP)是否促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其发生机制。方法:采用复合致病因素法建立肝硬化大鼠模型,在4周、6周和8周分别取材。实验1:取心脏称重并测量左室壁厚度,计算左室壁厚度与心脏重量比值及心脏指数。实验2:TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况;免疫组化方法检测心肌组织中GRP78/BiP蛋白以及凋亡相关蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/生长停滞及DNA诱导蛋白153(CHOP/GADD153)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白2(Bcl-2)的表达。结果:随肝硬化病程进展,左室壁厚度与心脏重量比值以及心脏指数逐渐增加,8周组增加显著(P<0.05);心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153和caspase-12阳性蛋白表达指数逐渐升高,8周组差异显著(P<0.05);NF-κB p65和Bcl-2阳性蛋白表达指数呈一致性变化,在4周组较其它组明显增高(P<0.05);GRP78/BiP蛋白阳性表达指数与心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153、caspase-12蛋白阳性表达指数呈显著正相关,CHOP/GADD153与NF-κB p65、Bcl-2蛋白阳性表达指数呈显著负相关。结论:GRP78高表达在内质网应激介导的肝硬化心肌病发病中可能发挥重要作用。

肌节同源盒基因同系物2对小鼠晶状体发育的影响

目的观察肌节同源盒基因同系物2(Msx2)表达缺失后晶状体早期发育过程的变化,探讨Msx2对晶状体早期发育的影响。方法利用Msx2基因敲除小鼠胚胎,采取组织学染色及免疫组织化学方法观察晶状体发育过程中的异常变化及细胞增殖情况。结果Msx2基因敲除后,晶状体的发育受到明显的抑制,晶状体早期发育迟缓,晶状体与角膜组织分离延迟。同时Msx2表达缺失使晶状体细胞溴脱氧尿核苷(BrdU)标记比例下降。结论Msx2基因敲除小鼠晶状体发育出现异常,晶状体发育异常的原因之一是晶状体发育过程中晶状体上皮细胞细胞增殖受到抑制。

表观遗传学与视网膜疾病的关联研究

表观遗传学是指在DNA序列无变化的情况下，基因表达状态发生可遗传的改变的情况，是目前基因组测序后人类基因组的重大研究方向之一。表观遗传学的本质是表观遗传修饰，其对基因表达与功能的调节方式主要包括DNA甲基化、组蛋白乙酰化及非编码RNA，如小RNA（miRNA）。研究认为，表观遗传学在多种视网膜疾病的发病过程中发挥重要作用，许多动物实验研究均表明，表观遗传学可能与视网膜纤维化、视网膜色素变性（RP）、年龄相关性黄斑变性（AMD）、糖尿病视网膜病变（DR）等视网膜疾病的发病均有重要关联。通过对表观遗传学认识的加深和理解，一些与表观遗传学相关的药物正在临床试验中，有望用于视网障疾病的治疗．

心脏再生的研究进展

冠心病及心肌梗死的发生率正呈逐年上升趋势,成人心肌细胞有限的再生能力限制了心肌梗死后心脏功能的恢复。斑马鱼及新生乳鼠心脏再生能力的发现给该领域带来了新的方向及希望。心脏再生动物模型种类日渐丰富,不同的生物模型对于不同的研究目的有着重要的作用。本文总结了近年来心脏再生动物模型的发展,并对心脏再生机制探索中所取得的重要研究进展进行论述。

低氧诱导因子在肝肺综合征大鼠肺组织中的表达及其与糖调节蛋白78的关系

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大鼠肝肺综合征(HPS)发病中的作用及其与糖调节蛋白78(GRP78)的关系。方法复合致病因素法制备HPS大鼠模型。Western blotting法检测肺组织HIF-1α、血管内皮生长因子164(VEGF164)及GRP78蛋白表达水平。免疫组化染色法观察肺组织VEGF受体2(VEGFR-2)及CD105的表达。结果模型组动物肺组织HIF-1α蛋白表达水平在第8周显著高于同期正常对照组及4周、6周组;GRP78蛋白表达随病程进展逐渐升高,至第8周达到最高水平,各时间点之间以及与同期正常对照组比较差异均具有统计学意义;VEGF164蛋白表达随病程进展逐渐增加,至6周达到高峰,各时间点均显著高于同期正常对照组,6周和8周表达水平显著高于4周;VEGFR-2及CD105免疫组化染色强度和数量均随HPS进展逐渐增高;GRP78分别与VEGF164、VEGFR-2及CD105的表达水平呈正相关(P<0.05),HIF-1α与GRP78亦呈正相关关系(P<0.05)。结论 HIF-1α可能在HPS发病中起一定作用,与GRP78共同促进了肺微血管重构。

增生性玻璃体视网膜病变的研究进展

增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)是裂孔源性视网膜脱离手术失败最常见的原因。研究结果表明 ,PVR是视网膜脱离手术后的创伤愈合反应。随着视网膜的创伤 ,活化的视网膜色素上皮细胞 ,胶质细胞 ,纤维母细胞等增殖、迁移 ,与细胞外间质共同形成了PVR膜而导致牵引性视网膜脱离。就PVR的治疗而言 ,早期在于控制炎症 ,中期主要是抑制细胞增殖 ,晚期着重于防止纤维化的形成。着重就PVR的危险因素、临床分类、病理、手术处理以及最新的药物治疗进展做综合归纳。

表观遗传学简介

最近几年，表观遗传学已经成为生物医学研究的热点。表观遗传学是指表观遗传学改变（DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNAs如miRNAs）对表观基因组基因表达的调节，这种调节不依赖基因序列的改变且可遗传。表观遗传学因素如DNA甲基化、组蛋白修饰和miRNA是对环境刺激因素变化的反映，这些表观遗传学因素相互作用以调节基因表达，控制细胞表型，所有这些表观遗传学因素都是维持机体内环境稳定所必需的，有助于正常生理功能的发挥，但表观遗传学异常也是很多疾病发生的原因。除此之外，表观遗传学药物已经应用于临床试验特别是癌症的治疗。因此了解表观遗传学机制在人类疾病发生中的作用和表观遗传学调节剂对疾病治疗的价值将会迎来生物医学研究的表观遗传学时代。

肿瘤坏死因子在年龄相关性黄斑变性脉络膜新生血管膜中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)及其他相关炎性因子在年龄相关性黄斑变性(ARMD)脉络膜新生血管膜(CNVM)中的表达。方法采用免疫组织化学染色法检测手术切除的ARMD患者的CNVM中TNF-α的表达。结果所有检测的10例CNVM TNF-α染色呈阳性。阳性染色细胞以视网膜色素上皮(RPE)细胞及巨噬细胞为主,且多见于新生血管增殖活跃的区域。其他炎性反应因子例如ICAM-1及HLA-DR也有所表达。结论TNF-α很可能是脉络膜新生血管形成的重要病理因素之一。

CD4^＋CD25^＋CD127^low/-T细胞在系统性红斑狼疮活动期患者中的表达

目的检测调节性T细胞（Treg）的新旧标志，进一步探讨Treg细胞在系统性红斑狼疮（SLE）发病中的作用。方法采用三色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测29例SLE患者及24例正常对照组外周血CD4^＋CD25^＋CD127^low/-T细胞、CD4^＋CD25^highT细胞及CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞的比例，同时检测外周血抗dsDNA等抗体及免疫球蛋白、补体等水平并进行相关分析。结果SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^low/-T细胞与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05），CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞[（2．1±1．2）％]及CD4^＋CD25^highT细胞[（0．8±0．4）％]与正常对照组[（1．8±0．8）％及（4．0±1．4）％]比较差异有统计学意义（P〈0．01）；SLE组3种细胞占CD4^＋CD25^＋T细胞的比例均明显低于正常对照组（均P〈0．01），CD4^＋CD25^＋CD127^low／-T细胞、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞及CD4^＋CD25^highT细胞分别占CD4^＋CD25^＋T细胞的比例及与年龄、性别和病程，Igg、IgA、IgM、尿蛋白，24h蛋白尿，抗dsDNA、抗C1q、抗核小体抗体水平均无相关性（均P〉0．05）；但其与SLEDAI评分均存在负相关（P〈0．05）。仅CD4^＋CD25^＋GD127^low/-T细胞／CD4^＋CD25^＋T细胞与补体C4存在明显的负相关（P〈0．01）。结论Treg细胞与活化的CD4^＋T细胞的相对比例可能在SLE的发病中起到重要作用。

眼科表观遗传学研究进展

表观遗传学是近些年兴起的一门遗传学研究的新分支。表观遗传现象不是通过改变核酸的序列来影响基因的表达，而是通过DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA调节等方式对基因的功能与表型进行调控；这种调控受环境、饮食等因素的影响，并且可能遗传给下一代个体。表观遗传现象涉及生命发育、人体正常生理功能的维持以及众多复杂的病理现象，如炎症、衰老、肿瘤发生等。一些复杂性眼病的发生，如单纯疱疹性角膜炎的复发、青光眼、色素膜炎、年龄相关性黄斑变性等眼病可能与表观遗传学因素有密切关联，大力开展眼科表观遗传学研究可能为研究这些眼病的发病机制及治疗提供新的思路及方法。

甜菜碱对大鼠肝纤维化的保护作用研究

目的观察甜菜碱对复合致病因素诱导肝纤维化大鼠的保护作用。方法复合致病因素法诱导制备肝纤维化大鼠模型,观察灌服甜菜碱对肝纤维化大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、内毒素(ET)、同型半胱氨酸(Hcy)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、IV胶原蛋白(IV-C)、Ⅲ型前胶原蛋白(PC-Ⅲ)及肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、过氧亚硝酸盐阴离子(ONOO-)、丙二醛(MDA)的变化,并采用HE和VG染色分别观察肝损伤和肝纤维化情况。结果大鼠肝纤维化模型复制成功。给与三个剂量的甜菜碱后,肝组织病理损伤改善。反映大鼠肝功能(ALT、AST)及肝纤维化指标(HA、LN、IV-C)的水平不同程度降低。血清内毒素、肝组织NO、MDA水平亦明显降低。同时Hcy及ONOO-在中、高剂量组明显降低,而TNF-α的降低在高剂量组中也具有明显的统计学差异。结论甜菜碱可抑制复合因素诱导的大鼠肝纤维化,其作用可能是通过降低大鼠体内高同型半胱氨酸、调节炎性细胞因子和氧化应激实现的。

系统性红斑狼疮患者外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞的检测和意义

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞(Treg)的百分比,并分析其与疾病活动的相关性。方法采用流式细胞仪检测28例SLE患者(其中活动组18例)及22名正常对照组的外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+Treg的百分比,同时评估SLE疾病活动指数(SLEDAI)及检测血抗dsDNA水平,分析相关性。结果SLE患者外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+Treg占CD4^+ T细胞的百分比较对照组降低(P<0.05),以活动组尤为明显,CD4^+CD25^+FOXP3^+Treg的百分比与SLEDAI呈明显的负相关(P<0.01),同时显示血抗dsDNA阳性组较阴性组患者外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+Treg的百分比显著下降(P<0.01)。结论SLE患者外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+Treg的百分比在活动期下降为明显,其在SLE的发病机制中可能起到重要的作用。

衰老与年龄相关性黄斑变性

衰老是导致眼部生物学改变的常见原因,特别对视网膜组织的影响更明显。已往的研究发现,年龄相关性黄斑变性(AMD)的病理改变主要表现为视网膜色素上皮的Bruch膜和脉络膜毛细血管复合体的变化,该复合体随着年龄的增加其功能和结构亦发生异常改变。衰老因素在AMD早期阶段的病理改变中起重要作用,但衰老因素并不是导致AMD的直接原因,有多种因素涉及AMD的病理始动过程。为此,该文作者就新近有关衰老因素对AMD发生过程的影响进行了简要综述,旨在探讨衰老与AMD的关系。(中华眼科杂志,2006,42:278-282)

WNK4基因在M1细胞中瞬时和稳定表达的位置和作用

目的探讨WNK4（With No K=lysine）基因在鼠肾皮质集合管细胞（M1）中的表达位置和生理作用。方法构建PCSPT-mWNK4-kxx质粒,瞬时转染M1细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的WNK4基因在M1细胞中表达位置。构建PTrepWNK4质粒,转染M1Tet-Off细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的WNK4基因在稳定转染M1Tet-Off细胞中表达位置,采用免疫沉淀和Western blot检测WNK4蛋白质表达,采用电压计检测WNK4基因过表达对M1单层细胞跨上皮电阻（TER）的作用。结果瞬时转染野生型WNK4基因,其蛋白质主要在M1细胞的胞膜表达,部分在胞浆。在稳定转染的M1Tet-Off细胞株,野生型WNK4基因表达于细胞的胞膜,免疫沉淀和Western blot结果显示Myc抗原标记的野生型WNK4蛋白在M1Tet-Off细胞中表达。电生理研究显示野生型WNK4基因过表达显著降低M1单层细胞TER。结论野生型鼠WNK4基因主要在M1细胞的胞膜表达,部分表达在胞浆。WNK4基因过表达降低单层细胞跨上皮电阻,增加相邻细胞的通透性,为进一步研究WNK4基因在高血压中的分子机制及其在肾脏的生理功能打下基础。