小鼠MME基因真核表达载体的构建与鉴定

目的 克隆小鼠巨噬细胞金属弹力酶 (MME)基因结构域Ⅰ和Ⅱ ,构建真核细胞表达载体 ,用于动物肿瘤原位种植模型的研究。方法 通过PCR选择性扩增MME基因结构域Ⅰ和Ⅱ ,克隆入 pGEM T载体中 ,限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后 ,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3 1中 ,并进行双酶切及PCR鉴定。 结果 以MMEcDNA为模板进行PCR扩增的特异性片段在 75 0bp和10 0 0bp之间。以此构建的pGEM T MME克隆载体和表达载体 ,经限制性内切酶酶切证实载体中带有MME目的基因片段 ;与小鼠MMEcDNA序列的碱基符合率为 99 6 3% ;证明MME基因已正确克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3 1中。结论 成功构建了 pcDNA3 1 MME重组质粒 ,奠定了转基因研究MME表达与肿瘤生长转移关系的实验基础。