新生儿咽拭子检测在诊断单纯疱疹病毒先天性感染中的意义

目的以巢式PCR检测新生儿脐带血中单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD基因和HSV-2 gG基因并用测序确认的结果为参比,分析利用新生儿咽拭子检测相应病毒基因在诊断新生儿HSV先天性感染中的意义。方法采集顺产新生儿抗凝脐带血35份,同时采集咽拭子35份。采用检测HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因的PCR法检测新生儿脐带血和咽拭子标本DNA,阳性扩增结果确认后,比较咽拭子检测与脐带血检测结果,以及咽拭子检测特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值4个指标,分析新生儿咽拭子检测能否为诊断HSV先天性感染提供依据。结果 35份脐带血中HSV-1阳性率28.6%(10/35),咽拭子HSV-1阳性率25.7%(9/35),两者差异无统计学意义。脐带血中HSV-2阳性率22.8%(8/35),咽拭子HSV-2阳性率28.6%(10/35),两者差异无统计学意义。HSV-1两种标本检测一致率68.6%;HSV-2两种标本一致率77.1%。咽拭子HSV-1、HSV-2检测灵敏度分别为40.0%和62.5%,特异性分别为80.0%和84.6%,阳性预测值分别为44.4%和50.0%,阴性预测值分别为76.9%和88.0%。结论以新生儿脐带血单核细胞中HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因检测结果为参比,新生儿咽拭子检测与脐带血检测具有较高的一致性,表明咽拭子检测用于新生儿HSV先天性感染诊断具有重要的临床应用价值。

水痘-带状疱疹病毒疫苗的评价与研究进展

水痘-带状疱疹病毒(VZV)属疱疹病毒α亚科,即人类疱疹病毒3型,为双链DNA病毒。原发感染可引起具有高度传染性的全球流行性疾病——水痘;潜伏病毒的再激活感染可引发典型的疼痛性皮肤病——带状疱疹及不典型的内脏器官感染。日本和美国分别自1987年和1995年开始实行给全体儿童预防接种水痘减毒活疫苗(vOka)后,两国儿童的水痘发病率和病死率显著降低。但VZV疫苗的不良反应,包括二次传播和突破感染等时有发生,因此有必要研发更为有效、安全的新型疫苗。本文就VZV相关疫苗的有效性、安全性及其新型疫苗的研究进展进行综述。

疫苗株病毒引起1例成人水痘的病原分离与鉴定

本文旨在探讨1例由疫苗株病毒引起成人水痘的病例,以提高对水痘疫苗二次传播的认识。从1名23岁女性水痘患者皮肤水疱中采集水疱液,接种至人胚胎成纤维细胞,3d后观察到细胞发生病变效应。用水痘-带状疱疹病毒gE`糖蛋白单克隆抗体间接免疫荧光法鉴定,结果阳性。测序分析显示,分离到的毒株其疫苗相关的单核苷酸多态性位点与Oka疫苗株一致,为疫苗株病毒。回顾性调查显示,患者没有水痘史和疫苗接种史,病毒可能来自1名与患者直接接触的接种疫苗后发生带状疱疹的儿童。

新生儿人巨细胞病毒先天性感染危险因素筛查

目的通过检测新生儿脐带血中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)IgG抗体和gB基因,了解新生儿HCMV感染情况,并结合临床资料分析产妇年龄、Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV-Ⅰ)IgG抗体阳性、孕周与HCMV先天性感染的相关性。方法收集2010年11月～2011年6月期间,某市妇幼保健院就诊的健康产妇所娩新生儿脐带血,共178例。采用ELISA法检测脐带血血清是否存在HCMV IgG和HSV-ⅠIgG抗体,巢式PCR检测HCMV gB基因。结果产妇HCMV IgG阳性率为99.44%(177/178);产妇HSV-ⅠIgG阳性率为83.71%(149/178);新生儿脐血HCMV gB阳性率为32.02%(57/178);产妇年龄和HSV-ⅠIgG抗体阳性不是发生HCMV先天性传播的危险因素。结论针对早产和过期产儿,应该加强其HCMV先天性感染的早期诊断。

脐带血血浆在人巨细胞病毒垂直传播中的作用

目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集51份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后,进行HCMV UL55基因的巢式PCR检测,并随机抽取其中18份脐带血白细胞进行HCMV pp65抗原血症检测。结果 51份新生儿脐带血白细胞HCMV UL55 DNA阳性数为16份,阳性率为31.4%;同时进行检测的51份脐带血血浆HCMV UL55 DNA阳性数为17份,阳性率为33.3%,新生儿脐带血白细胞与血浆的标本阳性率差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。以新生儿脐带血白细胞HCMVUL55 DNA巢式PCR结果为标准,利用血浆巢式PCR检测的灵敏度为75.0%(12/16),特异度为85.7%(30/35),阳性预测值为70.6%(12/17),阴性预测值为88.2%(30/34)。随机抽取其中18份新生儿脐带血白细胞进行pp65抗原血症检测,阳性标本数为6份,阳性率为33.3%;与此18份血浆DNA巢式PCR结果相比较,两者差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。结论脐带血血浆在HCMV垂直传播中起携带并传播病毒的作用。

老年小鼠先天性潜伏感染人巨细胞病毒致大脑皮质细胞凋亡的研究

目的 观察先天性人巨细胞病毒（HCMV）潜伏感染至老年，对小鼠大脑皮质细胞凋亡的影响。方法 选择鼠龄为24个月HCMV先天性感染中枢神经系统模型小鼠。分为3组，每组6只，分别为：HCMV先天性潜伏感染老年鼠组（潜伏感染组）、HCMV先天性潜伏再激活感染老年鼠组（潜伏再激活感染组）和健康对照老年鼠组（健康对照组）。采用透射电镜、TUNEL法和流式细胞仪检测分析各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况。结果 电镜检测发现，同健康对照组比较，潜伏感染组和潜伏再激活感染组部分神经元细胞核染色体固缩、核物质碎片化、凋亡小体形成等特征性凋亡改变。TUNEL法和流式细胞仪检测发现健康对照组凋亡细胞最少，潜伏感染组凋亡细胞比率较健康对照组升高，而潜伏再激活感染组凋亡细胞最多；t检验潜伏感染组、潜伏再激活感染组与健康对照组凋亡率比较，差异均有统计学意义（均为P〈0．01）。结论 先天性感染HCMV后长期潜伏在小鼠的大脑皮质，至老年后可诱导细胞凋亡。

应用小瓶离心培养法分离检测2009年1—6月广州市成人流感样病例相关病毒

目的应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒，分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况，评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义。方法采集2009年1—6月广州市成人流感样病例患者标本652份，应用小瓶离心法（包括MDCK、HEp-2、LLC—MK2和MRC-54种细胞），离心接种后，通过观察CPE、血凝（HA）、血吸附（HAD）及直接免疫荧光法（IF）等方法进行病毒分离鉴定。结果652份成人流感样病例标本中共检出阳性161份，5种病毒病原体，病毒培养阳性率为24．69％，其中甲型流感病毒62株（62／161，38．51％），乙型流感病毒88株（88／161，54．65％），副流感病毒8株（8／161，4．96％），腺病毒2株（2／161，1．24％），呼吸道合胞病毒1株（1／161，0．62％k用小瓶离心培养法发出各种病毒培养报告的平均时间分别为：流感病毒2d、腺病毒3d、副流感病毒3d。结论（1）离心培养法具有快速、灵敏、高通量的特点，对临床实验室诊断病毒具有应用推广价值。（2）在分离的ILI病原体中，流感病毒占主导，乙型流感病毒为优势毒株，白2009年1月延续至6月，并呈逐步增多的态势，出现夏季高峰。

MCMV感染同种异型皮肤移植小鼠结肠炎模型的建立

利用小鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)感染同种异型皮肤移植小鼠,建立MCMV感染结肠炎症模型,从而为研究人类肠道疾病提供可靠的动物模型。采用鼻腔接种的方式感染同种异型皮肤移植的小鼠。①供体:C57BL/6雌鼠,18只;受体:BALB/c雌鼠,72只,鼠龄4～6周,体重14～20g/只;将C57BL/6小鼠的背部皮肤移植到BALB/c小鼠背部的移植床上,术后给BALB/c小鼠腹腔注射环孢素连续2周(12mg/kg.d)。②将移植后小鼠随机分组,每组24只,按接种病毒接种剂量分为104PFU组和105PFU组,同时设立阴性对照组,即鼻腔接种细胞悬液(1×106/mL)。每日观察动物排便情况及体重等总体情况变化;分别于病毒接种后第5、9、14和第21d取得小鼠结肠组织,通过组织病理学检测、原位杂交g、B RT-PCR、pp65免疫组化以及透射电镜的方法,观察检测小鼠结肠组织中MCMV与其组织病理变化之间的关联性。结果:在105PFU组中,小鼠出现厌食、嗜睡、活动能力明显下降,且发现该组小鼠的体重下降。在本研究中我们检验感染后第14d小鼠的结肠组织,发现感染组小鼠的近端结肠组织中粘膜层均变薄,同时其结构也被破坏;感染组小鼠的远端结肠组织中均出现淋巴样滤泡和粘膜层结构异常,其中105PFU组小鼠的结肠粘膜层的破坏得更严重;pp65免疫组化检验结果为MCMV蛋白阳性;原位杂交结果显示结肠组织中MCMV IE1基因阳性,MCMV gB基因RT PCR检测结果为阳性;透射电镜观察可见疱疹样病毒颗粒。而阴性对照组上述检测指标均为阴性。结果表明,在同种异型皮肤移植后小鼠鼻腔接种MC-MV,小鼠结肠发生了类似于人类结肠炎的病理变化。该结肠炎动物模型的建立将为进一步研究HCMV感染结肠的发病机理以及药物干预建立一个极为重要的平台。